非小細胞肺癌組織中ERCC1和RRM1表達與抗腫瘤治療的療效及預后關系

李竟長,倪秉強,陳日新,朱 州

(廣西壯族自治區柳州市人民醫院腫瘤科,廣西柳州,545006)

重組人血管內皮抑制素(恩度)為中國自主研發的血管生成抑制劑,可特異性作用于內皮細胞,尤其是抑制微血管內皮細胞的遷移,誘導凋亡。恩度聯合化療已經被美國國立綜合癌癥網絡(NCCN)推薦為晚期非小細胞肺癌(NSCLC)的一線用藥[1]。分子生物學角度研究[2]證實,影響細胞DNA合成、修復的相關基因與化療敏感性相關。核苷酸還原酶亞單位M1(RRM1)和核苷酸切除修復交叉互補基因1(ERCC1)是影響NSCLC治療效果及預后的耐藥性基因。本研究旨在探討NSCLC組織中ERCC1和RRM1表達與恩度聯合吉西他濱/奈達鉑療效及預后的關系。

1 資料與方法

選取2007年1月—2011年3月在本院經組織學確診的ⅢB和進展期NSCLC患者51例,其中男38例,女 13例,年齡 42～84歲,中位年齡60.4歲,體力活動狀態評分(PS評分)0～2分。取患者組織標本,入選標準:每例患者至少有1個可測量的病灶,且化療前未接受其他藥物治療。

采用免疫組織化學法檢測ERCC1和RRM1在病理標本中的表達:蠟塊標本連續切成4 cm厚切片 4張,常規脫蠟、水化后,磷酸鹽緩沖液(PBS)(pH=7.4)沖洗 ,以3%H2O250μ L孵育10 min,PBS沖洗2 min×3次,蒸餾水沖洗3次,正常山羊血清封閉,室溫孵育10 min后:其中2張滴加1∶50稀釋的鼠抗人 ERCC1單克隆抗體,另外2張滴加 50 μ L的鼠抗人 RRM1一抗,室溫下孵育10 min,PBS沖洗2 min×3次,DAB顯色,蘇木素復染,乙醇梯度脫水。免疫組化結果判定:ERCC1陽性染色標準為腫瘤細胞核呈棕黃色,RRM1陽性染色標準為腫瘤細胞核、胞漿均呈棕黃色。光學顯微鏡下隨機選擇5個視野,每個視野計數100個腫瘤細胞,根據著色陽性細胞占計數細胞百分比評分,<50%為RRM1(-)低表達,≥50%RRM1(+)高表達。陽性細胞數≥10%為 ERCC1(+)高表達,<10%為 ERCC1(-)低表達。

患者采用吉西他濱(商品名:健擇,法國禮來有限公司生產)1 000 mg/m2,靜脈滴注,第1天和第8天給藥;奈達鉑(商品名:奧先達,江蘇奧賽康藥業股份有限公司)80 mg/m2,靜脈滴注,第1天給藥;恩度(YH-16,山東先聲麥得津生物制藥有限公司生產)7.5 mg/m2,第1～14天連續給藥。28 d為1周期,4個療程后評價療效。

采用RECIST評價標準進行療效評價[3],分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、疾病穩定(SD)和疾病進展(PD)。近期客觀有效率(RR)為CR+PR。觀察患者生存期,若末次隨訪仍然存活則定為截尾數據。隨訪至2012年10月,隨訪率為100%。收集手術或活檢病理標本。

2 結 果

在51例NSCLC患者中,ERCC1陽性表達者22例,陽性表達率43.1%;RRM 1陽性表達者32例,陽性表達率62.7%。經相關性分析顯示,RRM1與ERCC1表達呈一定正相關(P<0.01),具有統計學意義。見表1。

表1 NSCLC組織中RRM1與ERC C1表達的相關性

51例患者均可評價療效及不良反應,CR 1例,PR 23例,總有效率RR為47.1%,中位生存期11.1個月,1年生存率51.7%?；颊甙凑誖RM1、ERCC1的表達高低分組,對 18例 RRM1和ERCC1均為(-)患者獲有效13例(72.2%),21例RRM1和ERCC1均(+)患者獲有效4例(19.0%),12例任一陽性表達患者獲有效7例(58.3%),3組之間差異有統計學意義(P<0.05)。見表 2。

表2 RRM1、ERCC1表達與化療療效的相關性

ERCC1、RRM1表達為(-)組的疾病進展時間(TTP)、中位生存時間(MST)均優于ERCC1、RRM1表達為(+)組,而二者任一(+)組的TTP、MST位于上述2組之間,3組之間比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 NSCLC組織中不同RRMl、ERCCl表達的生存情況

