999精品在线视频,手机成人午夜在线视频,久久不卡国产精品无码,中日无码在线观看,成人av手机在线观看,日韩精品亚洲一区中文字幕,亚洲av无码人妻,四虎国产在线观看 ?

Taq DNA聚合酶的制備和純化

2013-09-04 03:40:14詹慶才詹祎捷劉之熙朱克永
湖南農業科學 2013年13期

詹慶才,詹祎捷,劉之熙,朱克永

(1.湖南省水稻研究所,湖南 長沙 410125;2.北京聯合大學應用文理學院,北京 100083)

PCR技術被廣泛應用于分子生物學、食品科學、醫學等相關研究領域。作為PCR技術的主要試劑的Taq DNA聚合酶用量日益增多。而目前大多數實驗室主要依賴公司商品化的Taq DNA聚合酶。為了降低研究和開發成本,一些實驗室利用不同的分離純化方法生產Taq DNA聚合酶[1-4]。湖南省水稻研究所生物技術室利用含Taq DNA聚合酶基因的p Taq表達質粒轉化大腸桿菌E.coli菌株,誘導表達耐熱Taq DNA聚合酶,然后提取純Taq DNA聚合酶,并用考馬斯亮藍法和PCR分析其純度、濃度和活性。該技術旨在制備Taq DNA聚合酶,降低分子生物學實驗成本。

1 材料與方法

1.1 材 料

含Taq酶基因的載體p Taq由中國科學院遺傳與發育研究所提供,氨芐青霉素(Amp)、溶菌酶、苯甲基磺酰氟(PMSF)、異丙基硫代-b-D-半乳糖苷(IPTG)、Taq DNA 聚合酶、DNA Marker等生物化學試劑購自鼎國生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 外源基因在大腸桿菌中的表達 取出菌種,將少許的冰凍菌種培養物在LB平板(含Amp100 mg/mL)上劃線,37℃培養 16~20 h。挑取單菌落接種到6 mL含100 mg/mL氨芐青霉素的LB培養基中,37℃振蕩培養過夜;用1.25 mL過夜培養的菌種接種到250 mL的LB液體搖瓶中(Amp終濃度為100 mg/mL),37℃培養4.5 h;在總量1 000 mL的培養液中加入120 mg的IPTG誘導(終濃度為0.5 mmol/L)。培養液在37℃,繼續培養16~20 h。

1.2.2 重組Taq DNA聚合酶的提取 3 000 g離心20 min收集菌體,每1 000 mL菌液離心后加入60 mL(30 mL×2)溶液 A(50 mmol/L Tris-HCl pH值 8.0;50 mmol/L Dextrose (glucose);1 mmol/L EDTA)中重懸;將收集菌體洗,7 000 g離心10 min重新收集菌體。菌體再懸在40 mL(20 mL×2)溶液A中,混勻。加入終濃度為4 mg/mL的lysozyme(Sigma),室溫(25℃)放置 15 min。加入 40 mL的溶液B(10 mmol/L Tris-HCl pH值 8.0;50 mmol/L KCl;1 mmol/L EDTA (pH 值 8.0);1 mmol/L PMSF;0.5%Tween 20;0.5%NP-40),75℃水浴保溫1 h,期間要晃動幾次。4℃,10 000 g離心20 min重新收集上清液。……

登錄APP查看全文

主站蜘蛛池模板: 国产中文一区a级毛片视频| 最新国产高清在线| 波多野结衣AV无码久久一区| www亚洲天堂| 中文毛片无遮挡播放免费| 2021国产乱人伦在线播放 | 亚洲国产中文欧美在线人成大黄瓜 | 有专无码视频| 国产区在线看| 亚洲AV无码乱码在线观看裸奔| 91在线日韩在线播放| 国产成年女人特黄特色毛片免| 欧美A级V片在线观看| 久久99久久无码毛片一区二区| 精品国产成人三级在线观看| 欧美成人h精品网站| 久久精品中文字幕少妇| 欧美a网站| 色偷偷一区二区三区| 国产精选小视频在线观看| 亚洲成A人V欧美综合| 亚洲乱码视频| 五月天在线网站| 亚洲愉拍一区二区精品| 午夜福利无码一区二区| 在线观看无码av免费不卡网站| 国产精品免费电影| 91口爆吞精国产对白第三集| 日韩欧美综合在线制服| 国产香蕉一区二区在线网站| 99视频在线免费看| 久久久波多野结衣av一区二区| 久久久久久久蜜桃| 最新亚洲人成网站在线观看| 久久精品人妻中文系列| 久久亚洲天堂| 99这里只有精品在线| 强乱中文字幕在线播放不卡| 国产自视频| 亚洲品质国产精品无码| 国产69囗曝护士吞精在线视频| 永久免费av网站可以直接看的 | 国产成人区在线观看视频| 亚洲va视频| 青草精品视频| 久久久91人妻无码精品蜜桃HD| 毛片免费在线视频| 国产福利在线观看精品| 国产乱人免费视频| 欧美一道本| 国产精品亚洲五月天高清| 久久精品aⅴ无码中文字幕| 91亚洲精品国产自在现线| 无码AV日韩一二三区| 国产精品一区在线麻豆| 国产女人在线| 精品一区二区三区中文字幕| 成人午夜天| 超碰免费91| 国产亚洲精品无码专| 亚洲精品国产首次亮相| 久久a毛片| 国产精品性| 欧美色综合久久| 久久亚洲欧美综合| 亚洲欧美另类中文字幕| 四虎精品国产AV二区| 欧美午夜一区| 亚洲欧美另类日本| 一本久道久综合久久鬼色| 亚洲一级毛片免费观看| 久久久噜噜噜久久中文字幕色伊伊 | 欧美激情,国产精品| 无码视频国产精品一区二区| 日韩午夜片| 亚洲第一成网站| 亚洲第一中文字幕| 国产成人综合久久精品下载| 日本不卡免费高清视频| 免费亚洲成人| 国产无码精品在线播放| 成人日韩欧美|