PENTRA MS60血液分析儀檢測不典型淋巴細胞結果分析

徐 鵬， 薛冰蓉，吳 延，楊渝偉，薛 莉，葉 平

(1.綿陽市中心醫院檢驗科，四川 綿陽 621000;2.堀場(中國)貿易有限公司醫療事業部，上海 200335)

血常規是最基本的血液學分析項目，及時出具患者血常規診斷報告，縮短門診患者等候血細胞分析報告時間是本科室亟待解決的問題。近期本科室增設了用血量少、檢測時間更短的PENTRA MS60血液分析儀(簡稱PMS60)。PMS60和SYSMEX XS800i血液分析儀(簡稱XS800i)同時使用必然會導致結果差異，那么能否實現結果互認并滿足臨床診治需求，是目前必須解決的問題。如PMS60儀器的不典型淋巴細胞(atypical lymphocyte，ALY)是在散點圖中位于淋巴細胞和單核細胞之間的一群細胞，包括小原始細胞、大淋巴細胞、反應性淋巴樣細胞、刺激性淋巴細胞、漿細胞等[1]，而XS800i與ALY相應的警示標志應為原始細胞、異型淋巴細胞、異常淋巴細胞等。為了驗證PMS60測定ALY結果的可靠性，我們以顯微鏡分類鏡檢為標準，同時用PMS60、XS800i檢測相同樣本，對其ALY的測定結果進行比對與分析。

材料和方法

一、樣本來源

408例樣本均來自綿陽市中心醫院門診患者，經PMS60檢測出現含ALY報警的樣本193例(男92例、女101例，年齡27 d～56歲，兒童158例，成人35例)，無ALY報警的樣本215例(男108例、女97例，年齡1個月 ～80歲，兒童162例，成人53例)。

二、方法

1.儀器與試劑 PMS60為法國ABX公司產品，XS800i為日本Sysmex公司產品。2臺儀器均使用原裝配套試劑和質控品。OLYMPUS CX21顯微鏡由日本奧林巴斯公司生產。瑞氏染液按照《全國臨床檢驗操作規程》(第3版)要求配制。

2.樣本采集 采用BD公司提供的含乙二胺四乙酸二鉀的尖底采血管采集末梢血0.5 mL后用混勻器充分混勻，采用BD公司提供的乙二胺四乙酸二鉀真空采血管采集靜脈血3 mL輕輕顛倒混勻，上機檢測，制備符合要求的血涂片并編號染色，均在2 h內完成。

3.檢測方法 PMS60和XS800i測定均嚴格按照血液分析儀操作規程進行操作。每張血涂片由有經驗的檢驗工作人員在顯微鏡下采用雙盲法分類200個白細胞。

三、ALY陽性判斷標準

以顯微鏡檢查結果作為“金標準”。將儀器測定結果與鏡檢結果進行對比，有該項報警信號者，若鏡檢陽性，則為真陽性，否則為假陽性;如果鏡檢陰性同時也沒有該項報警信號，則為真陰性，如果鏡檢陽性而沒有該項報警信號，則為假陰性。

1.PMS60 以儀器廠商提供標準為依據，即出現ALY提示信息且比例＞2.5%和/或絕對值＞0.25×109/L為儀器報警陽性。

2.XS800i 出現原始細胞、異常淋巴細胞和異型淋巴細胞任何1項或1項以上為儀器報警陽性。

3.血涂片 (1)非淋系異常細胞≥1%;(2)異型淋巴細胞≥2%;(3)異常淋巴細胞(原始或幼稚淋巴細胞)≥1%;(4)漿細胞≥1%。只要滿足上述任何一項指標者即為陽性。

四、統計學方法

運用SPSS 17.0統計學軟件，對儀器顯示的ALY計算Kappa值，判斷警示標志與相應細胞檢出的一致性。Kappa值≥0.75，兩者達到滿意的一致性;0.4≤Kappa值＜0.75，兩者一致性尚可;Kappa 值 ＜0.4，兩者一致性不夠理想[2]。

結 果

一、2臺血液分析儀出現ALY報警陽性樣本比對分析

PMS60與XS800i出現ALY報警一致率為89.7%，Kappa值為0.793，提示信息的一致性滿意。見表1。

表1 PMS60與XS800i出現ALY報警的比對分析(例)

二、2臺血液分析儀出現 ALY報警與顯微鏡分類結果比對分析

與顯微鏡分類相比，PMS60出現ALY報警的Kappa值為0.792，一致性評價為滿意，血涂片復檢率(復檢率=真陽性率+假陽性率)為47.3%、漏檢率(假陰性率)為1.5%、總符合率(準確度)為89.7%、約登指數為0.82;XS800i出現ALY報警的Kappa值為0.779，一致性評價為滿意，血涂片復檢率為43.9%、漏檢率(假陰性率)為3.4%、總符合率(準確度)為89.2%、約登指數為0.79。見表2、表3。

表2 2臺血液分析儀出現ALY報警與顯微鏡分類結果比對分析 (例)

表3 2臺血液分析儀出現ALY報警的敏感性及特異性分析 (%)

