不同激素對補血草器官分化的影響

溫銀元，馮文新，尹美強，趙 娟，王計平，王玉國

（山西農業大學農學院，山西太谷030801）

補血草（Limonium sinuatum）是白花丹科補血草屬（Limonium Mill.）多年生或2年生草本植物，是目前天然干花類中作切花批量生產的花之一[1]。此外，其還具有觀賞與藥用價值[2]，可作為一種新興的朝陽產業。補血草一般采用種子繁殖，但其遺傳性十分特殊，具有大量的不孕枝，又具有同型雜交不孕的特性，種子結實率較低，限制了專業化生產的發展，因此，利用組織培養技術進行快繁為國內外市場提供種苗尤為重要[3-6]。關于補血草的組織培養國內外已有報道[7-15]，但未見有以花梗為外植體進行組織培養的研究。

本試驗以補血草幼嫩帶節花梗為材料，在離體條件下研究不同激素對花梗愈傷組織的誘導、不定芽分化、繼代培養及生根的影響，建立和優化離體再生體系，旨在為補血草快速繁殖、種質資源保存及遺傳轉化提供有效的途徑和技術。

1 材料和方法

1.1 植物材料

以臺灣引進的補血草（Limonium sinuatum）的幼嫩帶節花梗為試驗材料。

1.2 愈傷組織的誘導

將補血草幼嫩花梗剪成長2 cm左右的帶節小段，剪去葉片，無菌條件下，用70%酒精浸泡30 s、無菌水沖洗3次；然后用0.1%HgCl2溶液浸泡8 min，無菌水沖洗5次，吸干表面水分后接種于MS培養基（附加不同濃度配比的2，4-D和6-BA）；暗培養3 d后在光下培養，溫度（25±2）℃，20 d時觀察、記錄愈傷組織的出愈率以及愈傷組織的質量（大小、顏色、緊實程度），選擇適宜的激素配比。光照時間16 h/d，光照強度為3 000～4 000 lx。

1.3 誘導不定芽的分化

將愈傷組織接于附加不同濃度配比6-BA和NAA的MS培養基上，觀察、記錄愈傷組織芽的分化率以及芽的生長狀況，選擇適宜的激素配比。光照時間16 h/d，光照強度3 000～4 000 lx，溫度（ 25±2）℃。

不定芽誘導率＝產生不定芽的愈傷數/接種愈傷數×100%；平均每塊愈傷組織誘導不定芽數＝產生的不定芽總數/產生不定芽的愈傷數。

1.4 繼代培養

將分化的小苗轉接到繼代培養基上培養，根據芽分化數和芽增殖率篩選適合補血草分化生長的最適激素配比和培養條件。

1.5 生根培養

繼代培養產生大量的叢生芽，轉入不同無機鹽質量濃度（ 1/4 MS，1/2 MS，MS）且含有不同濃度IBA的培養基（蔗糖質量濃度為20 g/L）中，根據苗的生根率、株平均根數和根長來選擇適宜的激素配比和培養條件。

生根率＝生根植株數/接種株數×100%。

2 結果與分析

2.1 不同激素對補血草花梗愈傷組織誘導影響

由表1可知，在不同激素配比的培養基中，補血草花梗都不同程度地形成愈傷組織，其誘導率、出愈速度、愈傷組織的色澤和質地都各不相同，而在不含任何激素的MS培養基中幾乎不能誘導出愈傷組織。單獨附加6-BA或2，4-D時，愈傷組織出愈率均很低，但2，4-D誘導愈傷組織頻率高于6-BA；2種激素配合使用時，6-BA質量濃度為 0.5，1.0 mg/L，2，4-D質 量濃 度為1.0，1.5，2.0 mg/L的6個配比愈傷組織出愈率均可達80%左右，出愈速度較快，產生的愈傷組織質量較好；當6-BA質量濃度為1.5 mg/L時，各配比的出愈率都很低，出愈速度較慢，產生的愈傷組織質量較差。

