國(guó)內(nèi)不同廠家替米沙坦片與原研制劑的溶出曲線對(duì)比分析＊

賈孟良，謝守霞，楊紅英，練宏新，王 玉

(廣東省深圳市人民醫(yī)院·暨南大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 深圳 518020)

替米沙坦為高選擇性血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)受體拮抗劑，由德國(guó)勃林格殷格翰公司開發(fā)，1999年在美國(guó)首次上市，用于高血壓治療[1]。替米沙坦在水和pH=3～9范圍內(nèi)幾乎不溶，口服生物利用度為50%[1]。為考察替米沙坦片的質(zhì)量，按照2010年版《中國(guó)藥典(二部)》附錄ⅩC第二法，參照文獻(xiàn)[2]用高效液相色譜法定量，比較了市售4個(gè)廠家間的替米沙坦片及與原研制劑的體外溶出曲線的相似性。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

RCZ－8B型溶出儀(天津天大天發(fā)科技有限公司);BP211D型十萬(wàn)分之一電子天平(德國(guó)賽多利斯);ZKT－7F型真空脫氣機(jī)(天津天大天發(fā)科技有限公司);Waters2695型高效液相色譜儀－2487UV檢測(cè)器(沃特世科技有限公司)。替米沙坦對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為 144701－48－4，含量98.9%);國(guó)外A企業(yè)替米沙坦原研制劑(勃林格殷格翰，商品名 Micardis，每片 80 mg)，國(guó)內(nèi)B企業(yè)替米沙坦片(每片40mg)，國(guó)內(nèi)C企業(yè)替米沙坦片(每片40 mg)，國(guó)內(nèi)D企業(yè)替米沙坦片(每片40mg)，國(guó)內(nèi)E企業(yè)替米沙坦片(每片40 mg);鹽酸;試驗(yàn)所用試劑均為分析純，水為超純水。

圖1 替米沙坦的高效液相色譜圖

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:WatersSymmetry C18柱(250mm ×4.6mm，5μm);流動(dòng)相:乙腈－水 －冰乙酸(500∶500 ∶1;)流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):210 nm;進(jìn)樣量:10μL;柱溫:30℃[3]。色譜圖見圖1。

2.2 溶出度試驗(yàn)條件

按照2010年版《中國(guó)藥典(二部)》附錄ⅩC第二法(槳法)，以pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液1 000 mL為溶出介質(zhì)，溶出溫度(37±0.5)℃，轉(zhuǎn)速50 r/min，依法操作，按擬訂色譜條件測(cè)定。

2.3 溶液制備

精密稱取替米沙坦對(duì)照品 0.025 68 g，以流動(dòng)相稀釋至50mL，混均得 513.6μg/mL對(duì)照品貯備液。溶出介質(zhì)為 pH=7.4磷酸鹽緩沖溶液，取磷酸二氫鉀6.8 g和0.9 g氫氧化鈉，加水1 000mL，搖均，調(diào) pH 至 7.4。

2.4 方法學(xué)考察

波長(zhǎng)選擇與線性關(guān)系考察:精密稱取替米沙坦對(duì)照品貯備液1mL，用流動(dòng)相稀釋至200mL，于200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，測(cè)定其最大吸收波長(zhǎng)為210 nm。分別精密稱取替米沙坦貯備液 1mL 置 10，25，50，100，200，500mL 容量瓶中，用溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，以溶出介質(zhì)為空白，用高效液相色譜法在210nm波長(zhǎng)處測(cè)得峰面積，以峰面積(Y)對(duì)質(zhì)量濃度(X)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=29.171 4X+0.003 9，R2=1.000 0(n=6)。結(jié)果表明，替米沙坦質(zhì)量濃度在1～50mg/L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密稱取替米沙坦對(duì)照品貯備液0.5，2，3.5mL，定容于 50 mL 容量瓶中，分別得 5.136，20.544，35.952 μg/mL的測(cè)定液，進(jìn)行日內(nèi)精密度測(cè)試，分別于 0，1，4，9，16，24 h 時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果的 RSD=0.023%(n=3)，表明儀器精密度良好。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取替米沙坦細(xì)粉適量(相當(dāng)于5mg替米沙坦)，置100mL容量瓶中，將對(duì)照品3，5，8mg分別加入，用溶出介質(zhì)定容至刻度，搖勻，濾過，進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 不同企業(yè)產(chǎn)品的替米沙坦含量測(cè)定與加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.5 溶出曲線測(cè)定[3]

