復方紫歸油的制備及質(zhì)量控制

王 琪，馬妍妍，劉世萍

(哈爾濱醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院藥學部，黑龍江 哈爾濱 150001)

新生兒尿布濕疹、燙傷、癰腫癤瘍等是臨床常見的病癥，其共同特點是局部皮膚受損，可造成細菌感染、繼發(fā)性炎癥等，應采用有效的局部藥物治療。復方紫歸油由紫草、當歸組方，在我院已有多年臨床應用基礎，對上述病癥的療效確切。本品收載于《黑龍江省醫(yī)院制劑規(guī)范》，但沒有系統(tǒng)的質(zhì)量控制方法。為了更好地控制該制劑的質(zhì)量，筆者建立了質(zhì)量控制方法，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

SB3200型超聲波儀(上海Branson);BP211D型電子天平(Sartorius)。紫草及當歸(安徽省萬生中藥飲片有限公司，批號分別為101002，101003)，由本院藥品質(zhì)控室鑒定為紫草科植物新疆紫草 Arnebia euchroma(Royle)Johnst.的干燥根及傘形科植物當歸 Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根;紫草(新疆紫草)、當歸對照藥材及對照品(均購自中國藥品生物制品檢定所，批號分別為 121430－200802，120927－201014，110773－201012);其他試劑為分析純、水為純化水。

2 方法和結(jié)果

2.1 處方及制備

處方:紫草80 g，當歸60 g，大豆油適量，制成1 000 mL。

制備:將大豆油置鍋內(nèi)加熱至沸，撤火，將紫草與當歸放入布袋內(nèi)浸于油中過夜，次日壓榨布袋，使油盡量擠出，棄去藥渣，油用4層紗布過濾，即得。

2.2 性狀

本品為紫紅色的油狀液體;有特異氣味。

2.3 鑒別(薄層色譜法)

紫草:取本品10 mL，加乙醇20 mL，振搖萃取，放至分層，分取乙醇溶液，70℃水浴揮干乙醇，殘留物加1 mL氯仿溶解作為供試品溶液。按處方量稱取處方中除紫草以外的其他中藥飲片，按制備工藝制成不含紫草的陰性對照品，同法制備陰性對照品溶液。另取紫草對照藥材粗粉0.5 g，加乙醇5 mL浸漬1 h，濾過，殘渣用乙醇2 mL洗滌，洗液并入浸液中，于70℃水浴揮干乙醇，殘渣加1 mL氯仿溶解作為對照藥材溶液。吸取供試品溶液與陰性對照溶液各10 μL、對照藥材溶液4 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷－甲苯－乙酸乙酯－甲酸(2∶5∶1∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干。置日光下檢視，供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同的紫紅色斑點;再噴以10%氫氧化鉀甲醇溶液，斑點變?yōu)樗{色;陰性對照品溶液色譜中無相應特征斑點(見圖1A)。

當歸:取本品20 mL，加甲醇振搖萃取2次，每次20 mL，合并甲醇提取液，以甲醇潤濕的脫脂棉濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。按處方量稱取處方中除當歸以外的其他中藥飲片，按制備工藝制成不含當歸的陰性對照品，同法制備陰性對照品溶液。另取當歸對照藥材1 g，加甲醇10 mL超聲處理20 min，濾過，濾液濃縮至2 mL，作為對照藥材溶液。吸取上述3種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯(4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(波長為365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與當歸對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照品溶液色譜中無相應特征斑點見(圖1B)。

圖1 薄層色譜圖

2.4 檢查

本品可歸為搽劑，參照2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅠV搽劑項下要求制訂本品的檢查項目[1]。

相對密度:取供試品3批，依法檢測[1]。本品的相對密度在0.923 2 ～0.938 8 之間，平均 0.930 2。考慮到藥材的來源以及制劑生產(chǎn)、貯藏等因素，故規(guī)定本品的相對密度不得小于0.915。

裝量:取供試品3批，每批5支，依法檢測[1]，均符合規(guī)定。

折光率:取供試品3批，測定其折光率值。本品的折光率值在1.472 8 ～1.475 5 之間，平均折光率值為 1.474 2。考慮到藥材的來源以及制劑生產(chǎn)、貯藏等因素，故規(guī)定本品的折光率值控制范圍應為 1.471 ～1.478。

2.5 微生物限度檢查

2.5.1 溶液制備

菌液制備:接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌的新鮮斜面培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于30～35℃培養(yǎng)18～24 h，接種白色念珠菌的新鮮斜面培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中，于23～28℃培養(yǎng)24 h，分別取各菌種培養(yǎng)液用0.9%無菌氯化鈉注射液依次稀釋，金黃色葡萄球菌稀釋至10－6、大腸埃希菌稀釋至 10－7、枯草芽孢桿菌稀釋至 10－5、白色念珠菌至 10－5，約為 50～100 cfu/mL備用;取黑曲霉的新鮮斜面培養(yǎng)物，用0.9%無菌氯化鈉注射液將孢子洗下，吸取此溶液1 mL至一個無菌的比色管中，加0.9%氯化鈉注射液適量與標準比濁管進行比濁，取比濁后的菌懸液1 mL加至9 mL 0.9%氯化鈉注射液中10倍依次稀釋至10－4，約為50～100 cfu/mL備用。

