衍生氣相色譜法測定甲磺酸伊馬替尼中甲磺酸烷基酯類

連小剛 李孝壁 程紅艷

江蘇豪森醫(yī)藥研究院有限公司，江蘇連云港 222000

甲磺酸伊馬替尼（imatinib mesylate）化學名稱為4-[（4-甲基-1-哌嗪）甲基]-N-[4-甲基-3-[4-（3-吡啶）-2-嘧啶]氨基]苯基]-苯胺甲磺酸鹽，是一種高效特異的酪氨酸激酶抑制劑[1]。在合成工藝中用到甲醇、異丙醇，片劑生產中用到乙醇溶劑，在生產過程中，有可能與甲磺酸產生具有基因毒性的甲磺酸烷基酯類：甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸異丙酯[2-3]。

近幾年基因毒性雜質成為人們關注的焦點[4]，甲磺酸、苯甲磺酸等磺酸類物質與微量的低級醇在合成反應中生成烷基磺酸酯如甲磺酸甲酯（MMS）、甲磺酸乙酯（EMS）、異丙基甲磺酸酯（IMS）、正丁基甲磺酸酯（NBMS）[5]，以及芳基磺酸酯如苯磺酸甲酯（MBS）、苯磺酸乙酯（EBS）、對甲苯磺酸酯（MP-TS），這些物質可與DNA發(fā)生烷基化反應[6-7]，從而可能成為引發(fā)癌癥的誘因，因此控制藥物中該類雜質的毒理學關注閾值（TTC）水平非常重要[8-9]，歐洲醫(yī)藥評價署（EMEA），美國食品和藥物管理局（FDA）及國際藥品注冊協(xié)調會議（ICH）先后對基因毒性雜質做出限度規(guī)定。

由于本品中甲磺酸烷基酯類的限度在中國藥典沒有規(guī)定，有必要對樣品中的甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯和甲磺酸異丙酯的殘留量進行檢測，本方法參考歐洲藥典，采用衍生化的方法[10]，通過檢測碘甲烷、碘乙烷和2-碘丙烷來確定甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯和甲磺酸異丙酯的量。

1 儀器與試劑

儀器：電子分析天平，梅特勒XS105；Agilent 7890 GC氣相色譜儀，頂空進樣器G1888；安捷倫色譜工作站；色譜柱：ZB-WAX（30m×0.53mm×1.0μm）。試劑：甲醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯、異丙醇均為分析純是國藥集團化學試劑股份有限公司。

2 試驗過程與結果

2.1 色譜條件

按照氣相色譜法（中國藥典2010年版二部 附錄Ⅴ E），用聚乙二醇20M交聯聚合物為固定相（或極性相似）的毛細管柱（ZB-WAX 30m×0.53mm×1.0μL），氫火焰離子化（FID）檢測器，進樣口溫度110℃；檢測器溫度260℃；柱溫40℃維持10min，以每分鐘20℃的升溫速率升至160℃維持3min；頂空瓶平衡溫度為80℃，平衡時間為30min。取對照品溶液與供試品溶液分別頂空進樣，進樣體積3mL，記錄色譜圖，按碘甲烷、碘乙烷、2-碘丙烷的出峰順序；按外標法以峰面積計算。

2.2 試驗溶液配制

供試品溶液配制：取本品適量，精密稱定，按供試品與乙腈100︰1（mg︰mL）的比例配置供試品溶液，溶液經超聲、薄膜過濾處理后，精密移取2mL加入頂空瓶中，加入3mL水、6g碘化鈉后，扎蓋密閉，作為供試品溶液。

對照品溶液配制：取甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸異丙酯適量，精密稱定，用乙腈制成每毫升含甲磺酸甲酯10μg、甲磺酸乙酯10μg、甲磺酸異丙酯10μg的溶液，精密移取2mL加入頂空瓶中，加入3mL水、6g碘化鈉后，扎蓋密閉，作為對照品溶液。

2.3 系統(tǒng)專屬性試驗

精密稱取甲磺酸甲酯99.2mg、甲磺酸乙酯102.8mg、甲磺酸異丙酯104.8mg分別置100mL量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，標記為 1#、2#、3# 溶液。

