高效液相色譜法測(cè)定補(bǔ)腎口服液中淫羊藿苷含量

劉寶磊，孫佳石

(1.昆明消防指揮學(xué)校校務(wù)部衛(wèi)生隊(duì)，云南 昆明 650208;2.云南省食品藥品檢驗(yàn)所，云南 昆明 650011)

補(bǔ)腎口服液由熟地、淫羊藿、肉蓯蓉、人參等12味中藥組方，用于早泄遺精、腰痛腎虛、麻木拘攣、風(fēng)濕痹痛、筋骨痿軟等癥，具有補(bǔ)腎壯陽(yáng)的功效[1]。方中君藥淫羊藿所含淫羊藿苷為補(bǔ)腎口服液的主要成分。為了確保用藥的安全有效，提高制劑質(zhì)量的可控性，筆者采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定了補(bǔ)腎口服液中淫羊藿苷含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀，包括 LC－10ATvp泵、SPD－10Avp檢測(cè)器、SCL－10Avp系統(tǒng)控制器(日本島津公司)。補(bǔ)腎口服液(自制);淫羊藿苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為0737－200813);水為二次蒸餾水，色譜純?yōu)橐译妫溆嘣噭┚鶠榉治黾儭?/p>

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:美國(guó) Welch XB －C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，柱壓為108 kgf;流動(dòng)相:乙腈－0.1%磷酸溶液(35∶65);檢測(cè)波長(zhǎng):270 nm;柱溫:室溫;流速:1.0mL/min;進(jìn)樣量:10 μL。在此條件下，淫羊藿苷理論板數(shù)不低于1 500，色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

取淫羊藿苷對(duì)照品2.32mg，精密稱定，加入甲醇制成質(zhì)量濃度為0.092 8 g/L的對(duì)照品溶液。取補(bǔ)腎口服液10mL，在分液漏斗中進(jìn)行精密吸取，加入醋酸乙酯液+醋酸乙酯進(jìn)行提取[2]，每次20mL，共3次，加50%乙醇使溶解，置10mL量瓶中定容，制得供試品溶液。取不含淫羊藿的陰性樣品10mL，照供試品溶液制備方法制得陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

空白干擾試驗(yàn):取2.2項(xiàng)下3種溶液，依法進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果空白無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

線性關(guān)系考察:精密吸取淫羊藿苷對(duì)照品溶液(0.092 8 g/L)1.0，2.0，2.5，3.0，4.0，5.0 μL，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)、峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=1.916 ×106X －0.083 6×106，r=0.999 7(n=6)。結(jié)果表明，淫羊藿苷進(jìn)樣量在40.31～191.5μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批號(hào)的樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果的 RSD為2.32%(n=5)，表明方法重復(fù)性良好。

精密度試驗(yàn):吸取同一對(duì)照品溶液，按擬訂的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果的 RSD為2.34%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):吸取同一供試品溶液，分別在配制后0，2，4，6，8 h測(cè)定[3]。結(jié)果的 RSD為1.42%(n=5)，表明試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):吸取已測(cè)知含量的樣品溶液5mL，再加入質(zhì)量濃度為0.098 4 g/L的淫羊藿苷對(duì)照品溶液2.5mL，照供試品溶液制備方法制備待測(cè)溶液[4]，依法進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 淫羊藿苷加樣加收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

在分液漏斗中進(jìn)行，精密吸取3批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算樣品中淫羊藿苷的含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(g/L)

3 討論

淫羊藿中的淫羊藿苷含量較高，容易分離、提取，故以此作為定量指標(biāo)[5]。波長(zhǎng)選擇時(shí)，對(duì)淫羊藿對(duì)照品溶液在200～300 nm波長(zhǎng)范圍進(jìn)行了紫外掃描，結(jié)果在270 nm波長(zhǎng)處淫羊藿苷呈最大吸收，且在供試品溶液色譜圖中淫羊藿苷與其他組分達(dá)到了基線分離、靈敏度較高[6]，故以此為測(cè)定波長(zhǎng)。提取樣品時(shí)，應(yīng)用甲醇超聲的分離效果最好，可將淫羊藿苷完全提取，故選擇甲醇作為提取溶劑;超聲時(shí)間分別考察了30 min與45 min[7]，均能將淫羊藿苷提取完全，故選定30 min。分別以乙腈－0.1%磷酸溶液(35∶65)、乙腈－水(30∶70)為流動(dòng)相，結(jié)果顯示，前者分離度更好，保留時(shí)間適宜，分離度大于1.5，故確定為流動(dòng)相。

采用文中建立的高效液相色譜法，可高效分離各組分，且空白干擾試驗(yàn)顯示無(wú)干擾[8]，操作簡(jiǎn)便易行、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、專屬性強(qiáng)，因此可作為補(bǔ)腎口服液的質(zhì)量控制方法。

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