氣相色譜法測定三七姜揮發(fā)油中樟腦及α－蒎烯含量

周 穎 ，龐興壽 ，梁木蘭

(1.廣西壯族自治區(qū)玉林市食品藥品檢驗所，廣西 玉林 537000;2.桂林醫(yī)學院，廣西 桂林 541004)

三七姜又稱小田七、竹田七、毛七、三七姜、姜田七等[1]，為姜科植物姜葉三七 Stahlianthus involucratus(King ex Bak.)Craib的干燥根狀莖、塊根，多年生草本，分布于廣西、廣東、海南、云南，廣西南寧、百色、玉林、柳州等市均有栽培，大面積種植尚未見報道，市場上流通商品少見，但民間應用范圍廣，尤其在廣西少數(shù)民族地區(qū)。中醫(yī)認為，三七姜有活血散瘀、消腫止痛的功效，用于跌打損傷、風濕骨痛、吐血衄血、月經(jīng)過多，外用治蟲蛇咬傷、外傷出血;壯醫(yī)認為，其有活血止血、散瘀止痛的功效，用于產(chǎn)后流血過多、咯血、血痢、血崩、胃寒痛、脾臟腫大、尿潴溜[2]。其揮發(fā)油含量為 1.15%，主要為姜三七醌(stahlianthusone)、莰烯(camphene)、香樹烯、樟腦(camphor)以及 α －蒎烯(α －pinene)等[3]。目前對三七姜的開發(fā)利用僅限于民間，有學者對其顯微鑒別[4]以及不同施肥量及種植密度對姜三七產(chǎn)量的影響[5]進行了研究，但未見有對其理化性質(zhì)、成分活性、藥理效應等相關研究，且其質(zhì)量標準也未充分完善。為此，擬通過氣相色譜法測定三七姜揮發(fā)油中樟腦和α－蒎烯含量，為其植物資源的開發(fā)利用與藥材質(zhì)量標準的完善提供理論依據(jù)。

1 儀器和試藥

島津7890A型氣相色譜儀;AG－204型電子天平;粉碎裝置;揮發(fā)油提取裝置。所用藥材購自廣西各地，并經(jīng)玉林食品藥品檢驗所龐興壽副主任藥師鑒定為正品。無水乙醇(分析純，廣東光華科技股份有限公司);乙酸乙酯(分析純，西隴化工股份有限公司);萘(分析純，天津市光復精細化工研究所);水楊酸甲酯(分析純，天津市光復精細化工研究所);水(哇哈哈純凈水);環(huán)己酮(色譜純，天津市光復精細化工研究所);α－蒎烯對照品(批號為897－200001)、樟腦對照品(批號為747－200005)均由中國藥品生物制品檢定所提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 揮發(fā)油提取

根據(jù)2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅩD揮發(fā)油測定法，將三七姜適當粉碎(過二號篩)，稱取50 g，置1 000mL燒瓶中，加5倍體積的水與玻璃珠數(shù)粒，搖勻混合，連接揮發(fā)油測定器與回流冷凝管，置電爐上加熱回流提取揮發(fā)油，回流提取5 h，得淡黃色的三七姜揮發(fā)油。

2.2 色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:DB－1701型毛細管柱(30m×0.25μm×0.32mm);檢測器:氫火焰離子化檢測器(FID);柱溫:初始溫度100℃，保持6min，以每分鐘8℃升至140℃并保持5min，再以每分鐘3℃升至150℃，最后以每分鐘25℃升至250℃并保持4.5 min;進樣口溫度:210℃;分流比:10∶1;檢測器溫度:280℃;氮氣流量:25 mL/min;氫氣流量:30mL/min;空氣流量:400mL/min。內(nèi)標物為環(huán)己酮。在此色譜條件下的色譜圖見圖1?？梢?，α－蒎烯、環(huán)己酮、樟腦保留時間分別為 7.858，9.762，21.095min，分離度分別為34.12，16.37，81.95，理論板數(shù)分別為 71500，116865，273 158。

圖1 色譜圖

2.3 溶液制備

取環(huán)己酮適量，精密稱定，加無水乙醇，制成每1 mL含0.992 mg的溶液，作為內(nèi)標溶液。取樟腦對照品適量，精密稱定，置5 0mL容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，制成每1mL含0.266 g的溶液，作為樟腦對照品貯備液;另取α－蒎烯對照品適量，置25mL容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，制成每1mL含0.436mg的溶液，作為α－蒎烯對照品貯備液。精密吸取2.1項下?lián)]發(fā)油0.01mL，置10mL容量瓶中，精密加入內(nèi)標溶液0.4mL，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.4 方法學考察

