高效液相色譜法測(cè)定苗藥柏花草膠囊中鹽酸小檗堿含量

羅永惠 任彩芬

（1.貴州德良方藥業(yè)股份有限公司，貴州 興義 562400；2.貴州大成藥業(yè)有限公司，貴州 龍里 551200）

柏花草膠囊批準(zhǔn)文號(hào)為：國(guó)藥準(zhǔn)字Z20110015，由黃柏、靈芝、仙鶴草、紅花、百合共 5味中藥組成，原為我省苗族民間長(zhǎng)期使用確有療效的驗(yàn)方。有清熱止血，補(bǔ)氣養(yǎng)陰的功效，用于治療痔瘡癥見(jiàn)肛門(mén)腫痛，便時(shí)滴血，伴見(jiàn)口干口苦，大便干結(jié)、或伴見(jiàn)頭暈?zāi)垦！⑺闹珶o(wú)力、面色無(wú)華、失眠多夢(mèng)等癥。為提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)研究，建立了該制劑中君藥黃柏有效組分鹽酸小堿高效液相色譜（HPLC）的含量測(cè)定方法，極道如下。

1 儀器與試藥

島津LC-IATvp型高效液相色譜儀（SPD-10A紫外檢測(cè)器），咸馬龍色譜數(shù)據(jù)工作站；島津UV-250IPC紫外 -可見(jiàn)分光光度計(jì)；梅特勒-托利多GF-2000型、AG245型電子天平。柏花草膠囊（貴州德良方藥業(yè)股份有限公司），批號(hào)為 20090501、20090603、20090605；甲醇為色譜試劑，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純；鹽酸小檗堿（中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào)為110751-200810）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)：色譜柱：SUPELCOSILTM LC-C18（5μm，250×4.6i.d.mm）。

流動(dòng)相：乙腈-四氫呋喃 -0.05mol·L-1磷酸二氫鉀（含 0.07%三乙胺，磷酸調(diào) PH為 3）（140∶40∶820）；流速：1.2ml/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：430nm；靈敏度0.5；進(jìn)樣量 10μl。

在此色譜條件下，理論塔板數(shù)以鹽酸小檗堿計(jì)應(yīng)不低于4000，陰性對(duì)照樣品溶液在與對(duì)照品溶液和供試品溶液相同保留時(shí)間處未顯色譜峰，故無(wú)干擾（圖1）。

2.2 溶液制備：精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品15.51mg（含量 98.14%）,置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得每1mL含0.305mg的對(duì)照品溶液。取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混合均勻，取約0.4g，精密稱定，置100mL容量瓶中，精密加入甲醇-水-鹽酸（80∶19∶1）50mL，密塞，于超聲波中超聲提取 10min，搖勻，靜置，取上清液用0.45μm濾膜過(guò)濾，即得供試品溶液。取除黃柏外的其余處方量藥材飲片，按處方比例及工藝制備不含黃柏的陰性樣品，同供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察：標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密吸取對(duì)照品溶液 2、4、6、8、10μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜以峰面積（μV·s）對(duì)質(zhì)量（μg）進(jìn)行線性回歸計(jì)算（圖7-3）， 得 回 歸 線 性 方 程 為 ：C （μg）=6.9173×10-6A+9.186×10-3，τ=0.9999，擬和為過(guò)坐標(biāo)原點(diǎn)的直線方程為 C（μg）=6.948×10-6A.將一供試品溶液進(jìn)樣分析所得峰面積分別代入上兩式方程計(jì)算，結(jié)果的相對(duì)偏差為0.055%，由此可視截距近似為零，故正文采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算含量。線性范圍為0.610～3.050μg。

對(duì)照品

樣品

陰性

溶劑

精密度試驗(yàn)：取一供試品，按藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案中供試液的制備方法制備供試液，重復(fù)進(jìn)樣5次，依法測(cè)定計(jì)算。峰面積值的RSD為0.47%（n=5），表明儀器精密度良好。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批號(hào)的樣品（批號(hào)為20090501）5份，精密稱定同法制備5份供試液，分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，結(jié)果鹽酸小檗堿平均含量為3.53%，RSD為0.63%.表明方法重現(xiàn)性較好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一份供試品溶液，分別在制備后0、2、4、6、12、24h進(jìn)行測(cè)定峰面積。結(jié)果表明供試品溶液在 24h內(nèi)測(cè)定穩(wěn)定性良好，RSD為 0.11%（n=5）。

加樣回收率試驗(yàn)：稱取已測(cè)定含量為4.72%的樣品（批號(hào)為 20090601）細(xì)粉 150mg,加入不同量的鹽酸小檗堿對(duì)照品，同法制備6份供試液，分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，結(jié)果鹽酸小檗堿的平均回收率為99.16%，RSD為0.11%，說(shuō)明具有較好的加樣回收率。

2.4 樣品含量測(cè)定：精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，按上述色譜條件測(cè)定十批樣品的鹽酸小檗堿含量結(jié)果，其結(jié)果分別為21.55、21.20、16.80、16.20、16.10、18.20、17.90、24.10、23.50、23.80mg/粒（n=2）.

3 討 論

根據(jù)鹽酸小檗堿紫外掃描結(jié)果，鹽酸小檗堿在228.6、264.6、348.8、429.4nm處均有顯著吸收峰，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在430nm下檢測(cè)，圖譜分離較好，陰性對(duì)照無(wú)干擾，故選定430nm為制劑中鹽酸小檗堿的檢測(cè)波長(zhǎng)。用乙腈-四氫呋喃-0.05mol/L磷酸二氫鉀（含0.07%三乙胺，磷酸調(diào) pH為 3）（140∶40∶820）；乙腈-0.1%磷酸溶液（每100ml加十二烷基磺酸鈉0.1g）（50∶50）等流動(dòng)相試驗(yàn)，結(jié)果以文中所用流動(dòng)相所得圖譜峰形，分離度較好。曾以流速為0.8、1.0、1.2ml/min進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果流速為1.0ml/min時(shí)峰形、壓力最好。根據(jù)10批樣品測(cè)定結(jié)果及考慮到黃柏藥材的產(chǎn)地、采收季節(jié)、制劑等因素，按70%計(jì)算，可考慮柏花草膠囊中鹽酸小檗堿的含量限度為不得少于10mg/粒。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2005,10.

[2]張緒嶠.藥物制劑設(shè)備與車間工藝設(shè)計(jì)[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2000,8.