氣相色譜法測(cè)定米格列奈鈣中有機(jī)溶劑殘留量

曾 檀 ，霍丹群 ，程輝躍 ，周祥敏

(1.重慶大學(xué)生物工程學(xué)院，重慶 400030;2.重慶市食品藥品檢驗(yàn)所，重慶 401121; 3.重慶市藥物過程與質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，重慶 401121)

米格列奈是繼瑞格列奈、那格列奈后第3個(gè)新型非磺酰脲類口服降糖藥，是苯丙氨酸的衍生物。其水合鈣鹽為米格列奈鈣，最早由日本橘生藥品工業(yè)株式會(huì)社合成，于2004年在日本首次上市，2010年在中國(guó)取得了制劑的藥品批準(zhǔn)文號(hào)。米格列奈主要是通過抑制胰腺β細(xì)胞膜上三磷酸腺苷(ATP)依賴型K+通道，促進(jìn)Ca2+內(nèi)流，從而增加細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，促進(jìn)胰島素分泌，發(fā)揮降血糖的作用，與傳統(tǒng)磺酰脲類藥物相比，具有起效快、持續(xù)時(shí)間短、安全性高、耐受性好等優(yōu)點(diǎn)[1]。在其產(chǎn)品合成及精制過程中，使用了有機(jī)溶劑甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、氯仿。為控制產(chǎn)品質(zhì)量，筆者參照藥典相關(guān)規(guī)定[2]，采用頂空毛細(xì)管氣相色譜法同時(shí)測(cè)定了上述5種有機(jī)溶劑，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 7890N型氣相色譜儀(安捷倫科技有限公司)，配有FID檢測(cè)器。乙醇(上海振興化工一廠，批號(hào)200909288)，乙酸乙酯(天津市福晨化學(xué)試劑廠，批號(hào)20120412)，氯仿(重慶川東集團(tuán)有限公司，批號(hào)20120901)，甲醇(批號(hào)20120729)、二氯甲烷(批號(hào)20111109)、二甲亞砜(批號(hào)20120813)均為成都市科龍化工試劑廠產(chǎn)品，均為分析純;米格列奈鈣(市售品)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:DB－624彈性石英毛細(xì)管柱(0.32 mm×30 m，1.8 μm);進(jìn)樣口溫度:200 ℃;檢測(cè)器:FID，溫度:250 ℃;柱溫:采用程序升溫，初始溫度40℃，保持8 min，然后以45℃ /min升至220℃，保持3 min;載氣(N2)流速:1.0 mL/min;空氣流速:350 mL/min;氫氣流速:35 mL/min;分流比:10∶1;頂空溫度:80℃;平衡時(shí)間:30min;進(jìn)樣體積:1.0mL。在此條件下，色譜圖見圖1。

圖1 氣相色譜圖

2.2 溶液配制

分別稱取甲醇約 600 mg、乙醇約1 000 mg、二氯甲烷約120mg、乙酸乙酯約1 000mg、氯仿約12mg，精密稱定，置200mL容量瓶中，用二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。分別精密量取上述對(duì)照品貯備液10mL，置100mL容量瓶中，用二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻，精密量取10mL，置20mL頂空瓶中，密封，作為對(duì)照品溶液。精密稱取米格列奈鈣樣品1.0 g，置20mL頂空瓶中，加二甲亞砜10mL，密封，振搖使溶解，作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:精密量取對(duì)照品貯備液 5.0，7.5，10.0，12.5，15.0 mL，分別置 100 mL 容量瓶中，加二甲亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液Ⅰ～Ⅴ。取對(duì)照品溶液Ⅰ～Ⅴ各10mL，分別置20mL頂空瓶中，加蓋密封，于80℃平衡30min后取頂空氣進(jìn)樣，記錄色譜圖。以峰面積 Y為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度 X(μg/mL)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果見表1。可見，表明在測(cè)定限度范圍的50%至150%區(qū)間內(nèi)，各組分的線性關(guān)系良好。

表1 各溶劑回歸方程與線性范圍(n=5)

最小檢出濃度確定:在擬訂的試驗(yàn)條件下，逐級(jí)稀釋對(duì)照品貯備液，根據(jù)溶劑在色譜儀上的響應(yīng)值與儀器噪音的比值，以S/N為3計(jì)算，甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、氯仿5種殘留溶劑最低檢出質(zhì)量濃度分別為 3.0，1.5，2.0，0.4，0.3 μg/mL。

精密度試驗(yàn):取對(duì)照品溶液，共6份，分別置20mL頂空瓶中，加蓋密封，依法測(cè)定。結(jié)果甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和氯仿峰面積的 RSD 分別為 4.1%，3.9%，4.6%，5.2%和 9.7%(n=6)。

回收率試驗(yàn):取已測(cè)定含量的樣品1.0 g，共9份，精密稱定，置 20mL 頂空瓶中，分別加入對(duì)照品貯備液 0.8，1.0，1.2mL(分別相當(dāng)于測(cè)定限度的80%，100%，120%)，各3份，加二甲亞砜至10mL，加蓋密封后，依法測(cè)定。結(jié)果見表2。

重復(fù)性試驗(yàn):取樣品約1.0 g，精密稱定，置20mL頂空瓶中，加二甲亞砜20mL，密封，依法測(cè)定。結(jié)果乙醇含量為0.04%，RSD為1.3%(n=6)，甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和氯仿均未檢出。

2.4 樣品含量測(cè)定

取樣品約1.0 g，精密稱定，置20mL頂空瓶中，加二甲亞砜20mL，密封，依法測(cè)定。3批樣品中甲醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和氯仿均未檢出，乙醇含量分別為0.04%，0.04%，0.03%。

表2 各溶劑回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

3 討論

本品在甲醇、乙醇中易溶，在水中不溶。經(jīng)試驗(yàn)，以二甲亞砜為溶劑，在80℃加熱30min條件下，樣品能達(dá)到氣液平衡，故選用二甲亞砜作為溶劑。ECD檢測(cè)器較FID檢測(cè)器更適合二氯甲烷和氯仿的檢測(cè)，但考慮到實(shí)際工作中FID檢測(cè)器應(yīng)用更普遍，且在擬訂的條件下，二氯甲烷和氯仿的檢出限能滿足測(cè)定要求，故仍選用FID檢測(cè)器檢測(cè)。

[1]Sunga Y，Gonoi T，Shibasaki T，etal.The effects of mitiglinide(KAD 1229)，a new anti－diabetic drug，on ATP－sensitive K+channels and insulin secretion:comparison with the sulfonylureas and neteglinide[J].Eur JPharmacol，2001，431(1):119 － 125.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄61－附錄65.