夏季養生顆粒對高溫條件下心臟的保護作用

王桐生， 龍子江， 黃金玲， 吳德玲， 謝 鳴

(1．安徽中醫學院藥理教研室，安徽合肥230038;2．北京中醫藥大學方劑學學科，北京100029)

高溫應激對機體可造成廣泛的多臟器損傷，也是誘發心腦血管疾病的常見因素之一。夏季養生顆粒是根據中醫四季養生經驗設計出的適用于夏季養生的中藥保健飲料，該方具有益氣養陰、清熱生津的功效，對高溫環境中的機體具有一定的保護作用。本實驗觀察了夏季養生顆粒對高溫環境下動物生存及心、肝等臟器的保護作用。

1 材料

1.1 動物 SD大鼠，雄性，體質量 (200±20)g;昆明種小鼠，雌雄各半，體質量 (20±2)g，由安徽省實驗動物中心提供，動物合格證號為SCXK(皖)2005-001號。

1.2 藥物與試劑 夏季養生顆粒由人參、麥冬、葛根、銀花、茶葉組成，按常規水提法提取制成顆粒，8.5 g/袋(相當于生藥18 g)，由北京中醫藥大學國家重點方劑學科實驗室提供。復方丹參滴丸，天津天士力集團生產，批號為:20080722，使用前取滴丸輕研磨，加適量蒸餾水配制備用。Ca2+-Mg2+-ATP酶測定試劑盒、Na+-K+-ATP酶測定試劑盒，由南京建成生物科技有限公司生產，批號均為20100730。天冬氨酸轉移酶 (AST)、丙氨酸轉移酶(ALT)、磷酸肌酸激酶 (CK)、乳酸脫氫酶 (LDH)均為Olympus公司原裝試劑，批號分別為 8756、8723、8178、8149。

1.3 儀器 GNP—9080型隔水式恒溫箱，上海三發科學儀器有限公司生產;754-分光光度計，上海科學儀器公司生產;奧林帕斯—400型全自動生化分析儀，日本Olympus公司生產。

2 方法

2.1 對小鼠的耐高溫作用 體質量為18～22 g小鼠100只，雌雄各半，隨機分成空白對照組、陽性藥組 (復方丹參滴丸組，0.32 g/kg)、夏季養生顆粒小、中、大劑量組(分別為1.11、3.32、9.95 g/kg，按體表面積計算，相當于人用量8.5 g/d的1、3、9倍)共5組，每組20只。各組按劑量灌胃給藥，連續7 d，正常組給予等容積蒸餾水，末次給藥后30 min，將小鼠放入 (45±1)℃的恒溫箱中，記錄小鼠的存活時間 (50 min未死按50 min計算)，計算50 min的各組存活數。

2.2 對高溫條件下大鼠血清和心肌組織相關酶的影響［1-2］取體質量為180～220 g雄性大鼠60只，隨機分成正常組、模型組、陽性藥組 (復方丹參滴丸組，0.14 g/kg)、夏季養生顆粒小、中、大劑量組 (分別為0.70、1.40、2.80 g/kg，按kg體質量計算，相當于人用量8.5 g/d的5、10、20倍)，各組動物按劑量灌胃給藥，連續7 d，正常組、模型組給予等容量蒸餾水，末次給藥后30 min，除正常組外，其余各組動物放入 (45±1)℃恒溫箱中，30 min后取出，迅速麻醉，腹主動脈采血，分離血清，按速率法測定血清中AST、ALT、CK、LDH量。于冰盤上迅速摘取心臟，用冷生理鹽水洗盡，精確稱取一定量心肌組織，用冷生理鹽水制成10%的勻漿，按試劑盒說明書測定心肌Ca2+-Mg2+-ATP酶和Na+-K+-ATP酶活力。

3 結果

3.1 對小鼠的耐高溫作用 結果見表1。

表1 對高溫條件下小鼠存活時間及存活數影響 ± s，n=20)

表1 對高溫條件下小鼠存活時間及存活數影響 ± s，n=20)

注:與空白對照組比較，*P＜0.05。

組 別 劑量/(g·kg－1)存活時間/min存活數/只存活率/%空白對照組 － 24.75±12.18 1 5丹參滴丸組 0.32 31.40±14.16 6 30*養生顆粒組 (小劑量) 1.11 25.35±11.46 1 5養生顆粒組 (中劑量) 3.32 27.00±12.68 3 15養生顆粒組 (大劑量) 9.95 31.60±11.09 6 30*

由表1可見，連續給藥7 d，丹參滴丸組和夏季養生顆粒中、大劑量組小鼠高溫條件下的存活時間和動物存活數均有不同程度的延長和增加 (P＞0.05)，其中丹參滴丸組、夏季養生顆粒大劑量組動物存活率明顯增加，與空白對照組的差異有顯著性意義 (P＜0.05)。

3.2 對高溫應激大鼠血清酶及心肌酶的影響 結果見表2和表3。

由表2可見，與正常組比較，造模各組大鼠血清中AST、ALT、CK、LDH的量均明顯增高，差異均有顯著性意義 (P＜0.05)，說明在高溫條件下大鼠臟器受到損傷。與模型組比較，夏季養生顆粒大劑量組大鼠血清中ALT和CK量均明顯降低 (P＜0.05)，其他各組血清AST和LDH量呈不同程度降低，但差異無顯著性意義 (P＞0.05)。結果顯示夏季養生顆粒對高溫環境下大鼠內臟損傷有一定的保護作用。

