胰島素瘤動物模型的建立及特性研究*

成蘭云， 許世清， 張文健， 婁晉寧， 門秀麗

(1河北聯合大學基礎醫學院病理生理學系，河北 唐山 063000； 2中日友好醫院臨床醫學研究所，北京 100029； 3涿州市醫院病理科， 河北 涿州 072750)

·實驗技術·

胰島素瘤動物模型的建立及特性研究*

成蘭云1，3， 許世清2， 張文健2， 婁晉寧2， 門秀麗1△

(1河北聯合大學基礎醫學院病理生理學系，河北 唐山 063000；2中日友好醫院臨床醫學研究所，北京 100029；3涿州市醫院病理科， 河北 涿州 072750)

目的建立胰島素瘤的動物模型并分析其特性，為胰島素瘤的深入研究奠定實驗基礎。方法首先檢測體外培養的大鼠胰島素瘤細胞株INS-1的激素釋放能力，然后將INS-1細胞移植到裸鼠左腎包膜下，或在移植后18 d或在移植前3 d聯合腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)破壞動物自身胰島。尾靜脈采血檢測血糖,當血糖<2.8 mmol/L認為胰島素瘤模型建立。對各種條件建立的模型，觀察給予不同刺激物對血糖的影響以及動物血清中胰島素含量；并對動物胰腺組織和移植細胞的腎臟組織標本進行免疫組化染色檢測胰島素和胰高血糖素。結果胰島素瘤細胞既表達胰島素，同時也表達胰高血糖素。裸鼠接種INS-1細胞后3～4周血糖<2.8 mmol/L；移植腎臟明顯增大，形成明顯腫瘤，直徑≥1 cm。細胞移植后腹腔注射STZ的動物，血糖短暫回升，超過正常血糖水平，之后又逐漸下降，約2周后血糖<2.8 mmol/L。正常裸鼠給予STZ后血糖明顯升高，移植INS-1細胞后動物血糖逐漸下降，約4周后血糖降至2.8 mmol/L。與正常對照組相比，3種方法建立的胰島素瘤模型給予高糖后，動物血糖峰值低。高糖加精氨酸或乙酰膽堿刺激后，正常動物血糖峰值較單純高糖刺激降低，并較快降至正常水平，但3種胰島素瘤模型組血糖升高均明顯超過單純高糖刺激者。高糖加去甲腎上腺素刺激后，正常動物血糖達到峰值時間延遲，血糖水平下降緩慢，3種胰島素瘤模型組血糖較單純高糖刺激組有所升高。與正常對照組相比，3種胰島素瘤模型血漿基礎胰島素的水平明顯升高。結論通過給裸鼠腎包膜下移植INS-1細胞，可建立胰島素瘤動物模型，且瘤細胞同時表達胰島素和胰高血糖素，不易被STZ破壞。該模型為進一步探討胰島素瘤的發病機制奠定實驗基礎。

胰島素瘤； 模型，動物； INS-1細胞； 葡萄糖

胰島素瘤是來源于胰島β細胞的腫瘤，是功能性胰腺內分泌腫瘤中最常見的一種[1- 2]，具有較強的自主分泌胰島素能力，臨床上多表現為低血糖反復發作并逐漸加重,嚴重時可危及生命。低血糖導致自主神經過度興奮癥狀和神經缺糖癥狀[3]，長期低血糖癥狀反復發作，將導致大腦和神經系統不可逆的營養不良性退行性改變，可使病人智力低下,行為異常甚至癡呆、喪失勞動力[4- 6]。其診斷依靠Whipple診斷三聯征[即典型的低血糖癥狀發作,發作時血糖低于2.8 mmol/L (500 mg/L),攝入葡萄糖可使癥狀迅速緩解][7- 8]和實驗室檢查。臨床上此病極易被誤診,有報道超過40%的胰島素瘤病例初診為神經系統疾病[9]。因此,提高對胰島素瘤的認識并及時診治具有重要意義。由于缺乏合適的動物模型，對胰島素瘤發病機制的了解甚少，該類腫瘤的生物學特性尚有待研究。本研究采用裸鼠腎包膜下移植大鼠胰島素瘤細胞株INS-1成功建立了胰島素瘤的動物模型，并初步觀察了腫瘤的特性，為深入研究胰島素瘤的發病機制和診斷方法奠定實驗基礎。