量取經(jīng)脫氣的溶出介質(zhì)1 000mL于溶出杯中，加熱使溶出介質(zhì)保持在(37±0.5)℃范圍內(nèi)，調(diào)整轉(zhuǎn)速使其穩(wěn)定在75 r/min。取供試品6粒，分別置6個(gè)轉(zhuǎn)籃中，將轉(zhuǎn)籃降到燒杯內(nèi)，立即計(jì)時(shí)，并定時(shí)在 5，10，15，20，30，45，60min 取樣 10 mL(及時(shí)補(bǔ)液)，立即用0.8μm濾膜過濾后，用高效液相色譜法進(jìn)行定量計(jì)算，得不同時(shí)間點(diǎn)的累積溶出率。

Q為各時(shí)間點(diǎn)校正后累積溶出量，Cn為各時(shí)間點(diǎn)取出后的樣品質(zhì)量濃度(稀釋前);L為制劑標(biāo)示量(L/V2單位需與 Cn一致);V1為各時(shí)間點(diǎn)固定取樣體積;V2為溶出介質(zhì)體積。

溶出曲線見圖 2。根據(jù) Weibull方程 InIn[1/(1－Ft)]=m in t+in A，求出不同廠家替米沙坦片的溶出參數(shù) T50(藥物溶出50%的時(shí)間)、TD(藥物溶出 63.2%的時(shí)間)及 m(參數(shù) m)，見表2。并對(duì)其進(jìn)行國(guó)內(nèi)廠家與進(jìn)口制劑的兩兩 t檢驗(yàn)，由表3可知，A 廠家與 B，C，D，E 4 個(gè)廠家的溶出參數(shù) T50，TD，T80，m 值均無(wú)顯著性差異(P ＞0.05，t=1.812，df=10)。

圖2 5個(gè)廠家的替米沙坦片累積溶出曲線

表2 不同廠家替米沙坦片的釋放參數(shù)

表3 對(duì)照片與國(guó)產(chǎn)替米沙坦片的 t值檢驗(yàn)表

3 討論

高效液相色譜法是常用的檢驗(yàn)分離方法，具有定量準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，操作簡(jiǎn)單，適用于快速分析試驗(yàn)采用。在以溶出介質(zhì)pH=7.4的磷酸鹽緩沖溶液中，比較A廠家與B，C，D，E廠家的溶出參數(shù)，經(jīng)雙單側(cè) t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，B，C，D，E 4個(gè)廠家生產(chǎn)的替米沙坦片與A廠家生產(chǎn)的原研制劑均可在35min內(nèi)溶出標(biāo)示量的85%以上，溶出曲線基本一致。由表3可見，B，C，D，E 4個(gè)廠家的溶出參數(shù)與進(jìn)口對(duì)照片均無(wú)顯著性差異，質(zhì)量可靠。溶出度是藥品質(zhì)量控制的指標(biāo)之一，固體制劑的溶出度直接影響藥品的體內(nèi)生物利用度和臨床療效。因此，應(yīng)嚴(yán)格按照藥典的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量，保證用藥的合理性和安全性。

[1]楊惠娣，徐 彬.降壓型藥替米沙坦[J].世界臨床藥物，2003，24(11):695－697.

[2]Kurade VP，Pai MG，Gude R.RP－HPLC Estimation of Ramipril and Telmisartan in Tablets[J].Indian JPharm Sci，2009 ，71(2):148 － 151.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄ⅤD.