山東寶來利來生物工程股份有限公司 張志焱 劉海濤 李金敏 李偉 張菊 谷巍

乳酸菌是動物微生態制劑的主要菌種之一，其代謝產物中含有大量的乳酸、乙酸等有機酸以及抑菌素、維生素、消化酶、游離氨基酸等成分，對動物生長有促進作用，并且其中含有的乳酸菌素、過氧化氫和羅伊氏素等多種物質具有抑菌活性，對動物的腸道致病菌和腐敗菌有較強的拮抗作用（邱寶生等，2004）。目前對乳酸菌活菌制劑類產品作為動物微生態產品添加劑使用的研究很多，但對其代謝產物的使用效果研究還鮮有報道，本研究就將植物乳桿菌的發酵離心上清液作為肉仔雞的開口保健產品，探討植物乳桿菌的代謝產物對肉仔雞腸道菌群和血清抗氧化指標的影響，為乳酸菌代謝產物的應用提供依據。

1 材料與方法

1.1 乳酸菌發酵代謝產物的制備

1.1.1 供試菌株 植物乳桿菌LP99（Lactobacillus LP99），由山東寶來利來生物工程股份有限公司菌種保藏中心保存。

1.1.2 培養基 MRS培養基：葡萄糖20 g，檸檬酸銨2 g，乙酸鈉5 g，磷酸氫二鉀5 g，硫酸錳0.2 g，硫酸鎂0.5 g，蛋白胨 10 g，牛肉膏 10 g，酵母膏5 g，土溫－801 g，蒸餾水 1000 mL，pH 6.0。

1.1.3 發酵代謝產物的制備 將植物乳桿菌LP 99菌種接種在MRS斜面培養基中，37℃培養復壯，24 h后傳代，再接種到裝有100 mL MRS液體培養基的100 mL鹽水瓶中，37℃恒溫培養箱培養24 h，接種到裝有1 LMRS液體培養基的1 L三角瓶中，37℃恒溫培養箱培養24 h，3500 g離心，取上清液即為植物乳桿菌LP 99的發酵代謝產物。

1.2 試驗動物及飼養管理 選用1日齡健康AA肉仔雞300只，分為空白對照組、抗生素組和發酵上清液組。其中發酵上清液組分為1、2 mL/d·只和3 mL/d·只三個劑量組，均采用1∶1稀釋方式飲水使用；抗生素選用氟苯尼考 （山東農業大學提供），3 g兌20 kg水飲用。從2日齡開始飲用，每個組設3個重復，每個平行20只肉雞。采用雙層籠養，自由采食。試驗周期為10 d。

1.3 日糧組成與營養水平 采用玉米-豆粕型基礎日糧，參照2004年我國肉仔雞營養標準（NY/T33-2004）進行配制。日糧組成及營養水平見表1。

表1 日糧組成及營養水平（風干基礎）

1.4 測定指標

1.4.1 腸道菌群 試驗期間每3 d每組分別隨機抽取三只雞屠宰，屠宰雞均取直腸前端腸段放入液氮中，以備微生物測定。測定時在超凈工作臺中稱取直腸前端腸段內容物1 g，加入到裝有100 mL滅菌生理鹽水和玻璃珠的250 mL三角瓶中，搖床振蕩30 min，10倍遞倍稀釋混勻平板法計數，分別計數大腸桿菌，沙門氏菌、乳酸桿菌的活菌數。

大腸桿菌用伊紅美藍培養基，沙門氏菌用SS瓊脂培養基，乳酸桿菌用LBS培養基，大腸桿菌和沙門氏菌在37℃培養箱中培養24 h后計數，乳酸桿菌在37℃培養箱中培養48 h后計數?；罹鷶狄悦靠四c道內容物中細菌個數的對數lg CFU/g表示。

1.4.2 血清抗氧化指標的測定 試驗期間每5 d每組分別隨機抽取三只雞心臟采血，離心制備血清，-80℃凍存，用于抗氧化指標的測定。

GSH-Px活性的測定采用二硫代二硝基苯甲酸法，SOD活性的測定采用黃嘌呤氧化酶法，MDA含量的測定采用硫代巴比妥法。試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，操作過程按試劑盒說明書進行。

