輻照對(duì)地塞米松磷酸鈉注射液含量影響的考察

宋宏宇，盧 華，管海燕，藕順龍 ，盧來春

(1.中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所，重慶 400042;2.山東省即墨市中醫(yī)院，山東 青島 266000)

60Co放射源自20世紀(jì)50年代以來應(yīng)用非常廣泛，遍及農(nóng) 業(yè)、工業(yè)、醫(yī)學(xué)，醫(yī)學(xué)上多用于皮膚疾病以及癌癥、腫瘤的放射治療、血液輻照[1-2]。60Co屬于高毒性核素，具有極強(qiáng)的輻射性，能導(dǎo)致人體及物質(zhì)的嚴(yán)重?fù)p害[3-5]。近年來核泄漏事件頻發(fā)，核危害波及地區(qū)受災(zāi)嚴(yán)重。這一情況提示，考察核輻射下急救藥品的穩(wěn)定性極為迫切。因此筆者選擇地塞米松磷酸鈉注射劑為模型藥物，以含量為主要指標(biāo)對(duì)其吸收不同輻照劑量后的變化進(jìn)行初步考察[6]，為輻照條件下該藥品的存貯及使用安全提供參考。地塞米松磷酸鈉主要用于過敏性與自身免疫性炎癥性疾病，多用于紅斑狼瘡、嚴(yán)重支氣管哮喘、嚴(yán)重皮炎、潰瘍性結(jié)腸炎、急性白血病等，也用于某些嚴(yán)重感染及中毒、惡性淋巴瘤的綜合治療，為我國災(zāi)情、疫情等突發(fā)事故發(fā)生后的常備藥物及疾病發(fā)生時(shí)的急救藥物，近年來對(duì)其穩(wěn)定性及配伍穩(wěn)定性的關(guān)注日益增多[7]。

1 儀器與試藥

輻照設(shè)備(60Co-γ射線，第三軍醫(yī)大學(xué)輻照研究中心提供);色譜儀為Agilent Technologies 1200 series HPLC(美國安捷倫公司);Sartorius BT 124S型電子分析天平(德國賽多利斯公司)。地塞米松磷酸鈉對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為10016-200812，含量為90.3%);地塞米松磷酸鈉注射劑(上海禾豐制藥有限公司，規(guī)格為5 mL∶0.1 g，批號(hào)為100807);甲醇(色譜純，安徽時(shí)聯(lián)特種溶劑股份有限公司);磷酸、三乙胺(分析純，成都市科龍化工試劑廠)。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測(cè)定

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)[8-10]:色譜柱為Diamonsil-C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為 0.75% 三乙胺(磷酸調(diào)節(jié) pH至3.0)-甲醇(25∶75)，檢測(cè)波長為280 nm，柱溫為30℃，流速為 1.0 mL/min，進(jìn)樣量 20 μL。在此色譜條件下，色譜圖見圖 1。可見，在該色譜條件下主藥地塞米松磷酸鈉在5 min左右出峰，能與注射劑中輔料較好地分離，說明含量測(cè)定不受輔料干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密稱取地塞米松磷酸鈉對(duì)照品，加流動(dòng)相溶解，并稀釋至質(zhì)量濃度為 5.0，6.0，8.0，10.0，12.0 μg/mL，分別進(jìn)樣20 μL，記錄色譜圖，以質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)、峰面積(A)為縱坐標(biāo)作線性回歸，得回歸方程 A=31.883 8C-17.847 8，r=0.999 8(n=5)。結(jié)果表明，地塞米松磷酸鈉質(zhì)量濃度在5.0～12.0 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。

日內(nèi)精密度考察:配制低、中、高(6，8，10 μg/mL)3 個(gè)質(zhì)量濃度的地塞米松磷酸鈉溶液各3份。按2.1項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣測(cè)定含量。結(jié)果見表1，表明方法日內(nèi)精密度好。

表1 日內(nèi)精密度考察結(jié)果(n=3)

日間精密度與穩(wěn)定性考察:配制低、中、高(6，8，10 μg/mL)3個(gè)質(zhì)量濃度的地塞米松磷酸鈉溶液，密封避光于4℃保存。按2.1項(xiàng)下色譜條件，同一溶液于3 d內(nèi)進(jìn)樣測(cè)定含量。結(jié)果見表2，表明日間精密度較好，且3 d內(nèi)地塞米松磷酸鈉穩(wěn)定性較好。

表2 日間精密度及穩(wěn)定性考察(n=3)

回收率試驗(yàn):配制為6，8，10 μg/mL 3個(gè)質(zhì)量濃度的地塞米松磷酸鈉溶液，每個(gè)質(zhì)量濃度平行配制3份，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果見表3，表明方法準(zhǔn)確度較好。

表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=3)

2.2 輻照處理

以2010年版《中國藥典(一部)》藥品常用輻射滅菌吸收劑量25 kGy為最大輻射吸收劑量[10]，取同一批號(hào)樣品，分為6組，分別在60Co-γ 射線放射源中一次性吸收 1，2，4，8，16，25 kGy的輻照劑量后取出，待含量測(cè)定用。