材 料 和 方 法

1材料

1.1細胞 INS-1細胞(大鼠胰島素瘤細胞)、INR-1G9細胞(胰島α細胞)、r9細胞(INS-1的單細胞克隆)、人胰島素瘤細胞和HK- 2細胞(人近端腎小管上皮細胞)。

1.2動物nu/nu裸鼠[購自北京維通利華實驗動物技術有限公司 ，動物合格證號為SCXK (京)2006-0009]，6～8周齡，體重20～25 g，均為雄性，無特定病原體條件下飼養。

1.3主要試劑 RPMI-1640培養基(Gibco),胎牛血清(Gibco),胰蛋白酶(Sigma),鏈脲佐菌素(streptozocin,STZ;Sigma),葡萄糖(中國大冢制藥有限公司),精氨酸(上海信誼藥業有限公司 ),去甲腎上腺素(上海禾豐制藥有限公司),乙酰膽堿(TGI),胰島素ELISA試劑盒(Millipore),兔抗胰島素多克隆抗體(Santa Cruz),羊抗胰高血糖素多克隆抗體(Santa Cruz),總RNA提取試劑盒(Promega),BCA法蛋白測定試劑盒(碧云天公司),ECL化學發光試劑(Millipore)。

2方法

2.1細胞培養 INS-1細胞、INR-1G9細胞、r9細胞和人胰島素瘤細胞用RPMI-1640培養基(內含10%胎牛血清,1×105U/L青霉素,100 mg/L鏈霉素, 5.5 mmol/L葡萄糖，10 mmol/L HEPES, 50 μmol/L β-巰基乙醇，1 mmol/L丙酮酸鈉)，其中r9細胞培養時另外添加100 mg/L G418；HK- 2細胞用DMEM/F12培養基(內含10%胎牛血清,1×105U/L青霉素,100 mg/L鏈霉素)，各種細胞于5% CO2、37 ℃培養箱培養 。待細胞生長至匯合時用0.025%胰蛋白酶/0.025% EDTA 傳代。

2.2胰島素瘤細胞的特性分析

2.2.1RT-PCR 將正常培養的INS-1細胞、r9細胞、INR-1G9細胞、人胰島素瘤細胞和HK- 2細胞各1×106個，使用總 RNA 提取試劑盒、逆轉錄試劑盒和PCR試劑盒進行總 RNA 的提取、逆轉錄和PCR，引物序列見表1。之后進行瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下觀察條帶，凝膠成像系統拍照記錄。

表1 PCR 擴增反應引物及產物大小

2.2.2Western blotting 將正常培養的INS-1細胞、r9細胞、INR-1G9細胞、人胰島素瘤細胞 和HK- 2細胞各5×106個提取總蛋白,采用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。取30 μg總蛋白進行聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)后，將蛋白轉印至PVDF膜，用含5%脫脂奶粉的TBST室溫封閉2 h，洗膜后分別加入鼠抗β-actin抗血清、兔抗胰島素抗血清、羊抗胰高血糖素抗血清4 ℃雜交過夜。洗膜后，用辣根過氧化物酶標記的相應Ⅱ抗雜交。使用ECL化學發光試劑顯色，暗室曝光成像。

2.2.3ELISA方法INS-1細胞胰島素和胰高血糖素釋放的檢測 INS-1細胞以2×108/L的密度接種于24孔培養板中，應用正常培養基培養3 d后，用含2.5 mmol/L 葡萄糖的培養基平衡5 h，然后用KRBH液 (mmol/L: 140 NaCl, 3.6 KCl, 0.5 NaH2PO4·2H2O, 0.5 MgSO4·7H2O, 1.5 CaCl2, 2 NaHCO3, 10 HEPES, 0.1% BSA)洗2次,再分別換成含下列物質的KRBH液：20 mmol/L 葡萄糖(glucose，G)、20 mmol/L G+20 mmol/L 精氨酸(arginine，Arg)、20 mmol/L G+40 μmol/L 去甲腎上腺素(norepinephrine，NE)或 20 mmol/L G+ 1 mmol/L 乙酰膽堿(acetylcholine，ACh)，培養30 min 后收集上清液，用于胰島素和胰高血糖素的測定。胰島素的測定采用ELISA方法，胰高血糖素采用放射免疫法測定。

2.3胰島素瘤動物模型的建立

2.3.1細胞準備 刮取培養的INS-1細胞，用基礎培養基洗2次，再加入基礎培養基制成細胞懸液，吸入頭皮針中，離心，將細胞離心到針端，每只裸鼠移植細胞數約2×107。

