奶牛產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶原因分析

文/許紅巖

（內(nèi)蒙古伊利實業(yè)集團股份有限公司）

β-內(nèi)酰胺是抗生素的一種。β-內(nèi)酰胺酶則是由多種酶組成的酶家族，能水解β-內(nèi)酰胺類抗生素。但主要成分為β-內(nèi)酰胺酶的“生鮮牛乳抗生素分解劑”是國家明令禁止添加的非食用物質(zhì)。資料表明，β-內(nèi)酰胺類獸藥在養(yǎng)殖環(huán)節(jié)中的廣泛使用和致病菌的變遷是導(dǎo)致細菌產(chǎn)生內(nèi)源性β-內(nèi)酰胺酶的原因。如何區(qū)分β-內(nèi)酰胺酶是細菌內(nèi)源性代謝產(chǎn)生，還是非法添加行為，至今尚無定論。目前生鮮乳中β-內(nèi)酰胺酶的檢出無強制性國家標準，缺乏成熟的標準檢測方法，致使β-內(nèi)酰胺酶成為生鮮乳監(jiān)管中的一個盲點和隱患。

為進一步證實奶牛是否能夠產(chǎn)生內(nèi)源性β-內(nèi)酰胺酶，個體奶樣中是否能夠檢測出β-內(nèi)酰胺酶，特在3 家牧場47 頭奶牛中進行了試驗，取得了一定量的試驗數(shù)據(jù)，現(xiàn)將試驗結(jié)果進行統(tǒng)計和分析，以供參考。

1 試驗判定依據(jù)

衛(wèi)生部下發(fā)的杯碟法檢測β-內(nèi)酰胺酶的方法（試行）。

1.1 檢測原理

杯碟法采用青霉素類藥物絕對敏感的標準菌株，利用舒巴坦特異性抑制β-內(nèi)酰胺酶的活性，并加入青霉素作為對照，通過對比加入β-內(nèi)酰胺酶抑制劑與未加入β-內(nèi)酰胺酶抑制劑的樣品所產(chǎn)生的抑制圈的大小間接測定樣品中是否含有β-內(nèi)酰胺酶類藥物。

1.2 判定標準

抑菌圈大小差異＞3 mm，判定為內(nèi)酰胺酶陽性（圖1）。圖1中，A圈-B圈＞3，判定內(nèi)酰胺酶陽性；C、D圈為對照試驗組。

圖1 杯碟法對β-內(nèi)酰胺酶的檢測結(jié)果

1.3 檢測方法的影響因素

1.3.1 由于細菌會產(chǎn)生內(nèi)源性β-內(nèi)酰胺酶，所以奶樣被細菌污染后，β-內(nèi)酰胺酶檢測陽性概率較大。結(jié)果顯示，有23 份奶樣β-內(nèi)酰胺酶呈陽性。酒精試驗結(jié)果顯示，奶樣全部酸敗。

1.3.2 獸藥的成分。如果藥品中人為加入β-內(nèi)酰胺酶，藥物在機體中的代謝產(chǎn)物會對檢測結(jié)果有影響。

2 方法

2.1 患病奶牛使用“無抗藥品”試驗

2.1.1 選取16 頭患有乳房炎的奶牛，其中15 頭為隱性乳房炎，1 頭為臨床型乳房炎。

2.1.2 對患病奶牛使用6 種無抗藥品，具體如表1所示。

2.1.3 對所選取的患病奶牛，采用購買的無抗藥品進行治療，用藥8～12 h后對奶牛進行采樣，檢測牛奶是否含抗生素和β-內(nèi)酰胺酶。表2為用藥后β-內(nèi)酰胺酶的檢測結(jié)果。

2.1.4 將6 種藥物直接加到牛奶中檢測β-內(nèi)酰胺酶，其中2 種藥品β-內(nèi)酰胺酶檢測呈現(xiàn)陽性,藥物本身對檢測結(jié)果有影響（表3）。

2.1.5 試驗結(jié)果表明，使用標注無抗藥品后，牛奶能夠產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶，檢出率為43%。試驗過程中發(fā)現(xiàn)，奶牛的個體差異、胎次與β-內(nèi)酰胺酶的產(chǎn)生有直接關(guān)系。奶牛停止用藥1～5 天后，牛奶中β-內(nèi)酰胺酶檢測結(jié)果合格，沒有規(guī)律可循，這與機體對藥物吸收有直接關(guān)系。

表1 試驗中使用的6 種無抗藥品

表2 用藥后β-內(nèi)酰胺酶抑菌圈的檢測結(jié)果 單位：mm

表3 6 種藥物直接加到牛奶中后的β-內(nèi)酰胺酶檢測結(jié)果

2.2 奶牛使用抗生素藥物，在停藥期內(nèi)的試驗

2.2.1 試驗方法

選取28 頭用過抗生素藥物的奶牛，對奶牛用抗生素藥物，在停藥期內(nèi)，奶牛機體中無抗生素殘留，檢測牛奶中是否含有β-內(nèi)酰胺酶。

2.2.2 試驗結(jié)果

試驗結(jié)果表明，奶牛使用抗生素后，當機體中無殘留時，牛奶不會產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶。但經(jīng)常使用抗生素治療的奶牛，機體產(chǎn)生抗藥性后，在用藥過程中就容易產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶。因為抗生素的生化機制特點為：機體內(nèi)能夠產(chǎn)生使抗生素結(jié)構(gòu)改變的酶（即鈍化酶，包括β-內(nèi)酰胺酶），機體產(chǎn)生酶后直接與藥物作用，致使藥物失效，這也是導(dǎo)致抗生素藥物出現(xiàn)耐藥性的根本原因之一。這可以解釋在日常檢測過程中，出現(xiàn)抗生素牛奶中還存在抗生素分解酶的原因。

2.3 健康奶牛飼喂霉變飼料試驗

2.3.1 試驗方法

選取3 頭健康奶牛，飼喂霉變飼料，檢測牛奶中β-內(nèi)酰胺酶的變化情況，試驗周期為1 周。

2.3.2 試驗結(jié)果

試驗結(jié)果表明，飼喂霉變的秸稈，奶牛會產(chǎn)生黃曲霉毒素，黃曲霉毒素與青霉素根本不發(fā)生任何作用，所以牛奶不會產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶。但長期飼喂霉變的飼料，對奶牛的直接影響是：機體營養(yǎng)不均衡，奶牛出現(xiàn)酒精陽性乳，抵抗力降低，稍微受到外界環(huán)境因素影響，奶牛極易發(fā)生乳房炎。飼養(yǎng)方面導(dǎo)致的酒精陽性乳與細菌污染導(dǎo)致的酒精陽性乳有本質(zhì)區(qū)別，前者不會導(dǎo)致β-內(nèi)酰胺酶陽性，而后者很容易導(dǎo)致β-內(nèi)酰胺酶陽性。乳房炎牛奶本身的微生物就超標，所以會出現(xiàn)β-內(nèi)酰胺酶陽性，而腐敗的飼料短期不會導(dǎo)致牛奶中出現(xiàn)β-內(nèi)酰胺酶。

3 小結(jié)

奶牛用藥后能夠在機體中產(chǎn)生內(nèi)源性β-內(nèi)酰胺酶，如何區(qū)分β-內(nèi)酰胺酶是由內(nèi)源性代謝產(chǎn)生的，還是非法添加的，目前還無法判別。