前列腺癌患者血清miR－21、PSA水平及意義

趙 宏，王玉華，馬志俊

（丹陽市人民醫院，江蘇 丹陽212300）

前列腺癌（prostatic carcinoma，PCa）是老年男性常見的的腫瘤，其已成為危害男性健康的第一位腫瘤［1］。據統計，2008年美國有186320例新增患者，其中28660例患者死于PCa，在我國，隨著生活水平、生活方式的改變，PCa的發病率及死亡率近年來有上升的趨勢［2］。PCa確診時往往已發展到中晚期，所以早期診斷及早期治療是降低該病死亡率的關鍵。血清前列腺特異性抗原（prostate－specigen，PSA）被公認為最具有臨床價值的前列腺癌標志物，但用PSA診斷前列腺癌仍缺乏足夠的敏感性和特異性。最近，研究發現腫瘤患者血清中含有大量穩定的miRNAs，血清中異常表達的miRNAs預示著它有可能成為一類新型的腫瘤標記物［3］。本研究旨在觀察前列腺癌患者血清miR－21和PSA水平，并且探討兩者的關系，以期為PCa的早期診斷提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2008年8月－2011年12月在本院接受治療的PCa患者48例，年齡51－77歲（≤65歲25例、＞65歲23例）。均經病理檢查證實診斷。均為初診患者，按TNM臨床分期標準，分為低分期組（T1－T2期）23例、高分期組（T3－T4期）25 例。患者血液標本離心取血清迅速置于－70℃超低溫冰箱。對照組標本采用50例正常人血清。標本采集征得病人及健康志愿者同意。

1.2 方法

1.2.1 血清 TPSA、FPSA 檢測采用 Roche Elecsys2010電化學發光免疫檢測儀以及配套試劑，參數按試劑說明書設置，得到TPSA、FPSA的濃度值，再計算FPSA／TPSA比值。

1.2.2 血清 miR－21檢測采用熒光定量 RT－PCR方法檢測miR－21水平，U6作為內參照，具體實驗步驟參照聶宇等［4］的文獻，引物如表1所示。結果采用相對定量法進行分析，采以2－△△ct表示前列腺癌患者血清中miR－21表達量相對于對照組血清的變化倍數。其中△△ct＝（Ct－CtU6）癌－（Ct－CtU6）正常。

表1 本研究所用引物

1.2.3 統計學方法 數據分析采用SPSS 12.0統計軟件。計量資料以±s表示，采用t檢驗；相關性采用直線相關分析。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清PSA含量 前列腺癌組患者血清TPSA含量高于健康對照組（P＜0.05）；前列腺癌組患者血清FPSA含量均高于健康對照組（P＜0.05）；而前列腺癌組FPSA／TPSA比值卻明顯低于健康對照組，差異均有統計學意義（P＜0.05）。本研究發現高分期組前列腺癌組患者TPSA含量和FPSA含量均高于低分期組（P＜0.05），高分期組FPSA／TPSA比值與低分期組差異無統計學意義（P＞0.05）。結果見表2。

表2 血清中TPSA、FPSA含量與比值（±s，ng／ml）

表2 血清中TPSA、FPSA含量與比值（±s，ng／ml）

50 1.38±0.87 0.49±0.21 0.36±0.08 PCa患者 48 19.21±12.04 1.97±1.75 0.10±0.06高分期PCa患者 25 25.21±17.23 2.43±1.81 0.10±0.07低分期PCa患者TPSA健康對照組組別 n TPSA（ng／ml）FPSA（ng／ml）FPSA／23 13.78±10.12 1.47±0.97 0.11±0.05

2.2 血清miR－21水平 熒光定量PCR結果顯示，前列腺癌患者外周血miR－21水平明顯高于健康對照組（P＜0.05），其中高分期組前列腺癌組患者外周血miR－21水平明顯高于低分期組（P＜0.05），結果見圖1.

圖1 各組外周血miR－21水平

2.3 相關性分析 前列腺癌患者外周血miR－21水平與 PSA 含量顯著正相關 （r＝0.340，P＝0.0022）；其中高分期組r＝0.450，P＝0.0001；低分期組r＝0.470，P＝0.000。

3 討論

MicroRNAs（miRNAs）是一類長度為21－25個核糖核苷酸的非編碼內源性小單鏈RNAs分子。其通過與靶基因mRNA的3′非編碼序列互補配對來影響mRNA的穩定性或抑制其翻譯，實現對蛋白表達的調控［5］。最近研究發現，血清／血漿中存在著大量循環的miRNA，不同腫瘤中miRNA的表達譜也不同，而在正常人群中血清miRNA則很穩定。Lawrie等［6］首次對血清miRNA進行研究，他們發現miR－21在血清中表達，且其表達水平與彌散性B細胞淋巴瘤患者的存活率密切相關。Masami等［7］對7例正常血清樣本用miRNAs芯片技術進行了檢測，發現了148種miRNA的存在。

有研究對血清miRNAs與前列腺癌的關系進行了研究。Mitchell等［8］在小鼠建立了人類前列腺癌細胞荷瘤模型，小鼠血液中發現了人m iR－141。他們還發現轉移的前列腺癌病人血清中miR－141的表達水平非常高，以血清miR－141的表達水平作為前列腺癌的診斷標志物具有較高的特異性及敏感性。關于國人血清miRNAs與前列腺癌的關系尚少見于報道。

本研究采用電化學發光方法檢測了前列腺癌患者外周血中TPSA和FPSA含量，發現患者兩者的含量明顯高于健康對照組，并且高分期組TPSA和FPSA含量均高于低分期組。此外，本研究還采用RT－PCR方法檢測了前列腺癌患者外周血中miR－21的水平，發現患者外周血中miR－21表達明顯高于健康對照組，并且高分期組miR－21水平高于低分期組。通過統計學分析，我們發現前列腺癌患者外周血miR－21水平與PSA含量顯著正相關。

綜上所述，外周血miR－21表達與前列腺癌的發生具有密切的聯系，miR－21水平與PSA含量存在一定的關聯，聯合應用兩者的檢測，對于前列腺癌的診斷具有重要意義。

［1］Jemal A，et al.Cancer statistics［J］.CA Cancer J Clin，2008，58（2）：71.

［2］上海市疾病預防控制中心，2005年上海市惡性腫瘤發病率［J］.上海預防醫學雜志，2008，20（8）：421.

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［5］Dirks，P.B.，MicroRNAs and parallel stem cell lives［J］.Cell，2009.138（3）：423.

［6］Lawrie CH，et al.Detection of elevated levels of tumour－associated microRNAs in serum of patients with diffuse large B－cell lymphoma［J］.Br J Haematol，2008，141（5）：672.

［7］Tanaka M，et al.Down－regulation of miR－92in human plasma is a novel marker for acute leukemia patients［J］.PLoS One，2009，4（5）：e5532.

［8］Mitchell PS，et al.Circulating microRNAs as stable blood－based markers for cancer detection［J］.Proc Natl Acad Sci U S A，2008，105（30）：10513.