氣相色譜－質譜法測定硫酸亞鐵緩釋片中鄰苯二甲酸二辛酯含量

黃朝輝，桑旭峰

(浙江省寧波市藥品檢驗所，浙江 寧波 315048)

塑化劑是一種人工合成的化學物質，主要用于工業生產，添加在塑膠中可增加柔軟度、延展性。塑化劑的分子結構類似激素，被稱為“環境荷爾蒙”，若長期食用可能引起生殖系統異常，甚至造成畸胎、癌癥的危險[1－2]。2011年4月，臺灣衛生部門例行抽驗食品時，在一款“凈元益生菌”粉末中發現含有鄰苯二甲酸二辛酯(DOP)，濃度高達600×10－6。塑化劑的陰影不僅僅存在于食品、保健品之中，在藥品中亦可能普遍存在。為使藥物成分能均勻地混懸在兌水稀釋后的藥液中，不影響藥效，就需要使用藥用輔料如塑化劑等。此外，在使用腸包衣的片劑類、乳劑類和緩釋類藥品中，塑化劑的使用也相對廣泛。而藥用輔料，如用塑料做的包裝材料和藥瓶中，也有塑化劑。我國2010年頒布的新版《中華人民共和國藥典》，只收載了鄰苯二甲酸二乙酯(DEP)[3]。2011年6月，經中國食品藥品檢定研究院檢驗，在葛蘭素史克公司生產的阿莫西林克拉維酸鉀干混懸劑中檢出鄰苯二甲酸二異癸酯(DIDP)。檢測DOP的方法有氣相色譜－質譜聯用(GC－MS)法[4]、液相色譜－質譜聯用(LC－MS)法[5－6]等。本研究中建立了檢測硫酸亞鐵緩釋片中DOP含量的GC－MS法。現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 7890－5975C型氣相色譜－四級桿質譜聯用儀 (美國Agilent公司);SB－5200DTN型超聲波清洗器(寧波新芝生物科技股份有限公司);R 200 D型電子分析天平(德國賽多利斯公司);CH80－2型臺式低速離心機(上海優浦科學儀器有限公司)。甲醇(HPLC級，默克公司);DOP對照品(中國藥品生物制品檢定研究院，藥品中塑化劑監測用對照物質);硫酸亞鐵緩釋片(批號分別為 20101101，20110101，20100604，吉林精優長白山藥業有限公司);硫酸亞鐵片(批號分別為101118，110210，廣西梧州三箭制藥有限公司)。

2 方法與結果

2.1 色譜－質譜條件

采用Agilent7890－5975C型氣相色譜－四級桿質譜聯用儀，HP－5MS型色譜柱(30m ×0.25mm，0.25μm)，流速 1.0mL/min，不分流。程序升溫:起始溫度為60℃，保持1min，20℃ /min升溫至220℃，保持1min，再5℃ /min升溫至300℃，保持7min。接口溫度280℃;離子源溫度230℃，電離方式EI+;四級桿溫度150℃，掃描質量范圍:45～500 amu。在上述條件下，DOP的色譜峰見圖1。

圖1 DOP氣相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取DOP對照品19.75mg，置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密移取1.0mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。精密吸取對照品儲備液，用甲醇稀釋制成約1.58μg/mL的溶液作為對照品溶液。取供試品約1 g，研細，精密稱定，置20mL錐形瓶中，精密加入甲醇 5mL，超聲 30min，離心 5min(3 000 r/min)，吸取上清液，作為供試品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察:精密吸取對照品儲備液 1，2，4，6，8，10mL，分別置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成質量濃度為0.79～7.9μg/mL 的系列對照品溶液。取 1μL，注入氣相色譜儀，按上述色譜條件，以各對照品總離子流峰面積對進樣量進行回歸，計算回歸方程為 Y=3×106X+99 132(r=0.998 1)。結果表明，DOP 進樣量線性范圍是 0.79 ～7.9 ng。

定量限及檢測限測定:用甲醇將質量濃度為0.79μg/mL的對照品溶液逐步稀釋，依法測定。DOP的 S/N=3時的檢出限為0.018 ng，S/N=10 時的定量限為 0.082 ng。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液(質量濃度為1.58μg/mL)1μL，按2.1項色譜質譜條件，連續進樣5次，測定DOP色譜峰峰面積。結果的 RSD為1.8%(n=5)。

穩定性試驗:精密量取對照品溶液(質量濃度為1.58μg/mL)1 μL，分別于制備后 0，2，4，6，8，12 h 進樣，測定 DOP 的色譜峰峰面積。結果的 RSD為1.9%(n=6)，表明溶液在室溫放置12 h內基本穩定。

加樣回收試驗:取樣品6份，每份約1 g，精密稱定，分別置20mL錐形瓶中，再分別精密加入DOP對照品儲備液(質量濃度為7.9μg/mL)適量，照2.2項下方法制得供試品溶液，分別精密吸取1μL，注入氣相色譜儀，測定色譜峰峰面積，計算DOP的平均回收率為 95.0%，RSD 為 2.3%(n=6)。

2.4 樣品含量測定

取硫酸亞鐵緩釋片，研細，取細粉約1 g(共5批)，精密稱定，置20mL錐形瓶中，按2.2項下方法制得供試品溶液。分別精密吸取供試品溶液、對照品溶液各1μL，注入液相色譜儀，測定DOP的總離子流峰面積，按外標法計算樣品中DOP濃度，進一步換算為固體樣品中DOP的含量(μg/g)。結果見表1。

表1 樣品含量測定結果(μg/g，n=3)

3 討論

由于塑化劑廣泛存在于塑料制品中，因此配制樣品時不能使用塑料制品，而是全部采用玻璃容器。美國食品與藥物管理局認為，DOP可耐受的日攝入量為600μg/kg。試驗結果表明，5批硫酸亞鐵緩釋片中DOP的含量均很小，按照藥品說明書的要求使用，攝入的DOP量對人體幾乎無害。

[1]Sonia H，Allen A，Katherine E.Medications as a potential source of exposure to phthalate in U.S.population[J].Environ Health Perspect，2009，117(2):185－189.

[2]Eve M.Russell cc，Paul MD.Male reproductive tractmalformations in rats following gestational and lactational exposure to di(n－butyl)phthalate:an antiandrogenicmechanism[J].Toxicol Sci，1998，43(1):47 －48.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫藥科技出版社，2010:1 198.

[4]楊科峰，厲曙光，蔡智明.食用油及其加熱產物中酞酸酯類增塑劑的分析[J].環境與職業醫學，2002，19(1):37 －38.

[5]劉紅河，黃曉群，王 暉.高效液相色譜－串聯質譜法測定食品中聯苯二甲酸酯[J].現代預防醫學，2008，35(1):119－121.

[6]熊梅謹，費小凡，陳 聰.LC－MS/MS測定注射用聚氯乙烯袋中注射液的聯苯二甲酸二異辛酯[J].華西藥學雜志，2008，23(1):92－93.