HPLC測定不同批次藏茵陳膠囊中齊墩果酸的含量

王有明

(青海魯抗大地藥業(yè)有限公司，青海 西寧 810000)

藏茵陳為傳統(tǒng)藏藥，其主要功能為清熱消炎、利膽退黃，主治各種熱病，尤其對肝膽實(shí)熱性疾病具有獨(dú)特療效［1－2］。藏茵陳膠囊的原料主要為川西獐牙菜 Swertia mussotii Fracnch，川西獐牙菜分布在青海、云南、四川、西藏等地。生長于海拔3500～3900m的山坡、河灘地中。全草入藥;清肝利膽，退諸熱［3］。本文采用超聲提取法對藏茵陳膠囊中齊墩果酸進(jìn)行提取，采用HPLC對不同批次藏茵陳膠囊中齊墩果酸進(jìn)行了含量測定。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1．1 儀器與試劑:Agilent高效液相色譜儀;G1379A在線脫氣機(jī);G1311A四元泵;G1329A標(biāo)準(zhǔn)型自動進(jìn)樣器;G1316A柱溫箱;Agilent1200色譜工作站;AG204電子分析天平;超聲提取儀。

齊墩果酸對照品(110709－200505，中國藥品生物制品檢定所);乙腈(色譜純，山東禹王試劑公司);水為純凈水，其余試劑為分析純。實(shí)驗(yàn)中藏茵陳膠囊為青海魯抗大地藥業(yè)有限公司提供。

1．2 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn):色譜柱Agilent C8柱(250 mm ×4．6 mm，5μm);流動相:乙腈 － 水(80:20，v/v);流速為1．0 mL/min，柱溫:40 ℃;檢測波長:210 nm;理論塔板數(shù)按齊墩果酸峰計(jì)算不低于3000。

1．3 對照品溶液的制備:精密稱取齊墩果酸對照品4．08mg置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解，稀釋至刻度，搖勻，得到濃度為0．408 mg/mL－1的齊墩果酸對照品溶液，過0．45μm的微孔濾膜過濾后作為對照品溶液，對照品色譜圖如圖1。

1．4 供試品溶液的制備:取藏茵陳膠囊內(nèi)容物約0．8g，精密稱定，置100 mL平底燒瓶中，加入30 mL80%乙醇，置于超聲提取儀中，超聲提取20 min，冷卻至室溫，濾過，濾液收集到50mL的容量瓶中，用80%乙醇定容至刻度，搖勻后，0．45μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液，供試品色譜圖如圖2。

圖1 齊墩果酸對照品色譜圖

圖2 齊墩果酸對照品色譜圖

(其中A為齊墩果酸)

2 結(jié)果與討論

2．1 線性關(guān)系考察:分別精密吸取上述對照品溶液2，4，6，8，10μL，在上述色譜條件依次進(jìn)樣，以進(jìn)樣的對照品含量(X)為橫坐標(biāo)，相當(dāng)應(yīng)峰面積(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為:Y=384．3X －0．4，r=0．9999。

2．2 精密度實(shí)驗(yàn):分別精密吸取上述對照品溶液8μL，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄齊墩果酸的峰面積與出峰時間。計(jì)算得到峰面積RSD為0．25%，峰時間RSD為1．24%。表明儀器精密度良好。

2．3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn):按樣品溶液制備方法處理同一藏茵陳膠囊樣品5份，批號為20100801，各吸取10μL，按上述色譜條件測定，記錄齊墩果酸的峰面積。計(jì)算出齊墩果酸含量，計(jì)算RSD為0．83% ，表明實(shí)驗(yàn)方法的重復(fù)性良好。

2．4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn):按樣品溶液制備方法處理樣品批號為20100801 藏茵陳膠囊，分別在h，5h，10h，15h，20h，24h，按上述色譜條件測定，記錄齊墩果酸的峰面積，計(jì)算樣品中齊墩果酸含量。結(jié)果表明，計(jì)算齊墩果酸峰峰面積穩(wěn)定，計(jì)算RSD為0．26%，表明樣品溶液至少在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2．5 加樣回收率實(shí)驗(yàn):采用加樣回收法，精密稱取已知含量的藏茵陳膠囊適量，批號為藏茵陳膠囊20120301，分別精密加入一定量的齊墩果酸對照品，在上述色譜條件下，平行做5組，結(jié)果測得其平均回收率為101．7%，RSD為1．55%。數(shù)據(jù)見表1。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

2．6 樣品測定:按樣品溶液制備方法處理10批，按上述色譜條件測定，記錄齊墩果酸的峰面積。計(jì)算出齊墩果酸含量，數(shù)據(jù)見表2。

表2 藏茵陳膠囊中齊墩果酸的含量

3 討論

本實(shí)驗(yàn)流動相采用乙腈:水(80:20，v/v)，該方法能夠使藏茵陳膠囊中的齊墩果酸得到較好的分離效果，而且出峰快，時間短，峰對稱性好?，F(xiàn)用藥典測定藏茵陳膠囊中齊墩果酸含量方法是采用“薄層掃描法”，液相方法測定藏茵陳中齊墩果酸含量準(zhǔn)確方便，為藏茵陳膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供了理論依據(jù)。

本實(shí)驗(yàn)測定了10批藏茵陳膠囊中齊墩果酸的含量，藏茵陳膠囊中齊墩果酸的含量均高于藥典中規(guī)定的含量，說明這10批藏茵陳膠囊符合國家藥典要求。

［1］中國科學(xué)院西北高原生物研究所．青海經(jīng)濟(jì)植物志［M］．青海，西寧:青海人民出版社1987．646

［2］楊永昌．藏藥志［M］．青海人民出版社，1991，III

［3］中國科學(xué)院西北高原生物研究所．藏藥志(修訂版)［M］．第3版．西寧:青海人民出版社，1996，114－116