2.3.2模型建立方法和動物分組 使用3種方法建立胰島素瘤模型，具體方法是： (1)單獨細胞移植：將上述準備好的INS-1細胞移植到裸鼠左腎包膜下，以假手術組作為對照。(2)細胞移植后聯合STZ腹腔注射：同上進行細胞移植，待動物血糖降至4 mmol/L左右時腹腔注射STZ溶液(200 mg/kg)；另以同樣移植但不注射STZ的和正常裸鼠同時同樣方法腹腔注射STZ作為對照。(3)STZ給藥后進行細胞移植：將正常裸鼠禁食12 h，給予STZ (200 mg/kg)腹腔注射，72 h后開始測定血糖，血糖連續3 d>20 mmol/L，成為糖尿病鼠；將其分為2組，一組在左腎包膜下移植INS-1細胞(細胞量同上)，另一組進行假手術作為對照。以上各組每組4只動物。

2.3.3尾靜脈采血監測各組動物血糖 當模型組動物的血糖明顯降低至<2.8 mmol/L后,以10%糖水代替普通飲水，繼續監測血糖，3 d后開始，各組動物在隔天下午分別給予葡萄糖(4 g/kg)、精氨酸(500 mg/kg)+葡萄糖(4 g/kg)、去甲腎上腺素(8 mg/kg)+ 葡萄糖(4 g/kg)或乙酰膽堿(10 mg/kg)+ 葡萄糖(4 g/kg)，分別在0、5、10、15、20、30、40和60 min時測其血糖。

2.4免疫組織化學染色 處死動物，取血，采用ELISA方法測定血清中胰島素的含量。取胰腺和移植細胞的腎臟固定于10%甲醛，制備石蠟切片。經常規脫蠟、水化，微波熱修復，3%過氧化氫溶液封閉內源性過氧化物酶。Ⅰ抗分別使用兔抗小鼠胰島素抗血清、羊抗小鼠胰高血糖素抗血清，4 ℃孵育過夜，Ⅱ抗使用辣根過氧化物酶標記的羊抗兔IgG抗體或兔抗羊IgG抗體，37 ℃ 30 min，DAB顯色，蘇木精復染，脫水、透明封片后鏡檢。

3統計學處理

應用SPSS 17.0軟件進行統計學分析。數據以均數±標準差(mean±SD)表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗。多組間比較采用單因素方差分析。以P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

1胰島素瘤細胞的特性分析

RT-PCR(圖1A)和Western blotting(圖1B)結果顯示，INS-1細胞及INS-1的單克隆細胞株r9細胞均同時表達胰島素和胰高血糖素，并且人胰島素瘤細胞也具有同樣特點。但作為對照的INR-1G9細胞只表達胰高血糖素，而腎小管上皮細胞HK- 2細胞則兩者都不表達。胰島素釋放實驗(圖1C)結果顯示， 給予高糖刺激時，INS-1細胞的胰島素和胰高血糖素分泌增加，精氨酸和乙酰膽堿對高糖誘導的胰島素和胰高血糖素釋放起到促進作用，而去甲腎上腺素起到抑制作用。

Figure 1. Analysis of insulin and glucagon of insulinoma cells. A: RT-PCR; B: Western blotting; C: ELISA. G: glucose; G+Arg: glucose+arginine; G+NE: glucose+norepinephrine; G+ACh: glucose+acetylcholine. Mean±SD.n=3.#P<0.05vscontrol group;*P<0.05,**P<0.01vsG group.

圖1胰島素瘤細胞的特性分析

2胰島素瘤動物模型的建立

2.1單純移植INS-1細胞組血糖變化 與假手術組相比，左腎包膜下移植INS-1細胞的裸鼠,血糖在2周后開始下降，3周時血糖<2.8 mmol/L，此后一直維持該水平，見圖2A。

2.2INS-1細胞移植后注射STZ對血糖水平的影響 移植INS-1裸鼠血糖降至正常一半[(4.03±0.49)mmol/L]時(約18 d時)腹腔注射STZ，血糖在STZ給藥后3 d開始上升，最高可上升到(16.80±4.84)mmol/L，之后逐漸下降，在注射STZ后約2周時血糖達到<2.8 mmol/L[(2.10±0.44)mmol/L]；而僅移植INS-1組的裸鼠血糖逐漸降低，3周時血糖(2.30±0.55)mmol/L，之后一直處于低血糖狀態；正常裸鼠腹腔注射STZ后，血糖3～5d時明顯上升,出現高血糖[(27.80±1.22)mmol/L]，之后一直處于高血糖狀態,見圖2B。

