VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的表達與胃癌淋巴結轉移的關系

高會霞 王彬 周希山

VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的表達與胃癌淋巴結轉移的關系

高會霞 王彬 周希山

目的 觀察血管內皮生長因子-C(VEGF-C)及其受體VEGFR-3與神經細胞黏附分子-接觸蛋白-1(contactin-1,CNTN-1)在胃癌組織中的表達情況，并分析其與胃癌淋巴結轉移和其臨床病理參數間的關系。方法 56例胃癌患者按淋巴結轉移情況分成：實驗組(淋巴結轉移陽性患者34例)和對照組(淋巴結轉移陰性患者22例)。對所有腫瘤組織標本行免疫組化染色檢測VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的表達，分析三者之間的關系及其與臨床病理特征之間的關系。結果 實驗組：VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的陽性表達率分別為67.64%、82.35%及76.47%。對照組：VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的陽性表達率分別為:40.91%、50.00%及45.45%。CNTN-1的表達與VEGF-C(P<0.05)及VEGFR-3表達(P<0.05)存在明顯相關性。三者的表達與TNM分期和淋巴結轉移均有關(均P<0.05)。結論 VEGF-C、VEGFR-3和CNTN-1三者均在胃癌組織中高表達。三者的表達情況與腫瘤的淋巴結轉移和TNM分期關系密切。而且認為VEGF-C促進胃癌的淋巴管生成和淋巴結轉移有可能是通過CNTN-1通路介導的。

胃癌；血管內皮生長因子；接觸蛋白-1

胃癌的治療手段是手術，腫瘤淋巴道轉移是術后死亡的主要原因。研究發現血管內皮生長因子-C(VEGF-C)和其受體VEGFR-3的表達與腫瘤的淋巴管生成和淋巴結轉移密切相關[1]。本課題應用免疫組化方法檢測VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的表達與胃癌淋巴結轉移的關系，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本組56例標本系本院胃腸外科2010年1月～2012年6月期間接受胃癌根治術患者的胃癌組織標本，男性37例，女性19例；年齡32～76歲，中位年齡61歲。按1997年國際抗癌聯盟標準行TNM分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期14例，Ⅲ期32例。腫瘤大小按腫瘤原發灶的最長徑判斷，介于1.0～9.2 cm之間，中位值5.1 cm。淋巴結轉移陽性者34例，淋巴結轉移陰性者22例。術中所取標本均經病理學證實。

1.2 試劑 兔抗人VEGFR-3多克隆抗體、兔抗人CNTN-1多克隆抗體、羊抗人VEGF-C多克隆抗體均購于英國Abcam公司；DAB顯色劑和免疫組化鏈球菌親和素-生物素-過氧化酶復合物法(SABC)試劑盒購于美國Santa Cruz公司。

1.3 實驗方法 所有標本均制成4 μm厚的連續切片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫水，然后置于新鮮配制的0.3%的過氧化氫溶液浸泡，蒸餾水沖洗后用枸櫞酸鈉緩沖液浸泡，微波修復，PBS沖洗，血清封閉，加稀釋后的一抗4℃孵育過夜，再加生物素化二抗室溫孵育0.5 h，PBS沖洗，加SABC試劑室溫放置0.5 h，再次PBS沖洗，DAB顯色，蒸餾水沖洗蘇木素復染，鹽酸酒精分化。最后脫水、透明、封片、鏡檢。陽性對照為試劑公司提供的陽性切片，PBS替代一抗行陰性對照染色。

1.4 統計學方法 用SPSS 17.0軟件行統計學處理。用χ2檢驗分析VEGF-C、VEGFR-3和CNTN-1蛋白的表達與胃癌臨床病理特征之間的關系，r相關分析法判斷三者間的相關性。檢驗水準α=0.05。

2 結果

實驗組：VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的陽性表達率分別為67.64%、82.35%及76.47%。對照組：VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1的陽性表達率分別為:40.91%、50.00%及45.45%。CNTN-1的表達與VEGF-C(P<0.05)及VEGFR-3表達(P<0.05)存在明顯相關性，見表1。三者的表達與TNM分期和淋巴結轉移均有關(均P<0.05)。

表1 實驗組和對照組VEGF-C、VEGFR-3及CNTN-1陽性率比較

3 討論

惡性腫瘤細胞具有異質性。研究發現VEGF-C在腫瘤的淋巴管形成中起了重要作用，參與了腫瘤細胞的播散和區域淋巴結的轉移[2]。國內學者認為檢測VEGF-C的表達可作為甲狀腺乳頭狀癌[3]和乳腺癌[4]發生淋巴結轉移的預測指標。Wang等研究發現其特異性受體VEGFR-3參與了新生淋巴管的形成，腫瘤細胞的浸潤和遠處轉移[5]。近年來，通過基因芯片技術分析侵襲性的肺癌細胞基因表達的差異性，發現CNTN-1是與腫瘤侵襲相關的基因。CNTN-1在胃癌組織中高表達， r相關分析發現，CNTN-1與VEGF-C/VEGFR-3軸之間存在顯著相關性。

本研究發現，VEGF-C/VEGFR-3軸在胃癌組織的淋巴管生成和淋巴轉移過程中具有重要作用。同時，CNTN-1蛋白表達還與VEGF-C及VEGFR-3蛋白表達相關，提示CNTN-1或許是VEGF-C/VEGFR-3軸作用通路上的一個重要分子，可能參與了腫瘤的淋巴管生成及淋巴結轉移，這一過程的具體機制，需要以后更深層次的研究。

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461000河南省許昌市中心醫院(高會霞 王彬);漯河市第五人民醫院(周希山)