高效液相色譜法測定安神膠囊中酸棗仁皂苷A含量

陳驍勇，葛玉松

(1.江蘇省鹽城市第一人民醫院，江蘇 鹽城 224001; 2.江蘇省鹽城市藥品檢驗所，江蘇 鹽城 224002)

安神膠囊是一種常用中成藥，由炒酸棗仁、川芎、五味子等幾味藥組方，具有補血滋陰、養心安神的功效。原標準[1]只有五味子、川芎的薄層鑒別以及五味子的高效液相色譜法含量測定。酸棗仁具有養心補肝、寧心安神、斂汗、生津功能，作為方中君藥，卻沒有質量控制標準。為有效、準確地控制安神膠囊的質量，筆者參照文獻[2－5]，以酸棗仁皂苷A為檢測指標，建立了測定安神膠囊中酸棗仁皂苷A含量的高效液相色譜蒸發光散射檢測器法，現報道如下。

1 儀器與試藥

Aglient1200型高效液相色譜儀，包括G1311A四元泵高效液相色譜儀、G1322A真空脫氣機、G1329A自動進樣器、G1316A柱溫箱、Varian 380－LC蒸發光檢測器、Aglient色譜工作站(美國安捷倫公司);XS205DU型電子天平(梅特勒－托利多國際股份有限公司)。酸棗仁皂苷A對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110734－200510);安神膠囊(市售品);乙腈為色譜純，水為娃娃哈純凈水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Capcell pakmg C18色譜柱(150mm ×4.6mm，5μm);流動相:乙腈－水(40∶60);檢測器:蒸發光散射檢測器;流速:0.6mL/min，柱溫:30℃。ELDS檢測參數:漂移管溫度為90℃;蒸發器氣流:1.4 SLM;理論板數按酸棗仁皂苷A計算應不低于2 000[3]。

2.2 溶液制備

精密稱取五氧化二磷減壓干燥12 h以上的酸棗仁皂苷A對照品10.39mg，置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。取本品20粒內容物，研細，取約2.5 g，精密稱定，加甲醇60mL，超聲處理1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20mL使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次40 mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次40mL，棄去氨洗滌液，再用水洗滌2次，每次40mL，分到正丁醇液，回收溶劑至干，殘渣用水5mL溶解，通過D101型大也吸附樹脂柱(內徑為1 cm，柱高為10 cm)，用水40mL和40%乙醇30mL洗脫，棄去洗脫液，再用乙醇50mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉移至5mL，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。取不含炒酸棗仁的處方藥味，按安神膠囊的制備工藝，制成陰性樣品，再依法制備陰性對照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學考察

線性關系考察:精密量取質量濃度為0.207 8 g/L的對照品溶液適量，分別精密吸取 2，4，6，8，10，20 μL，按照 2.1 項下方法進樣，以進樣量的自然對數(Y)為橫坐標、峰面積積分值的自然對數(X)為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程Y=0.561 9X － 1.764 7，r=0.998 4(n=6)。結果表明，酸棗仁皂苷A進樣量在 0.415 6～4.156 0μg范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系。

專屬性試驗:取2.2項下3種溶液各10μL，按2.1項下色譜條件進樣。結果陰性對照品溶液色譜在與對照品溶液色譜相同保留時間處未見色譜峰，故認為陰性對照無干擾。色譜圖見圖1。

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液，連續進樣6次，每次進樣10 μL。結果的 RSD=0.38%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:精密吸取同一供試品溶液，于 0，2，4，8，12，24 h 時分別測定峰面積。結果的 RSD=1.7%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內穩定。

重復性試驗:取同一批號樣品6份，按2.2項下方法制備溶液，照2.1項下色譜條件測定。結果酸棗仁皂苷A平均含量為0.146 1mg/g，RSD=1.2%(n=6)，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗:取已知含量的同一批號(批號為20110501，含量為 0.146 1mg/g)樣品約 2.0，2.5，3.0 g 各 3 份，精密稱定，分別精密加入 2.2 項下對照品溶液 0.8，1.0，1.2mL，按供試品溶液制備溶液，照2.1項下色譜條件測定，計算加樣回收率。結果見表1。

表1 酸棗仁皂苷A加樣回收試驗結果(n=9)

2.4 樣品含量測定

同一批號的樣品分別取2份，依法制備供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液5，10μL和供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，照2.1項下色譜條件測定，按外標兩點法對數方程計算含量。結果見表2。

表2 樣品含量測定結果(n=2)

3 討論

安神膠囊臨床用于陰血不足、失眠多夢、心悸不寧、五心煩熱、盜汗耳鳴等癥[1]。其主要成分為炒酸棗仁，而酸棗仁有效成分為各種皂苷類、黃酮類，酸棗仁中所含的皂苷類成分被一致認為是酸棗仁鎮靜催眠作用的有效成分[5－10]。因此可通過測定酸棗仁皂苷A的含量對酸棗仁藥材的質量進行控制，進而有效、準確地控制安神膠囊的質量。

曾分別用超聲處理、水浴回流等方法操作，發現兩者差別不大，因超聲在實際工作中使用方便，因此用超聲處理[11]。曾有報道采用反相高效液相色譜法測定酸皂仁皂苷A[12]。酸棗仁皂苷類成分紫外吸收差，因此不能用紫外法。蒸發光散射檢測器屬通用型檢測器，因此可用于同時測定酸棗仁中皂苷類成分和黃芪甲苷。從樣品含量測定結果可以發現，各個批號樣品含量測定數據相差較大，可能是因為原標準中炒酸棗仁沒有質量控制指標，各個廠家所用酸棗仁質量有差別。

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