分別移取1#、2#、3#溶液各1mL分別置100mL量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，標記為4#、5#、6#液。

分別移取1#、2#、3#溶液各1mL置100mL量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，作為對照品溶液，標記為7#液。

分別精密移取4#、5#、6#、7#液各2mL分別置入頂空瓶中，并分別加入3mL的水、6g的碘化鈉，扎蓋密閉，分別標記為A甲磺酸甲酯衍生化測試液、B甲磺酸乙酯衍生化測試液、C甲磺酸異丙酯衍生化測試液、D對照品溶液，分別進樣A、B、C、D溶液，記錄色譜圖。從表1可見，被測溶劑各峰的保留時間與對照品中各峰保留時間接近，最小分離度為3.1，符合實驗要求，表明各溶劑的專屬性強，專屬性色譜圖見圖1。

圖1 專屬性氣相色譜圖

表1 專屬性

2.4 定量限與檢測限

精密稱取甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸異丙酯適量，置100mL量瓶中，用乙腈溶解制成溶液，作為儲備液。逐步稀釋儲備液，進行樣品衍生化，并分別進樣至信噪比（峰高/基線噪聲）為3左右為檢測限，至信噪比為10左右為定量限，結果見表2。由表2可見，該檢測方法最小可準確檢測0.6ppm的量，表明本方法對碘甲烷、碘乙烷、2-碘丙烷可以準確定量檢測。

表2 定量限與檢測限

2.5 線性關系試驗

精密稱取甲磺酸甲酯100.1mg、甲磺酸乙酯103.3mg、甲磺酸異丙酯107.8mg，分別置100mL量瓶中，用乙腈稀釋定容。各移取上述溶液1mL置5mL量瓶中，用乙腈稀釋至刻表度作為貯備液；分別精密移取貯備液0.3、0.6、0.9、1.2mL分別置于20mL量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為2#、3#、4#、5#液。移取上述溶液各2mL分別置入頂空瓶中，并分別加入3mL水、6g碘化鈉，扎蓋密閉，平行制備2份。分別進樣上述溶液，平行2次進樣，取峰面積的平均值與相應濃度回歸，實驗數據記錄及線性回歸方程見表3。

表3可見，甲磺酸甲酯在0.0721～12.0μg/mL、甲磺酸乙酯在0.0604～12.4μg/mL、甲磺酸異丙酯0.0679～12.9μg/mL的范圍內，線性相關系數皆不小于0.999，說明線性良好。線性方程及相關系數見表3。

表3 回歸方程及相關系數

2.6 回收率

精密稱取甲磺酸甲酯101.3mg、甲磺酸乙酯100.8mg、甲磺酸異丙酯102.3mg置100mL量瓶，乙腈稀釋至刻度，作為儲備液。取供試品約300mg，置頂空瓶中精密稱定，共稱9份，用儲備液進行配置成限量2、30、100ppm的測試液，置入頂空進樣器中，定量測定的6個溶劑的平均回收率介于94.1%～111.3%之間，各溶劑回收率的最大相對標準偏差RSD為5.79%，表明本方法的準確性較好。

由表4可見，定量測定的甲磺酸烷基酯的平均回收率界于94.1%～111.3%之間，回收率的RSD最大為5.79%，表明本方法的準確性很好。

表4 精密度和準確度實驗結果（n=6）

3 討論

在前期預實驗回收率測試時發(fā)現，在衍生化過程中，樣品與碘化鈉也發(fā)生衍生化反應，干擾甲磺酸酯的檢測，影響碘代烷的收率，因此，采用與樣品不溶而與甲磺酸烷基酯易溶的乙腈溶劑，對樣品中的甲磺酸烷基酯進行超聲、萃取。

本研究建立了衍生氣相色譜法測定甲磺酸伊馬替尼中的基因毒性雜質甲磺酸烷基酯類的檢測方法，該方法專屬性好。對檢測限、定量限的測定，說明此方法具有較高的靈敏度，此外，該方法線性與范圍良好、準確度好，能對樣品中的基因毒性雜質甲磺酸烷基酯類化合物進行很好的控制。

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