3 討 論

化療是治療晚期NSCLC的主要手段,在腫瘤的治療中發揮重要作用[4]。相同的化療方案和化療劑量,因患者的情況不同,化療效果也有差異,影響化療效果的一個重要因素即腫瘤對化療的耐藥性,DNA修復基因影響鉑類藥物的敏感性。對于正常人群,DNA修復基因可以有效降低肺癌的發病危險,而對于腫瘤患者,會導致化療藥物耐藥,化療療效降低[5]。研究[6]表明,RRM1的基因表達與吉西他濱耐藥有關,ERCC1的表達與奈達鉑耐藥相關。ERCC1過表達可使停止在G2M期的損傷DNA迅速修復,是核苷酸外切修復家族成員之一,其表達水平可以代表DNA修復機制的活性。不同個體腫瘤細胞中ERCC1表達水平差異很大,ERCC1的高表達通常伴隨肺癌發病率的增加[7]。在一項NSCLCⅢ期隨機臨床研究[8]中發現,ERCC1和RRM1基因表達水平均影響吉西他濱單藥或吉西他濱聯合卡鉑用藥的化療效果,即ERCC1和 RRM1低表達者近期有效緩解率更高。ERCC1高表達和低表達者在早期和晚期NSCLC中起不同的作用,高表達者耐藥性增加,但術后生存期較長;晚期NSCLC低表達者對部分化療藥物更為敏感,預后較高表達者好。RRM1是RNA合成的重要前體,是DNA合成通路中的限速酶,逆轉二磷酸脫氧核苷酸的形成,促進DNA損傷修復[3]。本研究結果表明,ERCC1和RRM1的高表達呈正相關,根據癌變模型假設,當 ERCC1、XPD、XPG 等修復基因將DNA鏈受損部分切除后,余下的空缺就將由RRM1提供填補。

重組人血管內皮抑素最初是從鼠成血管細胞瘤株中提取到的一種內源性糖蛋白[9],可以特異性的抑制腫瘤新生血管內皮細胞的增殖與遷移,阻斷腫瘤細胞的營養供給,最終抑制腫瘤增殖。重組人血管內皮抑素與鉑類制劑聯用能增強化療效果?？剐律苌伤幬锱c化療產生協同作用主要通過[10]:長期使用化療藥物面臨細胞DNA的修復增加,使腫瘤需要更多的氧和營養物質,而抗血管生成類藥物可阻斷腫瘤的營養供應,降低腫瘤轉移、復發的可能性,且血管內皮細胞在遺傳上具有穩定性,因此重組人血管內皮抑素不易獲得耐藥性。

[1] Olaussen K A,Dunant A,Fouret P,et al.DNA repair by ERCC1 in non small cell lung cancer and cisplatin-based adjuvant chemotherapy[J].N Earl J Med,2006,355(10):983.

[2] Martin L P.Hamilton T C,Schilder R J.Platinum resistance:the role of DNA repair pathways[J].Clin Cancer Res,2008,14(5):1291.

[3] 程剛.非小細胞肺癌“個體化”化療研究進展[J].中國肺癌雜志,2008(1):10.

[4] Seetharam R N,Sood A,Basu-mallick A,et al.Oxaliplatin№sistance induced by ERCC1 up-regulation is abrogated by siRNA mediated gene silencing in human colorectal cancer cells[J].Anticancer Res,2010,30(7):2531.

[5] Kirschner K,Melton D W.Multiple roles of the ERCC1-XPF endonuclease in DNA repair and resistance to anticancer drags[J].Anticancer Res,2010,30(9):3223.

[6] Kim S O,Jeong J Y,Kim M R.et al.Efficacy of gmeitabine in ptients with non-small cell lung cancer according to promoter polymorphisms of the ribonueleotide reducume Mi gene[J].Clin Cancer Res,2008,14(10):3083.

[7] Croteau D L,Peng Y,Van Houten B.DNA repair gets physical:mapping an XPA-binding site on ERCC1[J].DNA Repair(Amat),2008,7(5):819.

[8] Pan J,Lin J,Izzo J G,et al.Genetic susceptibility to esophageal cancer:the role of the nueleotide excision repair pathway[J].Carcinogenesis,2009,30(5):785.

[9] Reynolds C,Obasaju C,Schell M J.et al.Randomized phaseⅢtrial of gemcitabine-based chemotherapy with in situ RRM1 and ERCC1 protein levels for response prediction in Non small cell lung cancer[J].J Clin Oncol,2009,27(34):5808.

[10] Itssaka S,Komaki R,Herbst R S,et al.Endostatin improves radioresponse and blocks tumor revascuhrization after radiation therapy forA431 xenografis in mice[J].Int J Radiat Oneol Biol Phys,2007,67(3):870.