2.3 輻照處理后外觀及澄明度考察

吸收不同強(qiáng)度輻照劑量與未接受輻照處理的樣品外觀見圖2。可見，樣品吸收不同劑量后澄明度沒有變化，外觀顏色隨吸收劑量增加而加深，但4 kGy以下顏色變化不明顯。

圖2 不同強(qiáng)度輻照后地塞米松磷酸鈉注射液外觀

2.4 不同強(qiáng)度輻照后樣品含量測(cè)定

含量測(cè)定:取輻照前及輻照后的樣品，以流動(dòng)相配制理論質(zhì)量濃度約為10 μg/mL的待測(cè)溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果見表4。可見，隨著輻照強(qiáng)度的增加，地塞米松磷酸鈉含量逐漸降低，一次性吸收8，16，25 kGy輻照劑量后含量下降較明顯;吸收8 kGy輻照劑量的樣品放置4個(gè)月后含量變化不明顯。

輻照后含量變化趨勢(shì):將表4中一次性吸收不同輻照劑量的數(shù)據(jù)以輻照強(qiáng)度(X)為橫坐標(biāo)、質(zhì)量濃度(Y)為縱坐標(biāo)在Excel上作圖，得回歸方程 Y=-0.083 X+10.14，r=0.989 4(n=6)。具體見圖3。

表4 輻照后樣品含量變化(μg/mL，n=3)

圖3 輻照強(qiáng)度與藥物質(zhì)量濃度的關(guān)系

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì):采用SPSS軟件，以未輻照(吸收0 kGy)與吸收不同輻照劑量的樣品含量測(cè)定結(jié)果進(jìn)行獨(dú)立樣本的 t檢驗(yàn)，結(jié)果見表5。可見，樣品輻照前與吸收不同輻照劑量后比較，含量逐漸減少，且含量變化具有極顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

表5 t檢驗(yàn)結(jié)果

3 討論

測(cè)定地塞米松磷酸鈉含量時(shí)，與2010年版《中國藥典(二部)》地塞米松磷酸鈉含量測(cè)定方法中的流動(dòng)相0.75%三乙胺(磷酸調(diào)節(jié) pH 至 3.0±0.05)-甲醇 -乙腈(55 ∶40 ∶5)比較，僅將乙腈省去，且仍采用242 nm為檢測(cè)波長(雖然242 nm不是該條件下的最大吸收波長，但不影響測(cè)定靈敏度)。方法學(xué)考察表明，采用此方法測(cè)定，地塞米松磷酸鈉與注射劑中其余輔料成分能較好分離，方法精密度、準(zhǔn)確度均較好，且節(jié)省試劑，可有效降低檢測(cè)成本。

樣品吸收不同強(qiáng)度的輻照劑量后，主藥含量隨吸收輻照劑量的增加而下降，且下降趨勢(shì)具有一定的線性特征。根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果可知，輻照對(duì)樣品含量具有顯著影響，但吸收4 kGy輻照劑量藥物含量下降至96.31%;吸收8 kGy輻照劑量后含量下降至88.30%，放置4個(gè)月后含量為87.74%。當(dāng)吸收4 kGy及以下輻照劑量藥物含量雖有所下降，但仍在標(biāo)示量的90% ～110%之內(nèi)[10]。因此，含量變化雖然有顯著性差異，但仍在注射劑質(zhì)量合格范圍內(nèi)。初步認(rèn)為，吸收小于4 kGy的輻照劑量，對(duì)地塞米松磷酸鈉注射液含量沒有顯著影響。

本試驗(yàn)增加了將8 kGy輻照處理后的樣品放置4個(gè)月并進(jìn)行含量測(cè)定，目的是考察輻照后效應(yīng)。計(jì)算知吸收8 kGy輻照劑量后即刻含量為88.30%，放置4個(gè)月后含量為87.74%，是放置前含量的99.4%，含量降低在方法回收率的可控范圍內(nèi)。初步認(rèn)為，一次性吸收一定輻照劑量后樣品放置過程中的含量沒有變化，可繼續(xù)放置并考察輻照對(duì)藥物的含量影響。

綜合上述結(jié)果，結(jié)合輻照前后樣品色譜圖(圖1B及C)、外觀(圖2)可知，在藥典規(guī)定的最大滅菌輻照劑量范圍內(nèi)，采用60Co所產(chǎn)生的γ射線一次性照射地塞米松磷酸鈉注射液，其外觀及澄明度無明顯變化，但隨著輻照劑量的增加其含量降低趨勢(shì)顯著。且輻照后色譜圖與輻照前相比主峰后出現(xiàn)了未知雜質(zhì)峰，說明經(jīng)射線輻照的注射液中可能合成、降解生成了新的物質(zhì)，尚待進(jìn)一步研究。另外，輻照后制劑的藥效、毒理是否變化仍需深入研究。

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