氨芐西林鈉舒巴坦鈉混合粉中的殘留溶劑檢測

奚劍英，厲守權

(浙江普洛康裕天然藥物有公司，浙江 金華 321017)

藥品中的殘留溶劑是指在合成原料、輔料或制劑生產過程中使用或產生的揮發性有機化學物質，其在生產過程中未能被全部清除，服用后對人體有毒性和致癌作用，近年來日益引起了多方重視[1－4]。氨芐西林鈉舒巴坦鈉是目前臨床上應用最廣泛的抗生素之一，根據工藝路線，氨芐西林鈉合成過程中使用了二氯甲烷和乙腈，舒巴坦合成過程中使用了乙醇、乙酸乙酯和丙酮。按照目前新藥審批和中國藥典的要求，必須對這些殘留溶劑進行控制。筆者根據2010年版《中國藥典(二部)》附錄殘留溶劑檢查法[5]和ICH的要求，建立了測定氨芐西林鈉舒巴坦鈉混合粉中殘留溶劑的頂空毛細管氣相色譜法，現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent6890型氣相色譜儀及7694E型頂空進樣器。二氯甲烷、無水乙醇、乙酸乙酯和丙酮(分析純)，乙腈(色譜純)，水(重蒸水);樣品(上虞京新藥業股份有限公司，批號為060401，060402，060403)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent Innowax PEG－20M毛細管色譜柱(30.0m×0.32mm，0.25 μm);柱溫:40 ℃;進樣口溫度:200 ℃;檢測器溫度:250℃;FID 檢測。柱流速:1.0mL/min;分流比:1∶1。頂空進樣，平衡溫度為80℃，平衡時間為20min;進樣體積為1.0mL。

2.2 溶液配制

稱取乙醇、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷和乙腈各適量，精密稱定，加水制成每 1mL 分別約含 0.2mg，0.2mg，0.2mg，0.024mg和0.016mg的混合溶液，作為對照品溶液。精密量取對照品溶液5mL，置頂空取樣瓶。稱取本品約0.2 g，精密稱定，置頂空瓶中，精密加水5mL使溶解，作為供試品溶液。

2.3 方法學考察

系統適用性試驗:取含丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇和乙腈的對照品混合溶液，按擬訂的色譜條件進樣。結果丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇和乙腈的理論板數分別為45 403，52 215，58 532，38 808，51 839，丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇和乙腈間的分離度分別為 10.2，8.8，1.7，16.7;空白溶劑水對測定無干擾(見圖 1)。

圖1 氣相色譜圖

重復性試驗:取丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇和乙腈的對照品混合溶液6份，按擬訂的色譜條件進樣測定。結果丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇和乙腈峰面積的 RSD分別為1.3%，0.9%，3.0% ，0.6%，1.4%(n=6)。

線性關系考察:分別精密稱取丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇和乙腈各適量，加水溶解并稀釋，制成一系列質量濃度的對照品溶液。分別精密量取5mL，置頂空進樣瓶，按擬訂的色譜條件進樣測定，結果見表1。可見色譜峰面積(A)與質量濃度(C)呈良好的線性關系。

表1 線性關系試驗結果

回收率試驗:精密稱取已測定殘留溶劑含量的樣品9份，分別精密加入丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇和乙腈對照品溶液適量，按擬訂的色譜條件進樣測定。設計3個不同的質量濃度進行測定，共9個測定結果，計算回收率。結果見表2，平均回收率均在80% ～120%之內，符合殘留溶劑測定準確度的要求。

表2 回收率試驗結果

穩定性試驗:取對照品混合溶液，按擬訂的測定方法，于0，1，2，8 h時測定。結果丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇和乙腈峰面積變化的 RSD 分別為 1.4% ，1.0%，2.5%，1.2% ，2.0%，表明溶液基本穩定。

最低檢出質量濃度確定:通過逐級降低對照品混合溶液的質量濃度，依法進樣測定，確定檢測限，信噪比為3∶1。結果丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇和乙腈最低檢測質量濃度分別為0.04，0.04，0.04，0.2，3.9 μg/mL。

2.4 樣品中殘留量測定

將盛有對照品溶液及供試品溶液的頂空進樣瓶，置頂空進樣器80℃加熱20min，在擬訂的色譜條件下進樣，記錄色譜圖，量取峰面積，按外標法以峰面積計算含量。結果見表3。

表3 樣品中丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇和乙腈殘留量測定結果(%)

3 討論

樣品檢測結果表明，3批樣品中均有二氯甲烷、乙醇殘留，丙酮、乙酸乙酯和乙腈未檢出。氨芐西林鈉舒巴坦鈉混合粉中的二氯甲烷殘留來自氨芐西林鈉，乙醇殘留來自舒巴坦鈉。本試驗建立的方法能有效檢出和控制氨芐西林鈉舒巴坦鈉混合粉中的殘留溶劑。2010年版《中國藥典(二部)》中注射用氨芐西林鈉舒巴坦鈉質量標準未列該項檢查，氨芐西林鈉舒巴坦鈉混合粉進口注冊標準JX20050187列有該項檢查。根據3批樣品中殘留溶劑的實測結果，可將此項檢查列入質量標準，限度按2010年版《中國藥典(二部)》附錄ⅧP的規定。

采用頂空進樣法測定藥品中殘留溶劑，測定干擾小，對儀器污染少，因此檢測低沸點的二氯甲烷、乙醇、乙酸乙酯、乙腈和丙酮，首選頂空進樣。通過系列柱溫(40，50℃)的試驗，結果柱溫為50℃時二氯甲烷和乙醇間分離不佳，柱溫為40℃時二氯甲烷和乙醇可完全分離，因此選擇柱溫為40℃。氨芐西林鈉舒巴坦鈉混合粉為水溶性藥物，因此首選水作為溶劑，干擾小，靈敏度高。方法學考察結果表明，被測物均能得到很好的分離，峰面積與質量濃度呈良好的線性關系，精密度和回收率良好。因此，該法可用于氨芐西林鈉舒巴坦鈉混合粉原料藥中殘留溶劑的檢測。

[1]劉津愛，朱 梅.毛細管柱頂空氣相色譜法測定培美曲賽二鈉中有機溶劑殘留量[J].中國藥業，2011，20(19):25.

[2]秦 立.頂空氣相色譜法測定藥品中殘留溶劑的影響因素考察[J].藥物分析雜志，2005，25(7):823.

[3]魏 玲.頂空毛細管氣相色譜法測定阿奇霉素中的殘留溶劑[J].藥物分析雜志，2005，25(11):1 357.

[4]張雅軍.氣相色譜法測定阿德福韋酯中的10種殘留溶劑[J].藥物分析雜志，2005，25(6):660.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學工業出版社，2010:附錄ⅧP.