2.3INS-1細胞移植到糖尿病裸鼠后血糖水平的變化 腹腔注射STZ 3 d后，動物血糖水平均明顯升高，達20 mmol/L以上。移植INS-1細胞后，裸鼠血糖逐漸減低，在4周后血糖<2.8 mmol/L，見圖2C。

2.4胰島素瘤的成瘤檢查 當裸鼠血糖<2.8 mmol/L后，處死各組的裸鼠，檢查移植細胞在腎臟局部成瘤情況,可見與右腎相比，移植細胞的左腎明顯增大，形態不規則，表面凹凸不平，形成明顯腫瘤，直徑≥1 cm，見圖2D。

3比較各種胰島素瘤動物模型糖耐量情況

正常裸鼠(圖3A)和3種方法建立的胰島素瘤模型[單純移植INS-1細胞(圖3B)、移植INS-1細胞后注射STZ(圖3C)以及注射STZ后移植INS-1細胞(圖3D)]給予高糖后，正常動物血糖在15 min左右上升到20 mmol/L以上，但3種胰島素瘤模型動物血糖峰值明顯降低，在8 mmol/L左右。高糖加精氨酸或乙酰膽堿刺激后，正常動物血糖峰值較單純高糖刺激的降低，并較快降至正常水平，但3種胰島素瘤模型組血糖升高均明顯超過單純高糖刺激者。高糖加去甲腎上腺素刺激后，正常動物血糖達到峰值時間延遲，血糖水平下降緩慢，3種胰島素瘤模型組血糖較單純高糖刺激組有所升高。

4胰島素瘤模型血漿基礎胰島素水平

正常裸鼠血漿中胰島素水平較低[(1.25±0.55)μg/L]，與正常對照組相比，3種方法建立的胰島素瘤動物血漿中胰島素的水平明顯升高，分別為(10.67±0.85)μg/L、(8.13±1.15) μg/L和(4.61±0.85)μg/L，見圖4。

Figure 2. Establishment of insulinoma animal models. A: the changes of blood glucose after INS-1 cells were transplanted into the left kidney capsule of nude mice; B: the changes of blood glucose after intraperitoneal injection of STZ in nude mice transplanted with INS-1 cells; C: the changes of blood glucose after INS-1 cells were transplanted into the left kidney capsule of diabetic nude mice; D: tumorigenicity after INS-1 cells were transplanted into the left kidney capsule in different groups of nude mice. 1,3,5,7: the right kidney; 2,4,6,8: the left kidney.Mean±SD.n=4.*P<0.05.**P<0.01vsN or N+STZ group.

圖2胰島素瘤動物模型的建立

Figure 3. Different animal models of insulinoma response to different stimuli.A: normal nude mice; B: transplantation of INS-1 cells; C: injection of STZ after transplantation of INS-1 insulinoma model; D: transplantation of INS-1 cells after STZ injection. G: glucose; G+Arg: glucose+arginine; G+NE: glucose+norepinephrine; G+ACh: glucose+acetylcholine. Mean±SD.n=4.

圖3不同胰島素瘤動物模型對不同刺激物的反應

Figure 4. Comparison of plasma basal insulin levels in different insulinoma models. A: normal nude mice; B: transplantation of INS-1 cells; C: injection of STZ after transplantation of INS-1 cells; D: transplantation of INS-1 cells after STZ injection. Mean±SD.n=4.**P<0.01vsA group.

圖4比較不同胰島素瘤模型血漿基礎胰島素水平

5移植瘤的病理學檢查

移植INS-1細胞的裸鼠腎臟比正常腎臟明顯增大，表面凸凹不平，形成明顯腫瘤。組織學檢查證實胰島素瘤的形成(圖5A)，移植瘤的免疫組織化學染色發現組織中表達胰島素(圖5B)和胰高血糖素(圖5C)。

6INS-1細胞移植聯合STZ給藥建模動物胰島素和胰高血糖素的表達

正常胰腺表達胰島素和胰高血糖素，而移植INS-1細胞并腹腔注射STZ裸鼠的胰腺未檢測到胰島素，只檢測到胰高血糖素表達；但移植部位的INS-1細胞仍然高表達胰島素和胰高血糖素，見圖6。

