高效液相色譜法測定可待敏緩釋膠囊的釋放度

袁 鷹 ，張庭瑞 ，董明芝 ，趙 波 ，黃 婷

(1.西安正大制藥有限公司，陜西 西安 710043;2.寧夏回族自治區(qū)固原市原州區(qū)藥材公司，寧夏 固原 756000)

可待敏緩釋膠囊的主要成分為磷酸可待因和馬來酸氯苯那敏，臨床上主要用于暫時(shí)緩解一般性感冒或吸入刺激物引發(fā)的咳嗽，以及由于干熱、其他上呼吸道過敏或過敏性鼻炎導(dǎo)致的鼻塞、噴嚏、鼻或喉嚨搔癢、眼睛不適等癥狀。對緩釋制劑進(jìn)行釋放度測定是控制其質(zhì)量的重要指標(biāo)之一。筆者參考文獻(xiàn)[1－2]，建立了反相高效液相色譜法測定可待敏緩釋膠囊的釋放度，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀，包括Shimadzu LC－10 ATVP泵，Shimadzu SPD－10AVP紫外檢測器;AL－204型電子天平(梅特勒公司);RC－806型智能溶出儀。磷酸可待因?qū)φ掌?中國藥品生物制品檢定所，批號為041112，含量100%);馬來酸氯苯那敏對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為030415，含量100%);可待敏緩釋膠囊(自制，批號為 20040601，20040602，20040603);水為純凈水，甲醇為色譜純，離子對試劑己烷磺酸鈉(IPR－B6，天津市化學(xué)試劑二廠)，色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Diamonsil C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:0.05 mol/L磷酸二氫鉀，加入0.01%的己烷磺酸鈉溶液(IPRB6)和0.5%三乙胺，用磷酸調(diào) pH至6.0，與甲醇以(50∶55)的比例配成流動相并調(diào)節(jié) pH 至 7.0～7.5;流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣量:20 μL;檢測波長 220 nm;柱溫:室溫。

2.2 溶液制備

取磷酸可待因和馬來酸氯苯那敏對照品適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1 mL約含磷酸可待因20 μg、馬來酸氯苯那敏4 μg的溶液，搖勻，即得對照品溶液。取供試品20粒，精密稱定，取內(nèi)容物混合均勻，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于磷酸可待因20 mg)，置100 mL容量瓶中，加水適量，超聲處理20 min，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液用水稀釋制成每1 mL約含磷酸可待因20 μg的溶液，搖勻，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

干擾試驗(yàn):將空白微丸(以成品的生產(chǎn)工藝制成不含藥物成分的包衣微丸)按處方量裝入3號膠囊中，分別取空白膠囊和可待敏緩釋膠囊各1粒，分別置溶出杯內(nèi)，按照樣品釋放度試驗(yàn)條件進(jìn)行試驗(yàn)，于12 h取樣，按照釋放度檢測方法進(jìn)行檢驗(yàn)。結(jié)果空白微丸在磷酸可待因和馬來酸氯苯那敏主峰保留時(shí)間處無色譜峰，不影響主藥成分釋放度的測定，表明在此條件下無背景干擾。高效液相色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:根據(jù)處方比例，將兩種主藥成分配制成一系列不同質(zhì)量濃度的混合對照品溶液，依次進(jìn)行液相色譜分析，以峰面積 A為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度 C(μg/mL)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。磷酸可待因回歸方程為 A=44 139 C，r=0.999 9;馬來酸氯苯那敏的回歸方程為 A=32 978 C－16 017，r=0.999 8。結(jié)果表明，磷酸可待因質(zhì)量濃度在0～30.0 μg/mL范圍內(nèi)，馬來酸氯苯那敏質(zhì)量濃度在2.814～5.226 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):取供試品水溶液(配制成每毫升約含磷酸可待因20 μg、馬來酸氯苯那敏4 μg的溶液)，于室溫下自然放置，分別于 0，1，2，4，6，8 h 時(shí)進(jìn)樣測定(n=6)。結(jié)果可待因峰面積的RSD為0.2%，馬來酸氯苯那敏峰面積的 RSD為0.3%。

重復(fù)性試驗(yàn):取批號為20040601樣品6份，在擬訂的色譜條件下進(jìn)行測定。結(jié)果磷酸可待因、馬來酸氯苯那敏含量的 RSD分別為0.26%和0.39%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性好。

回收率試驗(yàn):按處方比例，取兩種主藥成分及各種輔料配制成樣品后，測兩種組分的回收率。結(jié)果磷酸可待因和馬來酸氯苯那敏兩種成分的回收率分別為99.7%和100.6%，RSD分別為0.17%和0.28%(n=9)，表明分析方法準(zhǔn)確可靠。

重現(xiàn)性與均一性試驗(yàn):考察至少3批(每批6粒產(chǎn)品)樣品的批與批之間體外藥物釋放度的重現(xiàn)性，并考察同批產(chǎn)品(即1批6粒)的體外藥物釋放度取樣時(shí)間點(diǎn)的均一性。結(jié)果見圖2。可見，3批中試樣品的溶出曲線重現(xiàn)性很好，表明方法的重現(xiàn)性與均一性很好。

圖2 3批中試樣品體外藥物釋放曲線

2.4 樣品釋放度檢測

取本品，照2010年版《中國藥典(二部)》附錄ⅩD第一法中釋放度測定法，采用2010年版《中國藥典(二部)》附錄ⅩC第二法中溶出度測定法的裝置，以水900 mL為釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100 r/min，依法操作，經(jīng) 1，4，8 h，分別取溶液 5 mL 濾過，并即時(shí)在操作容器中補(bǔ)充釋放介質(zhì)5 mL。分別精密量取續(xù)濾液20 μL，注入液相色譜儀，按照上述色譜條件測定，記錄色譜圖;另取磷酸可待因、馬來酸氯苯那敏對照品適量，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含磷酸可待因20 μg、馬來酸氯苯那敏4 μg的溶液，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積分別計(jì)算每粒在不同時(shí)間的釋放量。磷酸可待因的限度為本品每粒在1，4，8 h的釋放量，分別為標(biāo)示量的10% ～35%，55% ～80%，75%;馬來酸氯苯那敏的限度為本品每粒在1 h的釋放量為標(biāo)示量的80%，符合規(guī)定。結(jié)果見表2。

表2 樣品體外釋放度測定結(jié)果(n=6)

3 討論

分別取兩組分對照品溶液，用紫外分光光度計(jì)于190～280 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，兩者在220 nm波長處均有較大的吸收，因此確定檢測波長為220 nm。

2010年版《中國藥典(二部)》規(guī)定，以去空氣的新鮮水為最佳的釋放溶劑，釋放溶劑的體積應(yīng)符合漏槽條件。參照2010年版《中國藥典(二部)》磷酸可待因及馬來酸氯苯那敏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，采用可待敏緩釋膠囊體外藥物釋放度試驗(yàn)的釋放介質(zhì)為水900 mL。

[1]南 楠，陳 華，朱霽虹.HPLC法測定萬輝化痰止咳露中磷酸磷酸可待因、鹽酸麻黃堿和馬來酸馬來酸氯苯那敏的含量[J].藥物分析雜志，2000，20(1):7 －9.

[2]李小清.高效液相色譜法測定復(fù)方磷酸可待因溶液中的撲爾敏含量[J].中國藥業(yè)，2001，10(1):29 －30.