表1 不同質量濃度激素對補血草花梗愈傷組織誘導的影響

在 6-BA為 0.5～1.0 mg/L，2，4-D為 1.0～2.0 mg/L時，各激素配比均適用于愈傷組織的誘導，其中，以 MS＋6-BA 1.0 mg/L＋2，4-D 2.0 mg/L的愈傷組織誘導率最高，為89.2%，出愈速度最快（12 d），產生的愈傷組織顏色翠綠，質地緊密（圖1），其為補血草花梗愈傷組織誘導的最佳培養基。

2.2 激素6-BA與NAA對補血草不定芽的誘導

將誘導產生的愈傷組織，接種在附加不同質量濃度 NAA（ 0，0.1，0.5，1.0 mg/L）與 6-BA（ 0.5，1.0，2.0，4.0 mg/L）組合的 MS培養基上，進行不定芽的誘導，其結果如表2所示。

表2 不同質量濃度6-BA與NAA對不定芽誘導影響

由表2可知，MS基本培養基附加一定質量濃度的6-BA和NAA有利于補血草不定芽的發生。由花梗誘導產生的愈傷組織繼代培養后3周左右，其表面和周邊出現較大顆粒，大多數為綠色和淺綠色，也夾雜少量淺褐色；接種約5周，在綠色或淺綠色顆粒上形成芽點，繼而分化出不定芽。當6-BA單獨使用時，隨著6-BA質量濃度的升高，不定芽的誘導率逐漸增加，6-BA增加至2.0 mg/L時效果最佳，不定芽誘導率達到46.4%，此時平均每塊愈傷誘導不定芽數也達到最大，為2.5個；6-BA質量濃度增加到4.0 mg/L時，不定芽誘導率及平均每塊愈傷誘導不定芽數又隨之下降。NAA加入到含6-BA的培養基中后，可提高不定芽的誘導率，愈傷組織培養在6-BA 2.0，4.0mg/L與NAA 0.1，0.5 mg/L組合的培養基上，不定芽的誘導率在61.4%～74.3%之間，每塊愈傷產生的不定芽數均大于3個，其中，以MS＋6-BA 2.0mg/L＋NAA 0.1 mg/L的效果最佳，誘導率為74.3%，平均每塊愈傷誘導的不定芽數為3.6個（圖2）。

2.3 激素6-BA和NAA對補血草不定芽繼代培養與增殖的影響

將誘導產生的不定芽和腋芽切成等高的小芽，接種在繼代增殖培養基上進行分化增殖培養，結果列于表3。

表3 激素6-BA和NAA對補血草不定芽分化增殖的影響

從表3可以看出，在單獨使用6-BA時，隨著6-BA質量濃度的增加，補血草的分化率、增殖系數都增加，6-BA質量濃度為1.5，2.0 mg/L時，分化率在70%以上，增殖系數大于3.0；高質量濃度的6-BA不利于分化出的幼苗生長，如6-BA為1.0 mg/L時，平均苗高為2.86 cm，而6-BA為1.5，2.0 mg/L時，苗高度則分別降低至2.35，2.27 cm。NAA和6-BA配合使用可以提高補血草的分化率和增殖系數，促進分化幼苗的生長，其中，以NAA 0.1～0.2 mg/L＋6-BA 1.5～2.0 mg/L時的效果最好，分化率大于85%，使幼苗數增加3倍以上（最高可達到4.80倍）（圖3）。當NAA質量濃度增加到0.5 mg/L時，可以增加試管苗的高度，但分化率和增殖系數均降低，且產生的幼苗瘦弱，在以后的繼代培養中分化和增殖能力較差。

