骨康膠囊中氨基葡萄糖和硫酸軟骨素的含量測定

宣偉東，陳海飛，萬雅，卞 俊

(中國人民解放軍第四一一醫院藥學科，上海 200081)

骨康膠囊為我院骨科臨床應用多年的自制制劑，由生姜提取物、硫酸軟骨素及氨基葡萄糖等成分組成。氨基葡萄糖為骨關節炎治療藥物，硫酸軟骨素為酶水解產物，具有良好的軟管營養作用[1]。該產品中加入了生姜提取物，其中的姜酚、姜烯類活性成分氨基葡萄糖和硫酸軟骨素對關節炎的治療起到了良好的協同作用，但同時也為上述兩種成分的含量測定帶來了極大干擾。為控制該制劑的質量，筆者采用分光光度法，分別以Elson－Morgan法、咔唑法測定骨康膠囊中的氨基葡萄糖和硫酸軟骨素的含量。現報道如下。

1 儀器與試藥

UV－2550型分光光度計(日本島津公司)，AB104－N型電子分析天平(梅特勒－托利多公司)。氨基葡萄糖標準品(批號為100812)、硫酸軟骨素標準品(批號為110206)均由中國藥品生物制品檢定所提供;骨康膠囊(醫院自制);其他試劑(乙酰丙酮、濃硫酸、咔唑、對二甲氨基苯甲醛)均為分析純。

2 方法與結果

2.1 溶液制備

試液:乙酰丙酮試液，取乙酰丙酮2 mL，加至50 mL碳酸鈉溶液中，臨用前1 d配制并冷藏。對二甲氨基苯甲醛試液，稱取對二甲氨基苯甲醛0.8 g，加無水乙醇和12 mol/L鹽酸各15 mL，混勻，即得。咔唑試劑，稱取50 mg，溶于50 mL 95%乙醇中，充分搖勻，即得。上述試液均須臨用前新鮮配制。

標準品溶液:分別精密稱取經105℃干燥恒重后的氨基葡萄糖、硫酸軟骨素對照品各8，15 mg，分別置100 mL容量瓶中，加蒸餾水溶解，定容，搖勻，分別制得質量濃度為80，150 μg/mL的標準品溶液。

供試品溶液:本品每粒膠囊中標示含氨基葡萄糖330 mg、硫酸軟骨素60 mg、生姜提取物30 mg。為避免生姜提取物對含量測定的干擾，須先進行預處理。取本品6粒，倒出內容物，合并，混勻，稱重。精密稱取42 mg內容物，加蒸餾水10 mL，超聲溶解，過濾，殘渣用蒸餾水10 mL分3次洗滌，濾液轉移至100 mL分液漏斗，用二氯甲烷10 mL分2次萃取，分取水層，轉移至50 mL容量瓶中，加蒸餾水定容后混勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.2 方法學考察

線性關系考察:精密量取氨基葡萄糖標準品溶液 0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL，分別置 10 mL 帶塞試管中，加蒸餾水定容至5 mL，分別加1 mL乙酰丙酮試液，混勻后置沸水浴中乙酰化15 min，冷卻，分別加入3 mL無水乙醇和1 mL對二甲氨基苯甲醛試液，振搖，60℃水浴1.5 h，冷卻至室溫。以不含氨基葡萄糖的空白溶液為參比，照分光光度法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅤA]，在520 nm波長處測定反應液的吸收值，以氨基葡萄糖含量(μg)為橫坐標、吸光度為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程為 Y=0.003 6 X －0.026，r=0.999 6。結果表明，氨基葡萄糖含量在40～200 μg范圍內與吸光度線性關系良好。精密吸取硫酸軟骨素標準品溶液 0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8 mL，分別置 10 mL帶塞試管中，加蒸餾水定容至1 mL，加濃硫酸6 mL，混勻后置85℃溫浴20 min，冷卻至室溫，分別加入咔唑試劑0.2 mL，振搖，室溫放置2 h。以不含硫酸軟骨素的空白溶液為參比，照分光光度法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅤA]，在530 nm波長處測定反應液的吸收值，以硫酸軟骨素含量(μg)為橫坐標、吸收度為縱坐標繪制標準曲線，得線性回歸方程 Y=0.001499X+0.01292，r=0.999 8。結果表明其含量在15～120 μg范圍內與吸光度線性關系良好。

