風濕寧膠囊提取工藝研究*

★ 何國林 王羚酈 強皎 葉炳皇 林麗 張軍 (廣州中醫藥大學 廣州510006)

風濕寧膠囊是由當歸、赤芍、秦艽等多種藥味組成的中藥復方制劑，有活血祛瘀止痛、補肝腎、強筋骨之功效。用于治療各類關節軟組織損傷、骨折、脫位以及各類關節痛等。本研究采用正交試驗法，以芍藥苷和龍膽苦苷的綜合保留率為評價指標，優化了風濕寧膠囊的水提工藝，為工業化生產建立基礎。

1 儀器與試藥

島津LC－20A高效液相色譜儀，ΜV檢測器，LC－20AT泵，SIL－20A自動進樣器，Labsolution色譜工作站;萬分之一分析天平(Mettler Toledo CP225D);十萬分之一分析天平(Mettler Toledo AB204－N)。芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:110736－201035);龍膽苦苷對照品(上海融禾醫藥科技發展有限公司，批號110330);色譜甲醇購自Merck公司，水為自制超純水，其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件［1］

以Kromasil C18柱為固定相，以甲醇－0．1%磷酸照下表1進行梯度洗脫，芍藥苷檢測波長為230nm，龍膽苦苷檢測波長為 254nm，流速為 1．0mL/分。

表1 梯度洗脫表

2.2 專屬性考察

見圖1－8。

圖1 供試品溶液(230nm)

圖2 芍藥苷對照品溶液(230nm)

圖3 赤芍藥材溶液(230nm)

圖4 赤芍陰性對照液(230nm)

圖5 供試品溶液(254nm)

圖6 龍膽苦苷對照品溶液(254nm)

圖7 秦艽藥材溶液(254nm)

圖8 秦艽陰性對照液(254nm)

2.3 標準曲線的繪制

分別精密吸取芍藥苷對照品溶液(0．03216mg/mL)和龍膽苦苷對照品溶液(0．136mg/mL)2、4、8、12、16、20uL，注入液相色譜儀測定，以進樣質量為橫坐標(X)，峰面積為縱坐標(Y)，進行線性回歸，得芍藥苷回歸方程:y=1 589 528．20 x － 7438．59，R2=1．00。龍膽苦苷回歸方程為:y=1339014．71 x － 18 098．00，R2=1．00。結果表明:芍藥苷在 0．0644－0．644 μg 范圍內，龍膽苦苷在 0．272 －2．72μg范圍內均呈良好線性關系。

2.4 風濕寧膠囊提取工藝的正交試驗設計和試驗

2．4．1 正交試驗設計 在影響水提的因素中，煎煮次數，煎煮時間與水的用量較為重要，故選定煎煮次數，煎煮時間與水的用量作為考察因素，應用正交試驗設計進行實驗，以風濕寧膠囊中的有效成分芍藥苷與龍膽苦苷的綜合保留率(芍藥苷和龍膽苦苷的權重系數均為0．5)為評價指標，因素水平設計見表2。

表2 正交實驗因素水平表

2．4．2 正交實驗 按處方比例稱取全方藥材107．25g，照上述正交表條件進行提取，各次提取液放冷，過濾，合并濾液，測定體積，備用。

2．4．3 供試品溶液制備 精密量取各正交藥液25mL，置50mL容量瓶中，邊振搖邊緩慢加入95%乙醇稀釋至刻度，靜置，取上清液，0．45um微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

2.5 正交試驗結果

正交試驗結果見表3。分別以直觀分析和方差分析對試驗結果進行評價，結果分別見表4、5。分析結果表明，各因素對綜合保留率影響強弱依次為提取次數(A)、提取時間(B)、溶媒用量(C)。對綜合保留率影響最大的因素為提取次數(A)，其中水平3明顯優于水平1，但與水平2差異不大，故將提取次數(A)的水平確定為2(提取兩次);提取時間(B)與溶媒用量(C)對綜合保留率影響較小，綜合考慮指標成分提取率和臨床湯劑經驗，將提取時間的水平確定為水平2(1．5、1、1小時)，將溶媒用量確定為水平3(12、10、10倍水)。因此篩選確定最佳提取條件為A2B2C3，即加水煎煮兩次，煎煮時間分別為1．5、1．0h，加水量分別為12、10 倍量水。

表3 正交試驗結果

表4 正交試驗綜合保留率直觀分析表

表5 正交試驗綜合保留率方差分析表

2.6 驗證試驗及結果

為了驗證正交試驗所確定的最佳工藝條件的穩定性，進行驗證試驗。按優選的最佳工藝制備三批樣品，參照2．3．3項下供試品溶液的制備方法處理，HPLC測定，計算綜合保留率。結果顯示，在所確定的最佳工藝條件下，芍藥苷和龍膽苦苷的綜合保留率均達90%以上，表明該提取工藝路線具有重復性，結果見表6。

表6 驗證試驗結果

3 討論

據現代藥理研究表明，赤芍中的主要成分芍藥苷具有抗血栓、抗血小板聚集等作用［2］，秦艽中的龍膽苦苷具有抗炎鎮痛、保肝、促骨生長、抗病毒抑菌等藥理活性［3］。二者作用接近風濕寧膠囊功能主治所規定的治療范圍，故本實驗以芍藥苷和龍膽苦苷的綜合保留率作為工藝篩選的考察指標。

根據本實驗優選的最佳工藝，經工藝的驗證性實驗表明此法穩定，質量可控，為其工業化大生產打下堅實基礎。

［1］國家藥典委員會．人民共和國藥典 一部［M］．北京:中國醫藥科技出版社，2010．

［2］劉超，王靜，楊軍．赤芍總苷活血化瘀作用的研究［J］．中藥材，2000，23(9):557 －560．

［3］蔡秋生，張志紅，高慧琴．秦艽藥理作用及臨床應用研究進展［J］．甘肅中醫學院學報，2010，27(6):55 －58．