三、PMS60驗證試驗

隨機選擇112例樣本在該儀器上檢測，并與顯微鏡分類結果對比分析，結果顯示20例ALY陽性樣本中有5例假陽性，92例陰性樣本中有1例假陰性，準確度為94.6%。

討 論

PMS60采用的雙鞘流通道技術是白細胞五分類、幼稚細胞定量測定的核心原理。在LMNE散點圖中同時得到嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、單核細胞、淋巴細胞、嗜堿性粒細胞、ALY和巨大未成熟細胞的結果。PMS60出現ALY報警信息的原因是樣本中可能存在漿細胞、ALY和大淋巴細胞[1]。XS800i采用半導體激光流式細胞結合細胞染色技術，在DIFF和BASO通道中同時得到嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、單核細胞、淋巴細胞和嗜堿性粒細胞的結果，同時還得到幼稚粒細胞和OTHER(相當于PMS60的ALY)2個研究性參數結果，在白細胞提示信息欄中可得到原始細胞、核左移、異型淋巴細胞、異常淋巴細胞等提示信息。XS800i中的OTHER參數僅對原始細胞、異型淋巴細胞及異常淋巴細胞等進行大概分析[3]，而對于PMS60測定的ALY結果雖然是定量的，但畢竟是多類細胞的綜合體。因此，PMS60的ALY警示標志只能與XS800i的OTHER警示標志做定性比較。本研究顯示，2臺儀器間出現ALY報警信息一致率高(89.7%)，Kappa 值為0.793，一致性滿意，該項可實現檢驗結果互認。

以顯微鏡分類為標準，PMS60對ALY報警提示的Kappa值為0.792，顯示一致性為滿意。顯微鏡分類陽性的163例樣本中，出現異型淋巴細胞141例、原幼淋巴細胞5例、異常細胞6例、幼稚粒細胞8例、漿細胞2例、幼紅細胞1例。可見PMS60檢測的ALY主要是異型淋巴細胞，而健康人血液中偶見異型淋巴細胞一般不超過2%[4]。另外，PMS60提示ALY的準確度、敏感性及特異性都比較高(依次為 89.7%、96.3%、85.3%)。因此，PMS60對ALY的比例和絕對值設定的陽性閾值分別為2%和0.2×109/L，而且需在ALY比例 ＞2.5%和/或 ALY 絕對值 ＞0.25×109/L時儀器才會出現ALY報警信息，此方案是可行的，此時進行顯微鏡分類也是必要的。

儀器的設計原理保證了儀器檢測結果的敏感性和穩定性[5]，用血液分析儀進行全血細胞分析，總希望有較高的定量檢測敏感性以避免漏檢，但這勢必會帶入假陽性。血液分析儀對全血細胞進行分析，不是由細胞核、細胞漿、細胞膜結構的整體差異來鑒別細胞，因此不可避免存在干擾因素而產生一定的誤差。雖然血液分析儀可以大大提高工作效率，可信度也較高，但是如果完全依靠儀器檢測結果，不加以分析和復查直接發出報告，會向臨床發出一定數量的錯誤報告，造成誤診或導致不合理治療[6]。因此，根據國際血液學復審協作組制定41條規則和國際血液學復審協作組認為5%是保證患者檢測結果安全的最大可接受的假陰性率和儀器識別能力及參數[7]，對PMS60制訂合適的復檢標準是必要的。本研究顯示，當PMS60提示ALY陽性標準制訂為ALY比例＞2.5%和/或 ALY 絕對值 ＞0.25×109/L 時，其陽性預測值和陰性預測值都比較高(分別為81.3%、97.2%)，約登指數為 0.82(理想值為1)，準確度為89.7%(理想值為100%)。因此，PMS60的ALY陽性判斷標準是可信的。

綜上所述，PMS60對ALY具有較高的敏感性及較強的識別能力。在保證儀器正常使用情況下，當有ALY比例＞2.5%和/或ALY絕對值＞0.25×109/L時，必須進行顯微鏡分類。

[1]叢玉隆，樂家新，袁家穎.實用血細胞分析技術與臨床[M].北京:人民軍醫出版社，2011:152-207.

[2]張 蕾，汪 嘉，李 智，等.XE-2100血液分析儀異常細胞警示標志的實際應用[J].檢驗醫學，2010，25(11):837-840.

[3]張時民.五分類法血細胞分析儀測定原理和散點圖特征[J].中國醫療器械信息，2008，14(12):1-9.

[4]汪 華，劉興態，曾 蓉.外周血異型淋巴細胞檢出情況分析[J].實用醫技雜志，2006，13(16):2808-2809.

[5]叢玉隆，樂家新.現代血細胞分析技術與臨床[M].北京:人民軍醫出版社，2005:181-200.

[6]孫 芾，王厚芳，于俊峰，等.血細胞顯微鏡復檢標準的制定及臨床應用[J].中華檢驗醫學雜志，2005，28(2):155-157.

[7]叢玉隆，王昌富，樂家新.血細胞自動化分析后血涂片復審標準制定的原則與步驟[J].中華檢驗醫學雜志，2008，31(7):729-732.