精密度試驗:取氨基葡萄糖和硫酸軟骨素標準品溶液各1.0 mL和0.5 mL，分別依法連續測定5次。結果的 RSD分別為1.36% 和2.12%，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:精密量取同一批供試品(批號為110628)溶液適量，照上述方法操作，分別在反應結束后每隔1 h測定反應液的吸光度。結果氨基葡萄糖的吸光度在4 h內穩定，RSD為0.52%，6 h內 RSD 為 3.60%，8 h內 RSD 為 6.78%;硫酸軟骨素的吸光度在 4 h內為 1.38%，6 h為 5.13%，8 h內為 8.40%。表明兩者經顯色反應后，反應液在4 h內穩定性良好。

重復性試驗:按2.1項方法平行制備6份同一批號的骨康膠囊供試品溶液(批號110628)，按含量測定方法操作，測定含量。結果氨基葡萄糖、硫酸軟骨素的平均含量分別為98.4%和97.5%，RSD分別為0.81%和1.21%，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的樣品內容物6份，每份21 mg(批號為110628)，依法制備供試品溶液。精密量取供試品溶液1 mL，置于10 mL容量瓶，加水定容，搖勻。精密量取上述溶液1 mL，分別精密加入相當于其含量80%，100%，120%的氨基葡萄糖標準品溶液，照上述方法操作，測定氨基葡萄糖含量，計算回收率。同法精密量取供試品溶液0.5 mL，精密加入適量的硫酸軟骨素標準品溶液，依法測定含量，計算回收率。結果見表1。

表1 氨基葡萄糖、硫酸軟骨素加樣回收試驗結果(n=6)

2.3 樣品含量測定

精密吸取供試品溶液1 mL，置10 mL容量瓶中，加蒸餾水定容，混勻。精密吸取吸取上述溶液、氨基葡萄糖標準溶液以各1 mL，分別置10 mL帶塞試管中，加蒸餾水定容至5 mL，另取一支10 mL帶塞試管，加蒸餾水定容至5 mL。上述3支試管照2.2項下方法操作，依法測定吸收度，計算樣品中氨基葡萄糖的含量。精密吸取硫酸軟骨素標準溶液和供試品溶液各0.5 mL，分別置10 mL帶塞試管中，加蒸餾水定容至1 mL。另取一支10 mL帶塞試管，加蒸餾水定容至1 mL。上述 3支試管照2.2項下方法操作，依法測定吸收度，計算樣品中硫酸軟骨素的含量。3批制劑含量測定結果見表2。

表2 3批制劑含量測定結果[含量(mg/粒)/%]

3 討論

本品主要成分為氨基葡萄糖、硫酸軟骨素和生姜提取物。生姜中姜酚、姜烯等辛辣成分具有活血化瘀、消炎止痛的功效，與氨基葡萄糖、硫酸軟骨素合用，可以起到良好的協同作用，臨床對骨關節炎優良的治療效果也證實了這一點。含氨基葡萄糖和硫酸軟骨素的制劑多采用Elson－Morgan法[2]、咔唑法[3]或高效液相色譜法[4]進行含量測定，但本品中含有生姜提取物，其易氧化的姜酚、姜烯類成分其對上述方法均可產生極大的干擾。為解決這一問題，在制備供試品溶液時，先用二氯甲烷萃取生姜中的脂溶性成分，再用Elson－Morgan法測定氨基葡萄糖、咔唑法測定硫酸軟骨含量。結果表明，這一方法可有效降低生姜成分對測定的影響，同時氨基葡萄糖對硫酸軟骨素的測定未產生干擾。該法準確度高，回收率好，簡單可靠，適合樣品中氨基葡萄糖和硫酸軟骨素的快速含量測定。

[1]劉憲峰，王 貞，李穩強.硫酸軟骨素雙酶法生產新工藝[J].中國藥業，2010，19(22):55 －56.

[2]翟詠紅，萬丹晶.氨基葡萄糖和硫酸軟骨素含量測定方法的建立[J].中國藥業，2005，14(4):44－45.

[3]齊敬總，閆曉玲.硫酸軟骨素含量測定方法介紹[J].中國生化藥物雜志，2002，23(3):162 －164.

[4]林燕飛，孫靜蕓.HPLC－ELSD法測定復方氨基葡萄糖片中硫酸軟骨素的含量[J].中國現代應用藥學雜志，2006，23(5):388－390.