1.5 數據處理 試驗數據經Excel處理后，采用SPSS16.0進行方差分析，采用其中的Duncan’s法進行多重比較，P＜0.05為差異顯著性標準。

2 結果

2.1 乳酸菌代謝產物對肉仔雞腸道菌群的影響由表2可見，各乳酸菌代謝產物組和抗生素組的沙門氏菌和大腸桿菌的數量均顯著低于對照組（P＜0.05），抗生素組的乳酸菌活菌數顯著低于對照組和乳酸菌代謝產物組（P＜0.05），且乳酸菌代謝產物組的乳酸菌活菌數高于對照組，這說明抗生素在殺滅沙門氏菌和大腸桿菌的同時，也殺死了大量的有益菌——乳酸菌，而乳酸菌代謝產物在抑制沙門氏菌和大腸桿菌的同時，還有利于乳酸菌的生長繁殖。

表2 乳酸菌代謝產物對肉仔雞腸道微生物的影響lg CFU/g

2.2 乳酸菌代謝產物對肉仔雞血清抗氧化指標的影響 由表3可見，飲用植物乳桿菌LP 99發酵代謝產物5 d和10 d后，各乳酸菌代謝產物組均能顯著地提高血清中GSH-Px的活性 （P＜0.05）。SOD活性各乳酸菌代謝產物組均高于對照組，但只有2 mL組與對照相比差異顯著 （P＜0.05），1 mL組和3 mL組與對照相比均差異不顯著（P＞0.05）?？股亟M（氟苯尼考組）雞只血清中的GSH-Px活性和SOD活性與對照組相比均無顯著提高。

表3 GSH-Px和SOD活性測定結果

3 討論

3.1 乳酸菌代謝產物對肉仔雞腸道菌群的影響大量研究證明，在雛雞日糧中添加乳酸菌制劑可顯著增加腸道益生菌的數量，有利于動物腸道健康。李雪平等（2011）研究報道，日糧中添加乳酸菌制劑可顯著提高回腸中乳酸菌的含量，顯著降低回腸、盲腸中大腸桿菌的含量。王晶等（2009）研究發現，與抗生素組相比，添加同源乳酸菌能更好抑菌和低聚木糖可以使肉雞空腸的乳酸菌數提高20.21%（P ＜ 0.05）。許提森（2008）報道，投喂乳酸菌活菌制劑后，雞腸道中的雞傷寒沙門氏菌的數量明顯下降。但目前大量的研究均集中于乳酸菌活菌微生態制劑在肉雞日糧中的應用效果研究，對其發酵代謝產物的應用效果研究還鮮見報道。本試驗利用植物乳桿菌LP99的液體發酵代謝產物，采用飲用方式，飼喂肉仔雞結果表明，2～10日齡的肉仔雞飲用乳酸菌的代謝產物，在提高腸道乳酸菌數量的同時，可以顯著降低雞傷寒沙門氏菌和大腸桿菌的數量。說明乳酸菌的代謝產物可以很好地維持有益菌的優勢作用，同時其中的有機酸、細菌素和過氧化氫等有效地抑制了沙門氏菌、大腸桿菌的繁殖，從而可以減少有毒代謝產物，減少腸道疾病的發生。試驗同時證明，抗生素氟苯尼考在殺滅沙門氏菌和大腸桿菌的同時，也殺死了大量的有益菌——乳酸菌，從而破壞了健康雞只的腸道菌群平衡。

3.2 乳酸菌代謝產物對肉仔雞血清抗氧化指標的影響 體內抗氧化酶主要包括GSH-Px、SOD等。GSH-Px是動物體內廣泛存在的一種重要的催化過氧化物分解的酶類，它可將H2O2還原為H2O，作用是清除體內的自由基，保護細胞免受自由基的毒性損傷。本試驗結果證實，飲用植物乳桿菌LP99發酵代謝產物能顯著提高血清中的GSH-Px的活性（P＜0.05），從而明顯地提高機體的抗氧化機能，增強肉雞的免疫力。而抗生素氟苯尼考組的GSH-Px活性和SOD活性與對照組相比均無顯著差異。

4 結論

本試驗研究表明，肉仔雞飲用植物乳桿菌LP99的代謝產物可顯著降低腸道內容物中沙門氏菌和大腸桿菌的數量，并能一定程度上促進腸道內容物中乳酸桿菌增殖，其中2 mL/d組可顯著提高肉仔雞血清中的GSH-Px活性和SOD活性（P＜0.05），提高機體的抗氧化能力，增強肉雞的免疫力。

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[4]王晶，許麗，袁玲，等.同源乳酸菌對雛雞生長性能和盲腸菌群的影響[J].中國飼料，2009，15：24 ～ 26.

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