趨化因子配體18在乳腺癌組織中的表達及意義

張曉申，高 進，鄭文博，葉熹罡，唐 煒，陳 倫，潘凌霄，李 君

(廣州醫學院第一附屬醫院乳腺外科1、肝膽外科2，廣東 廣州 510120)

趨化因子配體18(Chemokine CC-motif ligand 18，CCL18)屬CC族趨化因子，主要由M2型單核細胞分泌[1]。CCL18參與各種慢性炎癥和纖維化疾病的發生發展，包括Gancher病和類風濕關節炎[2-3]。另外，在卵巢癌、胃癌組織中可觀察到CCL18的表達[4-5]。然而，CCL18在惡性腫瘤進展中的作用還存在爭議。CCL18參與卵巢癌的免疫抑制[5-6]，而在胃癌患者中，CCL18卻起著局部抗腫瘤免疫調節的作用[4]。雖然M2型巨噬細胞大量存在于乳腺癌組織中，但由其產生的CCL18因子在乳腺癌進展中的作用仍不清楚。本研究通過檢測乳腺癌組織、良性乳腺病組織和正常乳腺組織CCL18的表達情況，并分析其與乳腺癌患者的臨床病理特征的關系，如腫瘤大小、分期、淋巴結轉移及Ki67，探討CCL18在乳腺癌組織的表達意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選取廣州醫學院第一附屬醫院乳腺外科2009年12月至2012年6月，病理診斷為乳腺癌的患者80例(包括導管原位癌8例，浸潤性導管癌72例)，年齡35～68歲，中位年齡41歲；選取病理診斷為良性乳腺病患者40例(包括：乳腺纖維腺瘤16例，導管內乳頭狀瘤7例，纖維囊性乳腺病17例)，年齡31～46歲，中位年齡38歲。再取20例良性乳腺病患者病灶周邊的正常乳腺組織作為對照組。全部入組病例為女性。

1.2 主要試劑 免疫組化試劑盒EnVisionTMDetection Kit(DAKO公司，美國)、CCL18抗體為兔抗人多抗(Abcam公司，英國)，鼠抗人Ki67單抗免疫組人試劑盒(上海麥莎生物科技有限公司)。

1.3 免疫組化EnVision法檢測 將制作好的病理切片于67℃烤箱烤片1 h后脫蠟至水。CCL18、Ki67切片采用微波(15 min)修復抗原。CCL18的抗體稀釋濃度為1：200。后續步驟按EnVisionTMDetection Kit說明書進行。Ki67切片用SP法進行檢測。

1.4 結果判定 CCL18判定標準：根據Chen等[7]的報道方法，以顯微鏡下棕黃色胞漿染色細胞為陽性反應，計數全視野內陽性細胞數。Ki67陽性細胞為胞核著色，取任意5個高倍鏡視野，以陽性細胞所占細胞總數的平均值作為Ki67陽性率，參考Aleskandarany等[8]的研究將其分為3個等級：陽性細胞數＜10%為弱陽性(+)，10%～50%為陽性(++)，＞50%為強陽性(+++)。均由兩位病理科醫師獨立閱片，當結果不同時，取平均值為最終結果。

1.5 統計學方法 應用SPSS16.0統計軟件對數據進行統計分析，分類計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三組中CCL18的表達 CCL18在對照組、良性乳腺病組均無表達，在乳腺癌組有57例為陽性表達，陽性率為71.25%；CCL18在乳腺癌組的表達明顯升高，差異有統計學意義(χ2=72.108，P＜0.001)，見表1。

表1 三組中CCL18的表達(例)

2.2 乳腺癌組CCL18的表達及其與腫瘤大小、分期、淋巴結轉移、Ki67的關系 CCL18的表達與腫瘤的大小、病理分期、淋巴結轉移個數呈正相關，差異均有統計學意義(P＜0.05)，而與Ki67的表達相關性不顯著，見表2。

表2 CCL18在乳腺癌組的表達與腫瘤大小、分期、淋巴結轉移、Ki67的關系(例)

3 討論

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，主要死亡原因是術后復發及轉移，其發生發展是一個復雜的有多種生物學指標參與的過程。研究發現，乳腺癌的侵襲性與腫瘤微環境密切相關，而腫瘤微血管、炎癥細胞、趨化因子是腫瘤微環境的重要組成部分[9-12]。趨化因子是由不同類型細胞分泌的能使細胞發生趨化運動的低分子能量細胞因子，具有廣泛的生物學作用。除了在炎癥過程中可特異性激活和募集白細胞外，還可通過改變腫瘤細胞生物學行為和激活腫瘤微環境中基質干細胞(如血管內皮細胞、腫瘤相關巨噬和成纖維細胞)，促進腫瘤的生長和轉移[13-15]。CCL18基因定位于染色體17q11.2，不僅參與機體的免疫應答，還在多種腫瘤的發生中扮演著重要的角色。Chen等[7]研究發現，在乳腺癌組織中存在M2型單核細胞，位于腫瘤細胞浸潤的前沿組織，且表達CCL18。而在本研究中，CCL18在乳腺癌組織中的表達比在良性乳腺疾病組織及正常乳腺組織中明顯升高，且與腫瘤的大小、臨床分期、淋巴結轉移成正比，表明CCL18有可能成為一種新的乳腺癌生物學指標，并在一定程度上可以反映乳腺癌的侵襲性與轉移，與Chen等[7]觀察到的一致。

1983年Gerdes等[16]發現了Ki67與細胞增殖相關的核抗原。其表達隨細胞周期的變化而變化，能反映腫瘤的增殖活性，是公認的細胞增殖活性標志物。作為一種與增殖細胞相關的核抗原，Ki67抗原與惡性腫瘤的發展與轉移關系密切[17]，高表達時易出現乳腺癌淋巴結轉移[18]，且與乳腺癌臨床分期密切相關，其陽性率隨臨床分期的遞增而增加明顯[19]。Narita等[20]研究發現CCL18在乳腺癌患者血漿中的濃度與Ki67的表達呈正相關，但Chen等研究[7]發現，CCL18在乳腺癌組織中的表達與Ki67的表達相關性不顯著。在本研究中，在乳腺癌組織CCL18的表達與Ki67的相關性不明顯，這表明CCL18與乳腺癌細胞的侵襲力相關，而與乳腺癌細胞的增殖活性無關。

綜上所述，CCL18可作為一種新的乳腺癌生物學指標，其高表達表明乳腺癌侵襲性強，容易發生轉移，但與腫瘤細胞的增殖活性無關，對判斷乳腺癌的預后有指導意義。

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