PS-1基因多態位點rs2256408多態性與晚發性阿爾茨海默病的相關性

劉 贊 盧桂蘭 黃亞蓮 吳祖榮 (海南省農墾總醫院護理部，海南 海口 570311)

阿爾茨海默病(AD)是表現為年齡依賴的整體認知能力的下降以及漸進性神經功能退化的一類老年性疾病〔1〕。根據年齡可將AD分為兩類，＞65歲為早發性AD(EOAD)，＜65歲為晚發性AD(LOAD)，其中LOAD所占比例較大。早老素(PS)-1基因是定位于14號染色體上在進化上高度保守的基因，其編碼產物PS-1蛋白是定位于細胞膜上的跨膜蛋白，可能與APP的分解和腦組織β淀粉樣蛋白(Aβ)的生成有關〔2〕。在對EOAD的研究中發現PS-1的多態性往往與AD的發生密切相關，但對于該基因與LOAD的關聯性研究較少。Rs2256408是PS-1的一個單核苷酸多態位點(SNP)，該位點的A可能突變為G。本文旨在研究該位點與LOAD的相關性。

1 材料與方法

1.1 對象 嚴格根據發病時間確診LOAD患者89例，其中男∶女為56∶33，年齡66～78歲，平均70.9歲。為了保證健康對照組的可靠性，選擇80～93歲精神狀況良好的老年對照165例，男∶女為110∶55，平均年齡85.6歲。

1.2 血樣的采集及基因組DNA的提取 所有對象采集早晨空腹血液2 ml，EDTA抗凝，提取基因組DNA備用。

1.3 rs2256408多態性的檢測 根據rs2256408的序列特點在其上下游序列范圍內設計引物，上游引物為P1(ACCATGGCTAGTGGCAGCTGTC)，下游引物為 P(ATAGGAGGAGGACAAATTTGC)，擴增片段長度為223 bp。反應體系為:15 μl反應體系中含有 1 μl基因組 DNA，1.5 μl 10 倍緩沖液，0.3 μl dNTP，0.15 μl引物混合物。反應條件:95℃ 預熱3 min;94℃15 s，60℃ 15 s，72℃ 30 s循環 11 次;94℃ 15 s，54℃ 15 s，72℃30 s，循環24次;72℃ 3 min。將PCR產物送上海捷瑞生物工程有限公司進行基因分型。

1.4 統計學方法 采用SPSS13.0軟件進行χ2分析。

2 結果

2.1 SNP多態性分型結果的判斷 可檢測出三種基因型:AA、AG、GG，其snopshot判斷標準見圖1。

圖1 SNP分型結果

2.2 SNP的分型結果 實驗組患者中AA、AG、GG的檢出例 (率)分別為61例(68.4%)、19例(21.3%)、9例(10.1%)，對照組中的檢出例(率)分別為97例(58.8%)、33例(20.0%)、35例(21.2%)。統計學分析結果顯示兩組患者的基因型分布存在顯著差異(P＜0.05)。

2.3 等位基因分布頻率的分析 等位基因A和G在實驗組中的分布頻率為79.2%(141例)和20.8%(37例)，而在對照組中的分布頻率為68.8%(227例)和31.2%(103例)。兩組患者等位基因分布頻率亦存在統計學差異(P＜0.05)。

3 討論

＞80歲的老年人中LOAD發病率達到30%以上，是影響老年人生活質量重要的因素之一。AD患者腦組織重要的特征是形成大量的老年斑并且發生神經元纖維的纏結。老年斑的形成主要是由Aβ代謝異常引起的，在正常生理條件下該蛋白的產生、降解和清除都維持應有的平衡。當這種平衡被打破，該蛋白通過自身聚集而產生可溶性極弱的沉淀，從而形成老年斑〔3〕。大量的研究證明，AD與某些基因的危險等位基因密切相關，并且受到環境的共同作用〔4〕。目前比較確定的LOAD危險因子主要是載脂蛋白E(aPOE-4)等位基因，但該基因不是所有 AD 發生的必要條件〔5，6〕。

PS基因的突變在早發性AD中被廣泛發現，已經有超過60種突變被認為與EOAD有關。但是對于該基因與LOAD的相關性，目前報道較少。Rs2256408是PS-1的一個SNP位點，本研究結果說明PS-1基因SNP位點rs2256408多態性與LOAD具有密切的關聯，基因型AA可能對其發生具有促進作用，而等位基因T則可能是LOAD發生的抑制因素。

PS-1基因表達產物PS-1主要參與Aβ的前體蛋白App的代謝，其突變可能影響App的加工、轉運及其與細胞骨架蛋白之間的相互作用，增加了較長的Aβ分泌，從而引起其聚合及沉淀，導致老年斑的形成，引發了AD〔6〕。所有的突變都具有兩面性，本研究中rs2256408多態位點的AA純合子的存在更容易導致LOAD的發生，而突變型純合子GG則可能不利于LOAD的發生。當然，鑒于樣本的局限性，本實驗的結論尚有待于在更大量樣本的基礎上進行更深入的驗證。

1 Tanzi RE.A genetic dichotomy model for the inheritance of Alzheimer's disease and common age-related disorders〔J〕.J Clin Invest，1999;104:1175-9.

2 Rosenberg RN.The molecular and genetic basis of AD:the end of the beginning〔J〕.Neurology，2000;54:2045-54.

3 Nunan J，Small D.Regulation of APP cleavage by a-，β-，and γ-secretases〔J〕.FEBS Lett，2000;483:6-10.

4 Pedersen NL.Reaching the limits of genome-wide significance in Alzheimer disease〔J〕.JAMA，2010;303(18):1864-5.

5 Rogaeva E，Tandon A，George H.Genetic markers in the diagnosis of Alzheimer's disease〔J〕.J Alzheimer's Dis，2001;3:293-304.

6 方 謹，張連峰，秦 川.早老素與阿爾茨海默癥的研究進展〔J〕.中國比較醫學雜志，2008;18(4):70-2.