線性關系考察:精密量取樟腦對照品貯備液 2，5，5，4，3mL和 α － 蒎烯對照品貯備液 0.5，0.5，1.0，1.0，1.0 mL，分別置100，50，25，10，5mL 容量瓶中，精密加入內(nèi)標溶液 4.0，2.0，1.0，0.4，0.2mL，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，吸取 10 μL 注入氣相色譜儀，測定內(nèi)標物峰面積及對照品峰面積，以對照品與內(nèi)標物質(zhì)量濃度的比值為橫坐標、對照品與內(nèi)標峰面積的比值為縱坐標進行線性回歸，得樟腦和α－蒎烯的回歸方程 Y=1.181 5X+0.006 6(r=0.999 9)和 Y=0.747X+0.003 6(r=1.000)。結(jié)果表明，質(zhì)量濃度線性范圍樟腦為5.32～159.6μg/mL，α－蒎烯為2.18 ～ 87.2 μg/mL。

精密度試驗:取線性關系考察項下樟腦和α－蒎烯質(zhì)量濃度分別為53.20、17.44μg/mL的對照品溶液，按擬訂的色譜條件重復進樣6次。結(jié)果樟腦和α－蒎烯對照品與內(nèi)標物峰面積比值的 RSD分別為0.39%和1.21%(n=6)，均符合規(guī)定。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，在相同色譜條件下分別于配制后0，2，6，12，24 h時進樣測定。結(jié)果樟腦、α－蒎烯與內(nèi)標物峰面積比的 RSD分別為0.64%和1.09%(n=5)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復性試驗:取同一批三七姜揮發(fā)油，依法平行制備6份供試品溶液，依法測定。結(jié)果樟腦和α－蒎烯含量的 RSD分別為0.71%和0，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗:精密量取已知含量的2號樣品揮發(fā)油12.5μL以及樟腦對照品貯備液0.3mL和α－蒎烯對照品貯備液0.4mL置25mL容量瓶中，精密加入內(nèi)標溶液0.4mL，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，依法制備并分別測定。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.5 樣品含量測定

取各樣品，依法制備供試品溶液，分別進樣10μL。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量的測定結(jié)果

3 討論

曾考察了超聲、直接回流和揮發(fā)油提取法對樟腦、α－蒎烯含量的影響，結(jié)果顯示，采用揮發(fā)油提取法更充分。還考察了石油醚、乙酸乙酯、無水乙醇不同溶劑對測定結(jié)果的影響，結(jié)果無水乙醇對待測組分無干擾，且相對經(jīng)濟實惠、對壞境污染小、對人體危害小。因此，采用揮發(fā)油提取法、無水乙醇為溶劑的方法來提取三七姜中的樟腦和α－蒎烯。

目前已報道的測定樟腦及α－蒎烯含量的內(nèi)標物，包括萘、正辛醇、水楊酸甲酯、環(huán)己酮、正十四烷[6－8]等。曾考察了萘、水楊酸甲酯、環(huán)己酮，其中環(huán)己酮的保留時間位于樟腦和α－蒎烯兩對照品之間，且與被測物質(zhì)峰相距較近，并具有良好的分離度，對樟腦峰無干擾，綜合考慮其相對分子質(zhì)量、沸點等因素，最終選用環(huán)己酮作為內(nèi)標物。

本研究涉及的樣品數(shù)量及產(chǎn)地雖然較少，且所屬產(chǎn)地都在廣西境內(nèi)，屬于廣西壯藥，但仍具有一定的代表性。因此，本研究結(jié)果對于廣西壯藥三七姜的合理開發(fā)利用和質(zhì)量標準完善具有一定的參考價值。

[1]中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志·第十六卷(第二分冊)[M].北京:科學出版社，1981:441.

[2]全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編(下冊)[M].第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1996:403.

[3]趙奎君，韋家福，梁曉東，等.姜三七的顯微鑒別研究[J].中藥材，2008，31(9):1 326 －1 327.

[4]方洪鉅，余堯光，房其年，等.我國姜科藥用植物研究Ⅵ姜三七揮發(fā)油化學成分分析[J].色譜，1984，1(1):35.

[5]李麗淑，譚冠寧，王 暉，等.不同施肥量及種植密度對姜三七產(chǎn)量的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2011，39(6):3 242.

[6]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄Ⅴ.

[7]劉 平，程 璐，張 鷹，等.氣相色譜法測定復方爐甘石洗劑中薄荷腦和樟腦含量[J].醫(yī)藥導報，2011，30(6):795 － 797.

[8]蔡鋁鋁，潘金火，金芝蘭.GC測定鎮(zhèn)江巴布膏中冰片、薄荷腦、樟腦和水楊酸甲酯的含量[J].現(xiàn)代中藥研究與實踐，2011，25(1):54－56.