超聲檢測老年乳腺浸潤性癌患者阻力指數與術后組織中碳酸酐酶-Ⅸ、血管內皮生長因子表達的關系

吳梓芳 許軍麗 (武漢大學校醫院超聲科，湖北 武漢 430079)

研究顯示乳腺浸潤性癌發生中血管生成相對于正常組織來說明顯增多〔1〕，因此應用相關輔助檢查檢測術前血流相關指標，可能對診斷有一定意義。臨床上觀察血流最簡便而無創的是彩色多普勒超聲檢測阻力指數(RI)值〔2〕。乳腺浸潤性癌進展過程中也是一種在分子水平上具有高度異質性的腫瘤，在進展中出現多種基因和蛋白的變化。碳酸酐酶(CA)-IX是含鋅酶，能可逆性地催化二氧化碳和水生成碳酸，其在消化道、膽囊等組織中可表達，但是在正常乳腺導管和小葉上皮細胞中不表達。多種腫瘤組織中CA-Ⅸ高表達，可能與缺氧性反應有關，CA-Ⅸ高表達時可以降低細胞周圍的pH值，促進細胞外基質的降解，在腫瘤細胞增生、血管生成、腫瘤性轉化和適應低氧環境中發揮作用〔3，4〕。本文關注超聲檢測的RI值與術后組織中CA-Ⅸ和血管內皮生長因子(VEGF)的關聯性。

1 材料與方法

1.1 一般資料 2010～2012年我院確診為乳腺浸潤性癌的老年患者99例作為觀察組，均為女性，年齡60～85(平均67.7)歲。收集患者術前的超聲RI值。均行乳腺癌根治術，并依術后病理學進行分類，標準嚴格符合WHO的診斷標準。

1.2 超聲檢測方法 使用飛利浦彩色多普勒超聲診斷儀，探頭頻率7.5～10 MHz，患者取仰臥位，在乳腺各象限作縱橫切掃查，觀察有無異常回聲區，對腫瘤區在常規觀察基礎上重點觀察血流情況，計算RI。

1.3 蛋白的檢測及判斷方法 CA-Ⅸ、VEGF、雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、Ki67蛋白均為濃縮型兔抗人多克隆抗體，通過福州邁新生物技術開發有限公司代購。應用免疫組化Max Vision法檢測蛋白的表達，應用DAB顯色。操作均由主管技師完成，嚴格質量控制。CA-Ⅸ以明確的細胞膜著色為陽性，VEGF以明確的細胞質著色為陽性，ER、PR、Ki67以明確的細胞核著色為陽性。CA-Ⅸ和VEGF均計數5個腫瘤細胞密集區的細胞，取陽性細胞百分率的平均值，以陽性細胞＞25%為陽性，以陽性細胞≤25%為陰性。

1.4 統計學方法 采用SAS6.12軟件進行t檢驗、方差分析和相關性分析。

2 結果

2.1 觀察組RI值與CA-Ⅸ和VEGF表達陽性率的關系 觀察組不同RI值與CA-Ⅸ和VEGF表達的陽性率差異顯著(P＜0.01)。見表1。

2.2 RI值、CA-Ⅸ和VEGF表達陽性率在觀察組不同臨床特征中的差別 觀察組RI值、CA-Ⅸ和VEGF的表達均與淋巴結轉移、腫瘤最大直徑、脈管浸潤、ER、PR和Ki67的表達密切相關(P＜0.05)。見表2。

2.3 觀察組中RI值與CA-Ⅸ和VEGF表達的關聯性分析 RI值與CA-Ⅸ表達(r=0.47，P=0.024 1)、RI值與 VEGF 表達(r=0.48，P=0.020 9)、CA-Ⅸ與 VEGF 表達(r=0.51，P=0.014 7)均具有正相關性。

表1 觀察組RI值與CA-Ⅸ和VEGF陽性表達的關系(s，%)

表1 觀察組RI值與CA-Ⅸ和VEGF陽性表達的關系(s，%)

RI值 n CA-ⅨVEGF

表2 RI值、CA-Ⅸ和VEGF表達陽性率在觀察組不同臨床特征中的差別(s)

表2 RI值、CA-Ⅸ和VEGF表達陽性率在觀察組不同臨床特征中的差別(s)

臨床病理特征 n RI值 t值 P值 CA-Ⅸ(%)t值 P值 VEGF(%)t值 P值腫瘤最大直徑 ≤2 cm 52 7.08±2.54 8.74 0.026 5 60.47±10.97 7.960.029 3 57.77±11.65 6.77 0.032 0＞2 cm 47 9.98±4.76 79.56±13.89 69.59±9.60淋巴結轉移 無 65 7.36±2.34 8.39 0.028 5 61.24±17.97 7.58 0.030 2 54.15±13.59 8.74 0.014 6有 34 9.78±2.31 80.76±17.53 71.47±15.47脈管浸潤 無 69 7.39±2.32 9.86 0.012 4 61.58±11.25 8.75 0.018 3 54.13±11.53 8.35 0.018 4有 30 10.23±3.87 87.79±13.42 72.45±13.44 ER ＞25% 59 7.53±2.31 7.68 0.030 2 61.25±10.86 7.30 0.032 9 63.14±10.57 7.30 0.024 1≤25% 40 9.64±2.69 78.61±11.41 70.46±13.45 PR ＞25% 54 7.92±2.32 7.43 0.032 4 64.36±12.36 7.86 0.028 5 56.16±8.91 7.10 0.021 0≤25% 45 9.76±2.34 78.78±11.75 69.45±8.60 Ki67 ≤25% 50 6.96±2.61 10.24 0.009 5 62.65±13.71 7.20 0.022 0 58.98±9.07 6.96 0.029 3＞25% 49 10.65±2.56 76.76±11.68 68.50±11.65