2.4 激素IBA對補血草生根的影響

由表4可知，在不同培養基上，補血草的生根率、株平均根數及根長都有所不同，其中，以1/2 MS的生根率最大。IBA以1.0 mg/L的效果最好，在1/2 MS＋IBA 1.0 mg/L的培養基上，生根率高達100%；株平均根數為4.3條，最多的有8條；株平均根長為2.6 cm，最長的4.6 cm。當IBA質量濃度為1.5 mg/L時，試管苗基部有愈傷組織產生，抑制根的形成，導致根基部加粗，根系短小。

表4 培養基及IBA對補血草試管苗生根的影響

3 結論

本試驗結果表明，在MS＋6-BA 1.0 mg/L＋2，4-D 2.0 mg/L的培養基上，補血草花梗愈傷組織誘導率最高（ 89.2%），出愈速度最快（12 d），產生的愈傷組織顏色翠綠，質地緊密，為補血草花梗愈傷組織誘導的最佳培養基。6-BA與NAA配合使用，可提高補血草不定芽的誘導率和增殖系數。不定芽誘導時，以MS＋6-BA 2.0 mg/L＋NAA 0.1 mg/L的效果最佳，誘導率為74.3%，平均每塊愈傷組織誘導的不定芽數為3.6個。以NAA 0.1～0.2 mg/L＋6-BA 1.5～2.0 mg/L的繼代增殖效果最好，分化率大于85%，使幼苗數增加3倍以上。生根培養時，以1/2 MS＋IBA 1.0 mg/L＋蔗糖20 g/L的生根率最大，為100%。

［1］黃勇，張秀省，孟憲磊.野生花卉補血草屬及其開發利用[J].中國種業，2002（ 8）：42.

［2］湯新慧，沈敏.補血草屬植物化學成分及藥理作用研究進展[J].時珍國醫國藥，2007，18（ 8）：1874-1876.

［3］李秀花.野生花卉二色補血草引種利用研究 [J].中國園林，2003（ 10）：78-80.

［4］許毅洪，李福生，趙洪濤.人工栽培二色補血草前景光明[J].植物雜志，2004（ 1）：12-13.

［5］鄧旺華，王雁.補血草屬植物在城市綠化中的應用[J].中國城市林業，2006，4（ 2） ：58-60.

［6］陳佳瀛，杜秀達.補血草的組織培養和快速繁殖[J].植物生理學通訊，2002，38（ 6）：594.

［7］那淑芝，李云祥，甄占萱，等.二色補血草的組織培養與快速繁殖[J].承德民族師專學報，2003，23（ 2）：79-80.

［8］陳銀鳳，陳篙.二色補血草試管苗生根及移栽基質研究[J].亞熱帶植物科學，2001，30（ 3）：37-39.

［9］倪躍元，朱錦文，趙曉藝.大花補血草優株無性系的建立[J].植物生理學通訊，1996，32（ 3）：200.

［ 10］ Hsu NaiWen，Liu TsuHwie.Themicropropagation of Limonium wrightii（ Hance） O.Kuntze[J].Journal of the Chinese Society for Horticultural Science，2000，46（ 3）：277-286.

［11］ John F Seelye.Shoot regeneration from leaf discs of Limonium perigrinum usingthidiazuron[J].New Zealand Journal of Crop and Horticultural Science，1994，22：23-29.

［ 12］ Huang CL.In vitro propagation of Limonium wrightii（ Hance）KTZE.（Plumbaginaceae），an ethnomedicinal plant，fromshoottip，leaf-and inflorescence-node explants[J].In vitro Cellular and Development Biology-Plant，2000，36（ 3） ：220-224.

［13］柴慈江，史燕山，駱建霞，等.二色補血草組織培養快速繁殖技術研究[J].天津農業科學，2010，16（ 2）：27-28，31.

［14］楊麗莉，張曉，晉凡生，等.激素對萱草組織培養參數的影響[J].山西農業科學，2012，40（ 8）：815-818.

［15］范小峰，楊穎麗，劉軍梅，等.黃花補血草愈傷組織的誘導和植株再生[J].西北植物學報，2007，27（ 2）：257-261.