供試液制備:取本品10 mL，加至含無菌十四烷酸異丙酯和無菌玻璃珠的容器中，充分振搖使供試品溶解，加45℃的pH=7.0的無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液90 mL，振搖5～10 min，萃取，靜置，使油水明顯分層，取其水層作為1∶10供試液。

2.5.2 細菌、霉菌及酵母菌數(shù)計數(shù)方法的驗證

試驗組:細菌計數(shù)采用培養(yǎng)基稀釋法，取1∶10供試液1 mL，分別加入10個平皿中，每皿0.1 mL，加入各陽性細菌試驗菌液1 mL，立即傾注相應營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，按規(guī)定條件培養(yǎng)。霉菌及酵母菌數(shù)計數(shù)采用常規(guī)法，取1∶10供試液1 mL，加入各霉菌及酵母菌試驗菌液1 mL，立即傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基。按規(guī)定條件培養(yǎng)。每試驗菌平行制備2個平皿。菌液組取已稀釋好的各菌液1 mL，(方法同試驗組)，分別加入平皿中，傾注相應培養(yǎng)基，按規(guī)定培養(yǎng)，測定所加的試驗菌數(shù)，每株試驗菌制備2個平皿。供試品對照組方法同試驗組，取1∶10供試液1 mL，平均分為5個平皿，每皿0.2 mL按規(guī)定條件培養(yǎng)，測定其本底數(shù)。

稀釋劑對照組:取1 mL的pH 7.0無菌氯化鈉－蛋白胨緩沖液替代供試液，(方法同試驗組)，加入平皿，再加入上述已稀釋的陽性菌液1mL，分別注入培養(yǎng)基，立即傾注相應的瓊脂培養(yǎng)基，至規(guī)定溫度培養(yǎng)。每試驗菌制備2個平皿。

試驗組回收率及稀釋劑對照組菌落回收率:試驗組回收率(%)=[(試驗組平均菌落數(shù)－供試品對照組平均菌落數(shù))/菌液組平均菌落數(shù)]×100%;稀釋劑對照組菌落回收率(%)=(稀釋劑對照組平均菌落數(shù)/菌液組平均菌落數(shù))×100%。

細菌、霉菌及酵母菌數(shù)計數(shù)方法的3次驗證結(jié)果見表1。可見，在3次獨立平行試驗中，稀釋劑對照組的菌收率均大于70%，試驗組的菌收率均大于70%，故可照該供試液制備方法和計數(shù)法測定本品的細菌、霉菌及酵母菌數(shù)。

表1 細菌、霉菌及酵母菌試驗驗證結(jié)果

2.5.3 控制菌檢查方法的驗證

試驗組:取1∶10的供試液10 mL(2份)，分別接種至膽鹽乳糖培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基250 mL中，再加陽性對照菌銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌各1 mL，(金黃色葡萄球菌濃度同細菌、霉菌及酵母菌數(shù)計數(shù)驗證)，搖勻，置35～37℃培養(yǎng)18～24 h。

陰性對照組:方法同試驗組，另取膽鹽乳糖培養(yǎng)基100 mL，加入1 mL陰性菌大腸埃希菌菌液(菌濃度同細菌、霉菌及酵母菌數(shù)驗證)，置35～37℃培養(yǎng)18～24 h。

控制菌檢查方法驗證結(jié)果見表2。可見，在3次獨立平行試驗中，陰性對照組未檢出陰性對照菌，試驗組檢出陽性試驗菌，故可用此供試液制備方法和控制菌檢查法進行本品的控制菌檢查。

表2 控制菌驗證試驗結(jié)果(n=3)

3 討論

本品采用大豆油作為溶劑，將紫草與當歸組方，制成的外用油溶液，在文獻中鮮有報道。方中的植物油能使紫草與當歸中有效成分釋放，同時能起到協(xié)同消炎消腫、止痛，減少滲出物，使藥物易于附著于患部，促進創(chuàng)面愈合的作用。本制劑對創(chuàng)面無刺激，使用安全，有抗菌抗炎功效，同時用植物油制成，可掩蓋部分藥味，易于患者尤其兒童接受，易于推廣。

微生物限度檢查是考察非規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染的程度，也是評價生產(chǎn)企業(yè)的藥用原料、輔料、設備、器具、工藝流程、環(huán)境和操作者衛(wèi)生狀況的重要手段和依據(jù)。檢查項目包括細菌數(shù)、霉菌數(shù)、酵母菌數(shù)及控制菌檢查。微生物限度的檢查易受到工作環(huán)境、樣品性質(zhì)以及實驗方法的影響，因此任何藥品在進行微生物限度檢查時，首先應進行方法學驗證，保證所采用的檢查方法適用于樣品的微生物限度檢查。文中以復方紫歸油為模型藥物，探討微生物限度檢查方法學驗證的程序，不但能客觀地反映藥物中微生物的污染狀況，達到有效、可靠的檢測目的，且為進一步開展本類制劑微生物限度檢查方法學驗證提供了依據(jù)。

筆者參考有關文獻，對本品性狀、鑒別、微生物限度、裝量及折光率等各項指標進行研究，建立的本品質(zhì)量控制標準可靠、系統(tǒng)、全面，可用于本品的質(zhì)量控制。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[N].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄 15，41，44，73.