3 討論

應用超聲在手術前對老年人乳腺浸潤性癌進行判斷有重要意義，不僅可以評估腫瘤的生物學行為，還可以依據不同老年患者的身體情況進行恰當的治療。超聲對腫瘤的血流能較好地反映出來。在腫瘤發生時，尤其是腫瘤血管生成前期，腫瘤常較小，血管生成少，各種檢測血管的指標表達均不理想。而隨著腫瘤的進展迅速增大，血管生成加速，進入到明顯的腫瘤血管化期，此時影像學檢測血流的指標較容易，對腫瘤的判斷價值更理想〔5，6〕。從腫瘤生長及生物學行為角度分析，腫瘤惡性程度越高，增殖指數越高，生長就越快，增大的速度也越快。當腫瘤增長的速度超過其脈管系統的蔓延能力時，由缺氧誘導因子調控的CA-Ⅸ表達增強活力〔7〕，使適應缺氧環境的腫瘤細胞表型更容易存活并為了存活而更易于獲得侵襲轉移的潛能，這同時解釋了CA-Ⅸ的表達與腫瘤體積及腫瘤血管生成的相關性〔8，9〕。本實驗提示CA-Ⅸ和VEGF的表達與超聲檢測的RI值具有很高的一致性。由于VEGF是直接反映腫瘤血管生成的指標〔10〕，而CA-Ⅸ與VEGF有協同作用，因此RI值可以無創性地反映腫瘤血管生成情況，對判斷腫瘤內部的血管情況提供重要依據。本實驗也顯示RI值、CA-Ⅸ和VEGF的表達均與患者的淋巴結轉移、腫瘤最大直徑、脈管浸潤、ER、PR和Ki67的表達密切相關。由于以上因素均直接反映了腫瘤的生物學行為，因此，RI值可以部分地反映腫瘤的進展，即RI值越高，腫瘤侵襲性越強，腫瘤的血管生成越豐富，腫瘤的預后越差〔11〕。應用超聲檢測RI值是無創性評價腫瘤指標的客觀標志，也為制訂治療方案提供了重要價值，尤其是體質條件差的不能進行手術的老年患者。總之，術前對乳腺浸潤性癌患者積極應用超聲學檢測RI值與術后組織中CA-Ⅸ和VEGF的表達具有相關性，RI值可以部分地反映出CA-Ⅸ和VEGF的表達特點，術前RI值檢測可能在一程度上預測患者預后，早期判斷腫瘤性質。

1 顧秀芬，陳建國，蘆金飛.彩色多普勒超聲100例乳腺腫瘤診斷及鑒別診斷分析〔J〕.腫瘤學雜志，2010;16(6):467-9.

2 潘 紅.乳腺浸潤性導管癌68例超聲診斷與臨床表現〔J〕.中國現代醫生，2012;50(4):102-3.

3 Choueiri TK，Regan MM，Rosenberg JE，et al.Carbonic anhydraseⅨ and pathological features as predictors of outcome in patients with metastatic clear-cell renal cell carcinoma receiving vascular endothelial growth factor-targeted therapy〔J〕.BJU Int，2010;106(6):772-8.

4 Phuoc NB，Ehara H，Gotoh T，et al.Prognostic value of the co-expression of carbonic anhydraseⅨand vascular endothelial growth factor in patients with clear cell renal cell carcinoma〔J〕.Oncol Rep，2008;20(3):525-30.

5 諸 紅，龔新環，陳紅燕，等.高頻彩色超聲診斷乳腺癌的價值〔J〕.上海醫學影像，2010;19(1):30-2.

6 辛 燕，沙東基，仇祝強，等.高頻超聲檢測乳腺癌與乳腺纖維腺瘤診斷價值的探討〔J〕.醫學影響學雜志，2007;17(3):288-9.

7 Simi L，Venturini G，Malentacchi F，et al.Quantitative analysis of carbonic anhydrase IX mRNA in human non-small cell lung cancer〔J〕.Lung Cancer，2006;52(1):59-66.

8 徐曉武，楊小敏，朱少俊，等.胃癌組織中碳酸酐酶IX和VEGF的表達及其臨床意義〔J〕.現代實用醫學，2009;21(11):1206-8.

9 Driessen A，Landuyt W，Pastorekova S，et al.Expression of carbonic anhydrase IX(CA IX)，a hypoxia-related protein，rather than vascular-endothelial growth factor(VEGF)，a pro-angiogenic factor，correlates with an extremely poor prognosis in esophageal and gastric adenocarcinomas〔J〕.Ann Surg，2006;243(3):334-40.

10 周文斌，白 明，金 陽，等.非小細胞肺癌組織碳酸酐酶IX和VEGF表達及其臨床意義的探討〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2008;15(16):1251-3.

11 姜 亮，韓金祥，常曉天.碳酸酐酶與腫瘤相關性研究進展〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2012;19(18):1433-5.