不同地區規模化豬場豬瘟抗體水平的檢測與分析

文│吉慧敏 劉佳倩 劉錚鑄（河北科技師范學院動物科技學院、河北省特色動物種質資源挖掘與創新重點實驗室）

王會杰 鄭慶豐（河北省秦皇島市農業農村局）

豬瘟是一種烈性傳染病，歷史十分久遠，美國曾經暴發過大規模的疫情，在其他眾多國家也發生過，給各國養豬業均造成了重大損失。世界動物衛生組織（OIE）要求，豬場一旦發生豬瘟必須立即上報。在我國，該病被歸為一類疫病。近幾年，隨著我國養殖業的發展和養殖規模的擴大，豬瘟的流行趨勢在一定程度上發生了變化。

研究發現，在諸多家養動物中，豬是豬瘟惟一的易感對象。成年后的豬群很少發病，但是成年豬卻是嚴重的帶毒者，該種帶毒豬通過垂直傳播將病毒由親代傳給子代。豬瘟的臨床表現也由急性典型逐漸轉變為急性典型與慢性非典型共存。

一直以來，我國實行防疫為主、防重于治的策略，在一定程度上可以減少豬瘟的患病率及傳染率，但是豬瘟的流行范圍廣泛，發病無季節性且病死率極高，因此目前防控豬瘟最有效的方法還是接種疫苗。

母豬的抗體水平關乎仔豬出生后從母體直接獲得的母源抗體，故在規模化豬場對母豬及時進行抗體水平檢測至關重要。而酶聯免疫吸附試驗（ELISA）是一種適合于大批量檢測的方法，該技術對于診斷豬瘟有較高的靈敏度，檢測結果也比較穩定，ELISA法目前已成為檢測豬瘟抗體水平應用最為廣泛的方法。因此，本研究擬采用ELISA法對我國6省區11個地區的部分規模化豬場的母豬，在接種豬瘟疫苗后進行抗體水平檢測，為生產一線提供一定參考依據。

◎圖1 不同地區豬瘟抗體陽性率檢測結果

一、材料與方法

1.試驗材料。

（1）血樣的采集與處理。在我國河北（衡水、石家莊）、河南（衛輝、鶴壁）、遼寧（沈陽、鐵嶺、鞍山）、山東（德州、臨沂）、四川（眉山）和新疆（庫爾勒）6省區11個地區的部分規模化豬場中，對二元成年母豬免疫接種豬瘟疫苗20天后，在前腔靜脈處進行血樣采集，共采集824頭份。將采集好的血樣置于37℃環境中2小時，凝固后1500轉/分鐘離心5分鐘，取上清液。要求上清液色澤清亮、無溶血現象，之后置于-20℃冰箱中保存，待用。

（2）試劑盒。豬瘟病毒抗體檢測ELISA試劑盒（阻斷法）購于無錫優聯生物科技有限公司，-4℃冰箱保存，用前置于37 ℃恒溫箱中回溫2小時。

2.試驗方法。用已購試劑盒對824頭份母豬血清的抗體水平進行檢測，操作過程嚴格按照試劑盒說明書進行。

（1）樣品和洗滌液準備。在血清稀釋板中，用樣品稀釋液按1∶1的體積稀釋待檢血清、陰性對照和陽性對照。洗滌液用純水做20倍稀釋，之后置于2～8℃環境中，可存放7天。

（2）結果判定。在酶標儀上630納米（nm）波長處讀取各孔的OD值。陰性兩孔的對照平均OD630nm值應大于0.500，陽性對照的阻斷率［阻斷率＝（1-S/N）×100%，公式中S代表樣品OD630nm值，N代表陰性對照平均OD630nm值］大于40%時，試驗方可成立。檢測結果的陰、陽性判定依據見表1。當阻斷率≥50%時，豬瘟抗體檢測合格，具備一定的抗豬瘟病毒能力。

（3） 數據處理。采用SPSS 20.0軟件的Waller-Duncan法，對不同地區母豬群豬瘟抗體阻斷率進行差異顯著性分析，結果用平均值±標準差的方式呈現。同時計算阻斷率的離散程度（變異系數），變異系數越大，豬群的抗體水平整齊度越差。

變異系數＝標準差/抗體的平均值×100%。

二、結果與分析

用已購豬瘟病毒抗體檢測ELISA試劑盒對6省區11個地區共計824份母豬血清進行了檢測，各地區豬場的豬瘟抗體水平檢測結果見表2和圖1、圖2、圖3。

由表2和圖1、圖2、圖3可知，6省區11個地區規模化豬場豬瘟抗體的陽性率中，最高的是河南省衛輝和鶴壁地區，均為100.00%，最低的是河北省石家莊地區，為75.00%，整體上達到了我國豬瘟強制性免疫疫苗抗體陽性率70%的要求。抗體合格率，最高的是河南省鶴壁地區，為98.23%，最低的是河北省石家莊地區，為60.00%。變異系數，最大的是河北省石家莊地區，為38%，最小的是河南省鶴壁地區，為16%。其中，河北省衡水地區（88.94%，24%）、河南省衛輝地區（87.50%，21%）和鶴壁地區（98.23%，16%）、遼寧省鞍山地區（94.74%，18%）、山東省臨沂地區（89.36%，26%）的抗體合格率較高，變異系數也較小，表明這幾個地區母豬群的抗體水平較高且整齊度也較好。

