5-氮-2'-脫氧胞苷逆轉(zhuǎn)膀胱癌細(xì)胞hepaCAM基因的表達(dá)及對(duì)其生長(zhǎng)的抑制

劉 琪，潘翠翠，徐 新，張彥懿，吳小候，羅春麗*

(重慶醫(yī)科大學(xué)1.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室重慶市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;2.附屬第一醫(yī)院泌尿外科，重慶400016)

腫瘤發(fā)生的分子機(jī)制主要有3種類型:基因突變、基因缺失和表觀遺傳學(xué)改變［1］。而表觀遺傳學(xué)改變又主要包括DNA甲基化、組蛋白乙?；徒M蛋白甲基化［2］。其中DNA甲基化改變分為全基因組水平的低甲基化和 CpG島 DNA高甲基化［3］;CpG島的異常高甲基化主要發(fā)生于抑癌基因啟動(dòng)子區(qū)域。故抑癌基因在腫瘤中的失活可歸結(jié)于其基因啟動(dòng)子區(qū)域CpG島的異常高甲基化。

DNA甲基化由DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMT)催化形成，是在不改變核酸序列的情況下，調(diào)節(jié)基因表達(dá)的不可逆過(guò)程［4］。5-氮-2'脫氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine，5-aza-CdR)是DNMT的抑制劑，可以逆轉(zhuǎn)抑癌基因的甲基化，使其重新表達(dá)［5］。在很多其他腫瘤研究中，例如結(jié)腸癌［6］、前列腺癌［7］等，5-aza-CdR都可在一定程度上逆轉(zhuǎn)抑癌基因的甲基化并抑制腫瘤生長(zhǎng)。肝細(xì)胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule，hepaCAM)，作為一個(gè)抑癌基因，在膀胱癌中表達(dá)低下，并且在體外研究中發(fā)現(xiàn)hepaCAM具有抑制膀胱癌生長(zhǎng)的作用［8－9］。因此，本研究以hepaCAM為出發(fā)點(diǎn)，探究5-aza-CdR是否也能逆轉(zhuǎn)hepaCAM基因在膀胱癌細(xì)胞中的表達(dá)，并與hepaCAM一起發(fā)揮抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

人膀胱癌細(xì)胞T24(重慶醫(yī)科大學(xué)傳染病研究所惠贈(zèng))，BIU-87細(xì)胞系(武漢大學(xué)細(xì)胞庫(kù))。5-aza-CdR、MTT試劑和二甲基亞砜(DMSO)(Sigma公司);RNA提取試劑盒Trizol和RT-PCR試劑盒(大連寶生物工程);PCR引物(Invitrogen公司);細(xì)胞培養(yǎng)基RPMI1640和新生牛血清(Gibco公司);細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑(重慶醫(yī)科大學(xué)兒研所流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室提供)?！?br>