表2 夏季養生顆粒對高溫應激大鼠血清酶的影響 (±s，n=10)

表2 夏季養生顆粒對高溫應激大鼠血清酶的影響 (±s，n=10)

注:與正常組比較，*P＜0.05;與模型組比較，#P＜0.05。

組 別 劑量/(g·kg－1)AST/(U·L－1)ALT/(U·L－1)CK/(U·L－1)LDH/(U·L－1)正常組 － 153．17 ±19．79# 33．33 ±12．40# 210．80 ±80．30#436．60 ±216．15模型組 － 218．64 ±48．67* 54．03 ±18．47* 379．30 ±151．52* 644．50 ±288．44丹參滴丸組 0．14 192．45 ±35．45 40．47 ±6．45 351．40 ±193．75 591．70 ±310．06養生顆粒組 (小劑量) 0．70 203．24 ±31．02 46．19 ±6．76 370．00 ±131．37 602．30 ±351．07養生顆粒組 (中劑量) 1．40 194．81 ±47．85 48．71 ±16．85 307．60 ±140．35 624．40 ±418．55養生顆粒組 (大劑量) 2．80 200．40 ±22．22 34．16 ±12．67# 175．00 ±80．66#532．80 ±272．17

表3 對高溫應激大鼠心肌酶的影響 (±s，n=10)

表3 對高溫應激大鼠心肌酶的影響 (±s，n=10)

注:與正常組比，*P＜0.05;與模型組比，#P＜0.05。

組 別 劑量/(g·kg－1) Na+-K+-ATP 酶/(U·mgprot－1) Ca2+-Mg2+-ATP 酶/(U·mgprot－1)正常組 －21.59±5.71 16.27±3.81模型組 － 12.22±4.44* 12.77±3.55*丹參滴丸組 0.14 19.93±7.58# 13.37±5.51養生顆粒組 (小劑量) 0.70 13.85±4.36* 13.52±3.71養生顆粒組 (中劑量) 1.40 15.77±5.67* 13.98±5.15養生顆粒組 (大劑量) 2.80 19.89±6.62#13.79±2.93

由表3可見，高溫條件下模型組大鼠心肌Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活力均呈明顯下降 (P＜0.05)。與模型組比較，丹參滴丸組和夏季養生顆粒不同劑量組組大鼠心肌Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活力均呈不同程度升高，其中丹參滴丸組和夏季養生顆粒大劑量組的Na+-K+-ATP酶活力提高明顯 (P＜0.05)。

4 討論

環境溫度與人體的健康密切相關。在高溫情況下工作生活，機體體溫調節功能發生紊亂，導致大量熱蓄積，表現為體溫升高、肌肉痙攣、暈厥等。臨床研究表明［3］，高溫中暑時血清 CK、AST、LDH和ALT均明顯升高，CK、LDH、AST和ALT活性可作為對中暑病情判斷及預后的重要參考指標。實驗研究顯示，熱應激所致的線粒體損傷及其生物學效應是熱應激心肌細胞損傷的重要機制，在高溫條件下大鼠心肌線粒體氧化代謝能力降低，Ca2+-ATP酶活性顯著下降，心肌細胞內鈣超載，而且隨溫度的升高而加重，提示對線粒體結構與功能的保護可能是防治熱應激機體心功能損傷的重要途徑［4-6］。

夏季養生顆粒是由人參、麥冬、葛根、銀花、茶葉所組成，方中藥味均為中醫用于夏季保健所常用。人參大補元氣，養陰生津;麥冬養陰清熱，生津止渴;葛根清熱解暑，舒利經脈;銀花清熱解毒，疏散風熱;茶葉清熱利尿，明目醒神。全方合之有清熱解暑，益氣養陰之功。現代研究表明，人參具有抗應激作用［6-7］對心、肝損傷具有保護作用［8］;麥冬、葛根具有顯著的抗心肌缺血、改善心腦功能作用［9-10］;金銀花所含綠原酸、黃酮等成分有利膽、保肝、抗氧化的作用［11］。清茶富含多酚、多糖及黃酮類等成分，具有抗氧化、降血糖、抗輻射等作用［12-13］，對心血管系統有明顯的保護作用。本研究發現，夏季養生顆粒能增加或提高小鼠高溫下的生存時間和存活率，降低熱應激條件下大鼠血清ALT和CK量和顯著增加大鼠心肌Na+-K+-ATP酶的活力。結果表明，夏季養生顆粒有一定的提高機體耐高溫的作用，對高溫條件下的心、肝等臟器具有一定的保護作用，其機制可能與清除自由基，抗氧化損傷有關。

實驗中的陽性對照藥復方丹參滴丸為治療心肌缺血的常用中成藥，由丹參、三七、冰片所組成，具有活血行氣止痛功能，與夏季養生顆粒在組成和功用 (益氣養陰，清熱祛暑)上有明顯不同。前期研究表明，丹參滴丸和夏季養生顆粒對冠脈結扎心肌缺血均有顯著的保護作用。本實驗中觀察到，實驗劑量下的丹參滴丸和夏季養生顆粒在提高高溫下的動物生存率和心肌酶活力方面具有類似的作用，但在對高溫條件下大鼠血清酶學的影響方面卻有所不同，如前者無明顯作用，后者則能顯著降低大鼠異常升高的血清ALT和CK量。結果提示，二方的藥理作用有所不同，抗心肌缺血在機體耐高溫中可能具有重要作用，但夏季養生顆粒則可能具有更廣泛的多臟器保護作用。

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