配制結核含藥培養基藥液的保存條件探討

孫蕾 唐詩邈 王毳 李冰

我們觀察了結核分枝桿菌在保存于不同條件藥液(異煙肼、利福平、乙胺丁醇和鏈霉素)配制含藥培養基中的生長狀況，試圖尋找配制結核含藥培養基藥液的理想保存環境，現將我們實驗結果報告如下。

1 方法

1.1 藥物選擇 分別選擇異煙肼(INH，100%)、利福平(RFP，98%)、乙胺丁醇(EMB，73.6%)和鏈霉素(SM，77%)，以上4種藥粉來自國家結核病參比實驗室，再由遼寧省涂陽肺結核患者的痰培養獲得的已確認的結核分枝桿菌40株菌株。

1.2 操作方法 將INH、RFP、EMB和SM分別配制成20 μg/ml、4000 μg/ml、200 μg/ml和 400 μg/ml的藥液，并分成四份。第一份藥液配制成含藥培養基，含藥培養基中的藥物濃度為:INH(0.2 μg/ml)、RFP(40 μg/ml)、EMB(2 μg/ml)和SM(4 μg/ml)。第二份藥液分別室溫放置1、3、7 d后，配成含藥培養基。第三份藥液分別冷藏放置1、3、7 d后，配成含藥培養基。第四份藥液冷凍(-20℃)1個月后，配成含藥培養基。取40株結核分枝桿菌傳代培養3周后，調成10-2mg/ml和10-4mg/ml的菌液，接種含藥培養基，37℃培養4周，觀察結果，判斷結核分枝桿菌的耐藥性。同時還將10-2mg/ml的菌液分別接種不同保存條件藥液配制的含藥培養基，37℃培養4周，觀察結果。

2 結果

2.1 結核分枝桿菌在不同保存條件藥液配制含藥培養基中生長狀況比較 結核分枝桿菌在不同保存條件含異煙肼及利福平培養基中生長狀況比較見表1，結果表明兩組各種條件下陽性率分布無明顯區別(P均＞0.05)。

結核分枝桿菌在不同保存條件含鏈霉素及乙胺丁醇培養基中生長狀況比較見表2，結果表明兩組各種條件下陽性率分布無明顯區別(P均＞0.05)。

2.2 藥液保存時間對實驗污染率的影響 表3為各種藥液不同保存時間對實驗污染率的影響，結果表明，隨著各種藥液保存時間的延長，實驗污染率都有所增加。

表1 結核分枝桿菌在不同保存條件含異煙肼及利福平培養基中生長狀況比較

表2 結核分枝桿菌在不同保存條件含鏈霉素及乙胺丁醇培養基中生長狀況比較

表3 各種藥液不同保存時間對實驗污染率的影響

3 討論

結核病是危害人類健康常見疾病，過去臨床中常用抗結核菌一線藥物療效也漸不明顯，結核分枝桿菌耐藥是導致這些現象的重要原因之一，準確地檢測結核分枝桿菌的耐藥性不但能為臨床提供診療依據，而且也為結核疾病流行病學監測提供有效方法[1，2]。藥物敏感性試驗[3]就是這類方法之一，但其需要使用相應含藥培養基，于是，尋覓配制含藥培養基藥液的最佳保存條件，達到既可避免藥物浪費，又可方便含藥培養基配制途徑成了學者們的努力目標。我們新近分別將40株結核分枝桿菌接種于用室溫、冷藏保持1 d、3 d、1周及冷凍保存1月藥液配制的含藥培養基上，另將結核分枝桿菌在當天配制含藥培養基上的生長狀況作為對照。我們發現，本研究方法與結核分枝桿菌在上述培養基上耐藥結果無明顯統計學區別，這提示，采用前一種方法保存藥液配制的含藥培養基比較適用于結核分枝桿菌耐藥性檢測。我們還證實，隨著藥液保存時間延長，各類藥物實驗污染率有所增加，特別是異煙肼和乙胺丁醇藥液。因此，需加強配制藥液的無菌操作，采用滅菌的容器和蒸餾水配制藥液。

總之，通過妥善保存抗結核藥液，簡化了含藥培養基的配制程序，降低了開展結核分枝桿菌耐藥檢測的成本，有利于結核分枝桿菌耐藥監測的開展，為防治耐藥結核提供了簡單、經濟和實用的途徑。

[1]蔣云.肺結核病流行現狀和預防對策.基層醫學論壇，2012，16(7):922-923.

[2]趙玉玲，趙東陽，李輝，等.7年結核分枝桿菌臨床分離株對一線和二線抗結核藥物耐藥趨勢監測.中國衛生檢驗雜志，2010，20(2):338-340.

[3]中國防癆協會基礎專業委員會.結核病診斷實驗室檢驗規程.深圳:中國教育文化出版社，2006:46-51.