討 論

胰島素瘤是最常見的胰腺內分泌腫瘤之一，具有胰島素過度分泌功能，可引起反復發作性低血糖和低糖造成中樞神經系統障礙等一系列臨床表現。目前其發病機制不清，臨床上極易誤診。本研究利用將INS-1細胞移植到裸鼠體內成功建立了胰島素瘤的動物模型，并對其特性進行了初步分析，為研究其發病機制和診斷方法奠定實驗基礎。

Figure 5. HE and immunohistochemical staining in the insulinoma model of transplantation of INS-1 cells. A: HE staining of the transplanted tumors (×200); B: staining of insulin in the transplanted tumors (×400); C: staining of glucagon in the transplanted tumors (×400).

圖5移植INS-1細胞的胰島素瘤模型的免疫組化染色分析

Figure 6. Immunohistochemical staining in the insulinoma model of STZ injection after INS-1 cell transplantation (×200). A,B: normal pancreas; C,D:pancreas from INS-1+STZ mice; E,F:transplanted INS-1 cells.A,C,E:staining of insulin; B,D,F:staining of glucagon.

圖6INS-1細胞移植聯合STZ注射的胰島素瘤模型的免疫組化染色

我們首先檢測了體外培養的INS-1細胞的胰島素分泌能力。婁晉寧教授等前期研究發現INS-1細胞只表達胰島素，而本實驗結果顯示INS-1細胞不僅表達和釋放胰島素而且表達和釋放胰高血糖素。為分析原因，我們還檢測了INS-1的單克隆細胞株 r9細胞，以及原代分離的人胰島素瘤細胞，發現后兩者也同時表達胰島素和胰高血糖素。以往的研究發現，正常情況下，胰島α細胞對胰島β細胞的存活和胰島素分泌具有支持作用[10]。也有報道胰高血糖素對胰島β細胞的增殖和胰島素分泌具有促進作用[11]，因此同時表達胰高血糖素對胰島素瘤細胞的存活和功能可能起到重要作用。

為建立胰島素瘤的動物模型，我們將INS-1細胞移植到裸鼠腎包膜下，在大約3周時動物血糖即降至2.8 mmol/L以下，組織病理學檢查也證實移植局部腫瘤形成。為使模型在整體水平反映胰島素瘤的特性，我們在建模過程中用STZ破壞動物自身胰島，此時動物血糖的變化可反映胰島素瘤的功能。在移植INS-1細胞后給予STZ或先給予STZ后再移植INS-1細胞均可使動物血糖降至2.8 mmol/L以下，因此可以認為胰島素瘤模型建立成功。

隨后對所建立的3種胰島素瘤模型分泌胰島素特性進行了初步分析，當給予高糖刺激后，正常動物血糖迅速升高后逐漸降低至正常水平，但胰島素瘤組血糖峰值較低，曲線較低平，與臨床胰島素瘤患者糖耐量曲線低平的特點相符合[12]。給予高糖加精氨酸刺激時，正常動物血糖峰值降低且較快恢復至正常水平，但胰島素瘤模型組血糖峰值不降反升，結合體外實驗發現胰島素瘤細胞同時表達胰島素和胰高血糖素，推測是精氨酸刺激使2種激素釋放均增加的結果。

精氨酸作為一種非葡萄糖刺激物，帶有正電荷，能加強胰島β細胞膜的去極化，使鈣通道開放，鈣離子內流，促進已儲存的胰島素釋放，可用來評估胰島β細胞功能[13-15],同時精氨酸和葡萄糖有協同作用。有文獻報道：糖尿病及糖耐量受損患者精氨酸負荷后胰高血糖素水平升高，病程較長的1型糖尿病患者精氨酸刺激后胰島素反應消失，但保持正常的胰高血糖素反應[16]，提示精氨酸對胰島α細胞也具有較強的興奮作用，促進胰高血糖素分泌。本研究結果也提示精氨酸能促進胰島素瘤細胞同時釋放胰島素和胰高血糖素。

此外，我們還研究了去甲腎上腺素和乙酰膽堿對INS-1細胞功能的影響。去甲腎上腺素和乙酰膽堿是體內重要的神經遞質，也是調節胰島素分泌的重要物質[17]。乙酰膽堿促進胰島素分泌[18-19]，而去甲腎上腺素抑制胰島素分泌[20- 21]。本研究結果顯示，乙酰膽堿與精氨酸的作用相似，不僅促進胰島素釋放，而且同時促進胰高血糖素的釋放；去甲腎上腺素抑制胰島素分泌的同時還抑制胰高血糖素的釋放。

