鐵線蓮屬蒙藥材薄層層析圖譜研究＊

李 驍，羅彩神，解紅霞，武旭芳

(內蒙古醫科大學藥學院，內蒙古 呼和浩特 010059)

鐵線蓮屬 Clematis L.隸屬于毛茛科，為多年生木質或草質藤本，或為直立灌木或草本，分布于世界各地，約300種，在我國各地均有分布[1]。內蒙古地區有16種6變種[2]，經本草考證[2－5]，其中入蒙藥的植物有芹葉鐵線蓮(Clematis aethusifolia)、黃花鐵線蓮 (C.intricata)、短尾鐵線蓮 (C.brevicaudata)、棉團鐵線蓮(C.hexapetala)長瓣鐵線蓮(C.macropetala)和辣蓼鐵線蓮(C.mandshurica又名東北鐵線蓮[6－7])。蒙醫臨床上，以芹葉鐵線蓮、黃花鐵線蓮和長瓣鐵線蓮枝葉同等入蒙藥，蒙藥名為特木日·敖日秧古，味辛、微甘，性熱，破痞、助溫、燥“希日烏素”，治寒痞、積食、“希日烏素”癥等;短尾鐵線蓮莖入蒙藥，蒙藥名為奧日雅木格，味苦、性涼，清熱、止瀉、止痛，用于治療肝熱、肺熱、腸刺痛等;棉團鐵線蓮和辣蓼鐵線蓮全草入蒙藥，蒙藥名為依日繪，味辛、微甘、性熱，破痞、助溫、燥“希日烏素”，用于治療寒痞、食積、水腫、寒瀉、瘡癰等[2，5]。以上6種鐵線蓮屬蒙藥的從藥性及功能主治方面，各有差異，不能等同。但由于來源于同科同屬不同種植物，親緣關系相近，原植物形態、藥材性狀及顯微特征方面相似，故臨床用藥混用、代用等現象較嚴重。目前報道的鐵線蓮屬藥材薄層研究主要以齊墩果酸或蘆丁為對照品，單獨地對棉團鐵線蓮、芹葉鐵線蓮、威靈仙進行定性鑒別[8－10]，而采用薄層色譜法系統地對上述6種鐵線蓮進行鑒別還未見報道。本研究中采用硅膠薄層色譜法對上述6種鐵線蓮藥材的薄層色譜圖進行分析，可對6種鐵線蓮藥材進行準確、快速鑒別，從而為臨床安全用藥提供科學依據。

1 儀器與試藥

燒杯;量筒;冷凝回流裝置(數字恒溫水浴鍋，球形冷凝管，圓底燒瓶);抽慮裝置(抽濾瓶，布式漏斗，抽慮泵，濾紙);10 mL容量瓶;玻璃點樣毛細管(華西醫科大學儀器廠);層析缸;噴瓶;ZF－20D型暗箱式紫外分析儀(南京科爾儀器設備有限公司);薄層層析硅膠GF254(青島海洋化工廠);所用試劑均為分析純。于2009年至2011年藥材采收期采集6種鐵線蓮植物全草，置陰涼通風干燥處儲存，蒙藥材原植物均經筆者認真鑒定，來源見表1。

表1 藥材來源及采集時間

2 方法與結果

2.1 樣品提取

對每批次藥材分別精確稱取樣品各3份，每份5 g，適當粉碎，分別用75 mL蒸餾水、75 mL 70%乙醇、75 mL 95%乙醇浸泡過夜，再分別將隔夜浸泡的藥材與溶劑轉移至圓底燒瓶，加熱回流1 h，趁熱抽慮，濾渣分別加入65 mL蒸餾水、65 mL 70%乙醇，65 mL 95%乙醇，回流0.5 h，趁熱抽慮，合并兩次濾液，水浴蒸干，加少量無水乙醇溶解，定容至10 mL容量瓶，備用。

2.2 提取方法選擇

取10 cm×20 cm硅膠板，分別點樣第1批樣品10 μL，預飽和15 min，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸(20∶3∶1)橫向展開，展距8 cm，25%硫酸水溶液顯色，加熱至斑點顯色清晰，圖譜見圖1。結果顯示，70%乙醇提取液展開的點數目較多且斑點清晰，故優先選用以70%乙醇溶液提取。

圖1 第1批藥材不同溶劑提取樣品圖譜

2.3 提取方法重復性與穩定性研究

以70%乙醇提取芹葉鐵線蓮作重復性和穩定性研究，分別稱取第1批芹葉鐵線蓮3份，每份5g，以70%乙醇浸泡，按2.1項下方法提取，存放時間分別為0，24，48 h，取10 cm×20 cm硅膠板，點樣 10 μL，展開劑石油醚 －乙酸乙酯 － 丙酮(9∶3∶1)，預飽和15 min，展開，展距13.8 cm，25%硫酸水溶液顯色，加熱至斑點顯色清晰，圖譜見圖2。結果顯示，斑點數目及清晰度一致，說明該提取方法重復性和樣品穩定性良好，故按2.1方法以70%乙醇提取第2批藥材。

