環氧化酶2抑制劑聯合化療藥對人肺癌裸鼠移植瘤生長和淋巴轉移的影響

王 娜 (邢臺市人民醫院急診科，河北 邢臺 054000)

研究表明環氧化酶-2(COX-2)，血管內皮生長因子-C(VEGF-C)，血管內皮生長因子受體-3(VEGFR-3)，生存素(surviving)及 β-連環素(β-catenin)與腫瘤的發生、發展、侵襲及轉移密切相關，故目前許多實驗室通過對上述指標的監測來判定抗腫瘤藥物的效果及腫瘤的發展情況〔1〕。動物實驗表明COX-2抑制劑能夠抑制腫瘤的生長與轉移，并增強化療藥物的效果〔2〕。本次觀察COX-2抑制劑聯合化療藥對人肺癌裸鼠移植瘤的生長和淋巴轉移的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 選取30只BALB/c雄性裸小鼠，體重20～25 g，均購自天津天垚生物科技有限公司，均在無特定病原體的IVC環境中飼養，所用飼料及飲用水均無菌。

1.2 方法 將人肺癌A549細胞置于DMEM培養基，培養基中含小牛血清、青霉素及鏈霉素，培養基放置于溫度恒定為37℃，CO2濃度為5%的溫箱內。待70% ～80%細胞貼壁生長并融合時，使用胰蛋白酶進行消化傳代。挑取處于對數生長期的細胞再次進行消化與洗滌，使用不含牛血清的培養基對其進行稀釋，并將細胞密度調整至1×107/ml。將完成培養的細胞制成細胞懸液，使用注射器裝載2 ml上述細胞懸液注射至裸鼠右側腋部皮下。待所有小鼠的移植瘤的平均直徑生長至約4 mm后，將30只小鼠按隨機數字表法隨機分成實驗組與對照組，兩組均為15只。實驗組腹腔注射奧沙利鉑甘露醇注射液，每次 10 ml/kg，同時采用尼美舒利灌胃給藥，劑量20 mg·kg－1·d－1。對照組僅接受腹腔注射奧沙利鉑甘露醇注射液，劑量與實驗組相同。每6 d測量1次小鼠移植瘤的體積，用游標卡尺量出腫瘤的長徑(a)、短徑(b)，用公式V=ab2/2計算體積，并繪制移植瘤的生長曲線。30 d后，將所有小鼠處死，切除移植瘤，分別使用免疫組化法與實時定量PCR法測定裸鼠移植瘤組織中 COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，Survivin及 βcatenin蛋白的積分吸光度值與mRNA的表達水平。

1.3 統計學方法 應用SPSS16.0統計軟件進行分析，數據資料以±s表示，組間比較使用t檢驗，計數資料采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 兩組腫瘤生長情況對比 用藥30 d后，實驗組移植瘤體積為(562.84±197.43)mm3，對照組為(812.35±105.74)mm3，兩組移植瘤體積的差異比較有統計學意義(t=4.315，P＜0.05)。見圖1。

2.2 兩組移植瘤中 COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，Survivin及β-catenin蛋白積分吸光度值及mRNA表達水平比較 見表1，表2。實驗組移植瘤中COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，survivin及βcatenin蛋白的積分吸光度值及mRNA表達水平均高于對照組(P ＜0.05)。

表1 實驗組與對照組移植瘤中COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，survivin及β-catenin蛋白的積分吸光度值比較(±s，n=15)

表1 實驗組與對照組移植瘤中COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，survivin及β-catenin蛋白的積分吸光度值比較(±s，n=15)

-catenin實驗組 8 412±1 496 8 403±1 445 8 415±1 813 5 513±1 488 8 32組別 COX-2 VEGF-C VEGFR-3 survivin β 8±1 734對照組 16 205±2 195 15 392±2 189 14 397±2 317 9 825±1 791 10 227±2 031 t值 11.362 10.320 7.870 7.172 2.754 P值0.000 0.000 0.000 0.000 0.010