我們進一步發現胰島素瘤動物血中基礎胰島素水平明顯高于正常，這可能是造成動物低血糖和即使給予高糖后血糖峰值也很低的原因。在移植INS-1后再給予STZ，可以破壞動物自身胰島，但對移植的細胞影響不大，說明胰島素瘤細胞對STZ具有一定的抵抗作用。

綜上所述，通過移植INS-1細胞可以成功建立胰島素瘤動物模型，該模型具有臨床胰島素瘤的特點，適用于對胰島素瘤的深入研究。尤其是INS-1細胞移植后注射STZ組將自身胰島破壞，但對移植細胞影響小，更適用于胰島素瘤的深入研究。此外，胰島素瘤細胞不僅表達胰島素還表達胰高血糖素，同時表達胰高血糖素是否對瘤細胞的成瘤性和功能具有影響還有待進一步研究。

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Establishmentofinsulinomaanimalmodelsandobservationoftumorcharacteristics

CHENG Lan-yun1,3, XU Shi-qing2, ZHANG Wen-jian2, LOU Jin-ning2, MEN Xiu-li1

(1DepartmentofPathophysiology,SchoolofBasicMedicine,HebeiUnitedUniversity,Tangshan063000,China;2InstituteofClinicalMedicine,China-JapanFriendshipHospital,Beijing100029,China;3DepartmentofPathology,ZhuozhouCity’sHospital,Zhuozhou072750,China.E-mail:xiulimen@126.com)

AIM: To establish the animal model of insulinoma and to analyze the properties of insulinoma for further study.METHODSThe hormone-releasing ability of rat insulinoma cell line INS-1 was detectedinvitro. INS-1 cells were transplanted into the left kidney capsule of nude mice. The islets of the animals were destroyed by intraperitoneal injection of streptozocin (STZ) 3 d before transplantation or 2 weeks after transplantation. The venous blood was sampled, and the level of blood glucose less than 2.8 mmol/L was defined as successful establishment of insulinoma model. Different irritants were given to the model animals, and the changes of blood glucose and insulin content in serum were observed. The pancreatic tissues and the renal tissues in the injecting sites were taken from all mice for detecting insulin and glucagon by immunohistochemical staining.RESULTSInsulinoma cells expressed insulin and glucagon at the same time. The blood glucose was less than 2.8 mmol/L 3 to 4 weeks after inoculation of INS-1 cells. Apparent tumor formed in the left kidneys where INS-1 cells were transplanted and the tumor diameters were more than 1 cm. The level of blood glucose transiently increased to higher than the normal level in the mice with tumor cell transplantation after intraperitoneal injection of STZ, and then decreased gradually and returned to less than 2.8 mmol/L after 2 weeks. The level of blood glucose in the normal nude mice after administration of STZ increased significantly. After transplantation of INS-1 cells, the level of blood glucose decreased gradually, and returned to less than 2.8 mmol/L after 4 weeks. After stimulated with high glucose, the blood glucose levels in the mice with 3 methods to establish the insulinoma models showed lower glucose peaks than that in the normal control mice. After stimulated with high glucose plus arginine or acetylcholine in the normal animals, the blood glucose peak was lower than that in the normal animals only stimulated with high glucose, and rapidly recovered to the normal level. However, the levels of blood glucose in the mice with 3 methods to establish the insulinoma models under the same stimulations were significantly higher than that in the mice only stimulated with high glucose. After stimulated with high glucose plus norepinephrine, the blood glucose peak time in the normal animals delayed, and the blood glucose level declined slowly. After stimulated with high glucose plus norepinephrine, the levels of blood glucose in the mice with 3 methods to establish the insulinoma models increased as compared with that in the mice only stimulated with high glucose. Compared with normal control group, serum insulin in insulinoma mice increased significantly.CONCLUSIONThe insulinoma animal model is successfully established by transplantation of INS-1 cells into the renal capsule of nude mice. The insulinoma cells express both insulin and glucagon, and are not easily damaged by STZ.

Insulinoma; Models, animal; INS-1 cells; Glucose

R736.7

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2013.04.034

1000- 4718(2013)04- 0761- 08

2012- 09- 08

2013- 03- 14

國家自然科學基金資助項目(No.30971410)

△通訊作者 Tel： 0315-3725612； E-mail： xiulimen@126.com