圖2 芹葉鐵線蓮不同保存時間薄層圖譜

2.4 展開系統選擇

以70%乙醇提取物為標準，分別對多種展開系統進行了試驗，包括石油醚－乙酸乙酯－丙酮(9∶3∶1)，環己烷－乙酸乙酯－冰乙酸(12∶3∶1)，苯 －丙酮(3∶1)，三氯甲烷 －甲醇 －水(15∶3 ∶0.5)，乙酸乙酯 －甲醇 －甲酸 －水(8∶1∶1∶1)。經檢視后發現，石油醚－乙酸乙酯－丙酮(9∶3∶1)和三氯甲烷－甲醇－水(15∶3∶0.5)系統可明顯區別出6種藥材，故以這兩種展開系統作為優選展開系統。

2.5 藥材薄層圖譜鑒別

將兩批樣品點于同一張薄層板上(10 cm×20 cm)，展開劑石油醚－乙酸乙酯－丙酮(9∶3∶1)展開，展距8.0 cm，噴25%硫酸水溶液后加熱至100℃，至出現清晰斑點，日光下檢視，如圖3所示。再以氯仿－甲醇－水(15∶3∶0.5)為展開劑，將兩批藥材點于同一張薄層板上(20 cm×20 cm)，展距17.0 cm，25%濃硫酸水溶液顯色后于365 nm紫外燈下檢視，如圖3所示。

圖3 兩批樣品薄層鑒別圖譜

以石油醚－乙酸乙酯－丙酮(9∶3∶1)為展開劑，由圖譜可見，Q點(Rf=0.85)為辣蓼鐵線蓮所特有斑點，從而可以鑒別出辣蓼鐵線蓮。再以三氯甲烷－甲醇－水(15∶3∶0.5)為展開劑，由圖譜可見，芹葉鐵線蓮獨有斑點A，長瓣鐵線蓮比芹葉鐵線蓮只少了斑點A，棉團鐵線蓮獨有B，F，G斑點，短尾鐵線蓮缺斑點C，黃花鐵線蓮C，D點都有，辣蓼鐵線蓮D，E，F，G點不明顯，經過分析對比，從而辨別出了芹葉鐵線蓮、黃花鐵線蓮、短尾鐵線蓮、棉團鐵線蓮、長瓣鐵線蓮和辣蓼鐵線蓮，各斑點比移值，A點Rf=0.71，B 點 Rf=0.57，C 點 Rf=0.53，D 點 Rf=0.46，E 點Rf=0.34，F 點 Rf=0.26，G 點 Rf=0.17。

3 討論

通過試驗發現，采用薄層色譜法，以石油醚－乙酸乙酯－丙酮(9∶3∶1)和三氯甲烷－甲醇－水(15∶3∶0.5)組合可以將6種鐵線蓮進行很好的區分。通過溫度、濕度考察發現，在25℃、相對濕度50%下薄層層析效果最好，斑點清晰，Rf值穩定。因此，本試驗的層析圖譜均為這一條件下獲得的。在鐵線蓮屬蒙藥材中，6種鐵線蓮化學成分多有相同，但也有區別，臨床用藥存在混用、代用現象，因此通過簡便、快捷的方式將其進行鑒別具有重要的意義。本研究中主要通過薄層層析圖譜對6種鐵線蓮藥材進行鑒別區分，而非進行化學成分分析，因此未對其各個鑒別色點進行定性分析。通過研究摸索出了適合于鐵線蓮屬6種蒙藥材鑒別的薄層色譜方法，并采用該方法鑒別出了6種蒙藥材，該方法快速、簡便、實用、重復性好。

致謝:感謝內蒙古醫科大學董玉教授的悉心指導和審閱。

[1]中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志(第二十八卷)[M].北京:科學出版社，1989:74－87.

[2]內蒙古植物志編輯委員會.內蒙古植物志(第二卷)[M].呼和浩特:內蒙古人民出版社，1989:515－534.

[3]中國中醫藥管理局《中華本草》編委會.《中華本草·蒙藥卷》[M].上海:上海科學技術出版社，2004:80，216，353.

[4]柳白乙拉.蒙藥正典(占布拉道爾吉著)[M].北京:民族出版社，2006:128－129.

[5]內蒙古植物藥志編輯委員會.內蒙古植物藥志(第一卷)[M].呼和浩特:內蒙古人民出版社，2000:389－397.

[6]辛 廣，張捷莉，孟 河，等.千山東北鐵線蓮花揮發油化學成分研究 [J].鞍山師范學院學報，2000，2(3):68 －70.

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[8]散 旦，林 燕，康雙龍.細葉鐵線蓮的薄層鑒別研究[J].內蒙古科技與經濟，2012，2(1):129.

[9]郭迎霞，郭志鵬，申現祥，等.薄層掃描法測定棉團鐵線蓮中齊墩果酸的含量[J].河北中醫，2010，32(2):253 －254.

[10]王 曙，徐小平，吳 靜.威靈仙的薄層色譜鑒別[J].華西藥學雜志，2001，16(6):453 －454.