表2 實驗組與對照組移植瘤中COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，survivin及β-catenin mRNA表達水平對比(±s，n=15)

表2 實驗組與對照組移植瘤中COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，survivin及β-catenin mRNA表達水平對比(±s，n=15)

-catenin實驗組 0.842±0.121 0.603±0.019 0.658±0.049 0.325±組別 COX-2 VEGF-C VEGFR-3 survivin β 0.075 0.394±0.029對照組 1.368±0.197 1.256±0.175 1.371±0.068 0.647±0.061 0.442±0.028 t值 8.812 14.363 32.947 12.900 4.612 P值0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

圖1 實驗組與對照組移植瘤的生長曲線

3 討論

流行病學調查的結果顯示全球每年的新發肺癌病例約為100萬例，其中我國每年的新發病例約為21萬例，且每年死于肺癌的國人約為60萬〔3～6〕。由于中晚期肺癌常發生轉移，故局部治療的效果不明顯，而化療或靶向治療等全身性的藥物治療在中晚期肺癌的治療中占據了絕對的位置。

肺癌最常見的轉移途徑是淋巴轉移，研究表明COX-2具有促進腫瘤細胞及內部血管的生成與增殖、加快腫瘤轉移與侵潤的作用，并能夠將前致癌物質轉化為致癌物質以此促進腫瘤的進一步惡化。大量研究表明長時間使用非甾體類抗炎藥能夠降低惡性腫瘤的發病危險，并能夠抑制腫瘤細胞的生長〔7〕。目前針對抑制COX-2的分子靶向治療在臨床逐漸被普及，尼美舒利作為一種選擇性較高的COX-2抑制劑被用于惡性腫瘤的預防與治療。相比于傳統的非甾體類抗炎藥，尼美舒利不會抑制胃腸道黏膜前列腺素的合成，故患者的胃腸道副反應較少。奧沙利鉑是帶三代鉑類抗腫瘤藥，其毒性較卡鉑及順鉑大大降低，對部分耐受鉑類藥物的腫瘤也有較好的作用。本研究結果與文獻報道的結果相同〔8〕，提示COX-2抑制劑與化療藥物聯合使用在抑制腫瘤細胞的生長中有協同作用。

VEGF-C與其受體VEGFR-3結合之后能夠對機體內成熟淋巴管的生成進行調節，并介導腫瘤細胞的淋巴道轉移。研究表明COX-2能夠催化前列腺素E2與其受體結合并激活，繼而促進人表皮生長因子受體磷酸化，最后增強VEGF-C基因的表達與轉錄，造成腫瘤的淋巴道轉移〔9〕。survivin是目前為止發現的最強的凋亡抑制因子，能夠通過與caspase結合而使其活性受到抑制，起到抑制細胞凋亡的作用。survivin在正常組織中幾乎不表達，主要分布在惡性腫瘤組織中。研究表明COX-2的高表達使得survivin的泛素化得到抑制，并加強了survivin的穩定性，而當COX-2的活性受到抑制時，survivin的表達也隨之發生下降。但當survivin受到RNA的干擾封閉后，COX-2的表達并不發生改變，故有學者推斷COX-2位于survivin的上游，并能夠調控survivin的表達〔10〕。β-catenin是一種在機體生長發育過程中具有指導作用的細胞骨架成分，但在腫瘤細胞中，其能夠通過對下游靶基因c-myc與cyclinD1的調節來促進腫瘤細胞的浸潤與轉移。Noda等發現E-cadherin與β-catenin關系密切，而COX-2抑制劑可以對E-cadherin進行上調來抑制β-catenin，進而抑制腫瘤細胞的生長與轉移〔11，12〕。綜上所述，COX-2抑制劑聯合化療藥具有協同抗腫瘤的作用，并抑制了腫瘤細胞的生長與淋巴轉移，值得推廣。

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10 陳麗昆，何友兼，黃 河，等.選擇性COX-2抑制劑對非小細胞肺癌細胞株毒性及分子機制的研究〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2007;14(12):901-4.

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