不同地區母豬群豬瘟抗體阻斷率差異顯著性分析結果見表3。

由 表3 可 知， 河 南 省 鶴壁地區的阻斷率最高， 為（84.10±13.37）%，河北省石家莊地區最低，為（59.29±22.73）%，剩余其他各地區依次為河北省衡水地區、遼寧省鞍山地區、山東省臨沂地區、河南省衛輝地區、山東省德州地區、遼寧省鐵嶺地區、遼寧省沈陽地區、新疆維吾爾自治區庫爾勒地區和四川省眉山地區，依次為（73.10±17.56）%、（72.73±13.23）%、（71.89±18.53）%、（71.04±14.80）%、（68.28±19.33）%、（67.53±19.72）%、（62.90±18.66）%、（62.19±17.73）%和（61.66±20.04）%。進一步分析可知，石家莊地區與衛輝、臨沂、鞍山、衡水、鶴壁地區均呈極顯著性差異（P＜0.01），眉山地區與臨沂、鞍山、衡水、鶴壁地區均呈極顯著性差異（P＜0.01），庫爾勒地區與鞍山、衡水、鶴壁地區均呈極顯著性差異（P＜0.01），沈陽地區與衡水、鶴壁地區均呈極顯著性差異（P＜0.01），鐵嶺地區與鶴壁地區呈極顯著性差異（P＜0.01）。

表1 檢測結果的陰、陽性判定依據

◎圖2 不同地區豬瘟抗體合格率檢測結果

表2 各地區規模化豬場母豬豬瘟抗體水平檢測結果

三、討論

對于一個規模化豬場來說，控制豬瘟疫情、防止豬瘟感染，使豬場健康穩定生產十分重要。本研究對我國6 省區1 1 個地區部分規模化豬場二元母豬免疫豬瘟疫苗后，進行了豬瘟抗體水平的檢測，不同地區豬場抗體陽性率在7 5.0 0%～1 0 0%，整體上達到了我國豬瘟免疫后抗體陽性率需達到7 0%的要求。抗體合格率在60.00%～98.23%，說明這些地區規模化豬場免疫流程較為合理，整體免疫效果較好。阻斷率的方差分析顯示，不同省區不同地區、同一省不同地區均有差異，有的地區之間呈極顯著性差異（P＜0.01），這一結果與前人的研究結果基本一致。

祖立闖等通過對2008—2016年我國豬瘟疫苗免疫后抗體檢測的文獻整理和匯總，發現不同區域免疫效果差異較大。張振倉對山西關中11個豬場豬群PCV-2抗體進行檢測，結果發現即使是同一縣不同豬場的豬群保護率也存在差異。杜希珍等報道，在豬瘟控制比較好的豬場，母豬群豬瘟抗體合格率可達90%以上。本研究中的河南省鶴壁地區（98.23%）和遼寧省鞍山地區（94.74%）母豬群豬瘟抗體合格率也均在90%以上，說明這兩個地區豬場的豬瘟控制得較好。

本研究檢測對象為母豬，而對母豬豬瘟抗體免疫后的保護力檢測關乎仔豬在出生后從母體直接獲得的母源抗體，如若母豬帶毒，便使得新生仔豬從母體獲得的抗體不夠或者根本沒有抗體，先天免疫保護力不足，更嚴重的是，這些仔豬會造成對其他仔豬的持續性感染。周婷婷等對河南4個地區規模化豬場的抗體水平進行了檢測，發現母豬自身免疫水平低會對仔豬母源抗體造成很大影響。因此，規模化豬場應重視母豬免疫后的抗體水平監測。

本研究發現的不同地區間豬瘟免疫效果存在差異，很重要的一個可能原因是各豬場的免疫流程不同，張文等的研究也發現免疫流程不合理會導致免疫最終效果不理想。因此，建議各豬場的免疫流程應根據當地的流行病學以及結合動物機體本身等情況制訂。另外，疫苗的選用及管理也非常重要，若疫苗來源不正，或運送、保管不當，會導致疫苗抗體效價水平降低。

為了對豬瘟進行很好的防控，規模化豬場應該有一個符合自己豬場的免疫程序，明確最佳的免疫時間；豬場自身做到自繁自養、慎重引種；做好定期對免疫后抗體的監測工作；使用質量較高的豬瘟疫苗，控制好免疫疫苗的劑量。同時，規模化豬場在進行豬瘟凈化時更要注重豬瘟的預防，重點注意以下幾個方面：一是科學的飼養管理；二是增強豬只自身的抗體水平；三是選用合格的疫苗。

◎圖3 不同地區豬瘟抗體變異系數檢測結果

表3 各地區規模化豬場母豬免疫后抗體水平顯著性分析結果

四、結論

本研究對河北、河南、遼寧、山東、四川和新疆6省區的11個地區部分規模化豬場的二元母豬豬瘟疫苗免疫后的抗體水平進行了檢測分析，發現同一疫苗不同地區免疫效果不完全一樣，建議規模化豬場建立合理的免疫流程，提高豬瘟的綜合防控效果。