APOE 基因多態性與云南傣族2 型糖尿病相關性

張旭祥 ，李 雯，王 芳，林夢潔，李 紅，張 麗，念 馨

（1） 昆明醫科大學第一附屬醫院內分泌科，云南昆明 650032；2） 德宏州人民醫院內分泌科，云南德宏 678400；3） 內蒙古臨河人民醫院內分泌科，內蒙古臨河 015000）

我國在2013 年進行的全國性糖尿病患病調查顯示，中國成人2 型糖尿病的患病率為10.9%[1]。由于生活環境及地域差別，全國各少數民族2 型糖尿病患病率不同。2 型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM） 是有遺傳傾向的多基因疾病，許多研究顯示多個基因在糖尿病的發病機制中起著重要作用。不同民族2 型糖尿病患病差異是否與這些基因差異相關值得進一步探討。

載脂蛋白（apolipoprotein，APO） 參與體內血脂的結合和轉運。APOE 與脂質成分結合形成脂蛋白進一步調控這些脂蛋白與相應APOE 受體和APOB 受體結合，而這些脂質成分均參與脂質代謝，包括乳糜微粒、乳糜微粒殘余物、極低密度脂蛋白、低密度脂蛋白（LDL-C） 和高密度脂蛋白（HDL-C） 等，因此APOE 參與血脂代謝，對脂代謝有重要影響。APOE 基因多態性與血脂代謝相關，導致患者動脈粥樣硬化進展及動脈硬化性心腦血管疾病的發生率[2-3]，不同研究結論有差異，考慮與人群和地區差異有關。分析APOE 基因多態性與云南地區傣族T2DM相關性，并對APOE 基因多態性的種族特異性進行研究，評估APOE 在傣族和漢族2 型糖尿病人群的頻率和分布情況及與少數民族糖尿病的關聯和作用。

1 材料與方法

1.1 研究對象

研究對象為整群抽取住院患者，納入標準：符合WHO1999 年糖尿病診斷標準（WHO 糖尿病專家委員會報告，1999 年）[4]，空腹血糖≥7.0 mmol/L，OGTT 餐后2 h 血糖11.1 mmol/L，隨機血糖11.1 mmol/L，兩次血糖達到可診斷糖尿病，谷氨酸脫羧酶抗體（GAD）、胰島素自身抗體（IAA）、胰島細胞抗體（ICA） 均為陰性的患者。

1.1.1 傣族 抽取2011 年至2015 年在云南省德宏州醫院住院的傣族人群，其中：非糖尿病組共283例，女性151例，男性132例，年齡（51.39±16.16） 歲，體重指數（BMI） （22.31±4.58）kg/m2，腰臀比（WHR） 0.93（0.88～0.93）。

2 型糖尿病組共292例，女性150例，男性142例，年齡（54.76±13.03） 歲，BMI（24.14±4.47） kg/m2，WHR0.93±0.12。兩組年齡、性別差異無統計學意義。

1.1.2 漢族 抽取2007 年和2008 年在昆明醫科大學第一附屬醫院住院的漢族2 型糖尿病患者259例，女性128例，男性131例，年齡（56.01±14.06） 歲，BMI（23.78 ±3.69） kg/m2，WHR 0.95±0.08。

排除標準： （1） 妊娠患者；（2） 糖尿病患者谷氨酸脫羧酶抗體（GAD）、胰島素自身抗體（IAA）、胰島細胞抗體（ICA） 陽性者。

1.2 研究方法

1.2.1 標本和臨床資料的采集 所有研究對象清晨測身高、體重、腰圍、臀圍、血壓。BMI=體重/身高2（kg/m2）；WHR=腰圍/臀圍；并空腹抽取外周靜脈血，測定FPG、TC、TG、UA 等生化指標。0.5%EDTA 抗凝管1 管外周靜脈血，檢測APOE 基因多態性。

1.2.2 實驗方法及試劑 參見劉文秀等APOE 基因擴增方法[5]。

1.3 統計學處理

所有數據錄入后運用SPSS20.0 軟件包進行數據統計學分析。各民族患者間等位基因頻率及基因型頻率分布差異用χ2檢驗分析，并分析所選人群是否符合連鎖平衡定律（Hardy-Weinberg equilibrium）。計量資料服從正態分布以均數±標準差（） 表示，非正態分布計量資料進行對數轉換后分析。多組資料的比較用方差分析，如有差異用q檢驗進一步兩兩比較；兩組資料的比較用t檢驗。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 APOE 基因擴增及酶切結果

2.1.1 APOE 基因PCR 擴增產物電泳鑒定結果APOE 基因經PCR 擴增后，其產物片段長度292 bp，見圖1。

圖1 APOE 基因擴增產物電泳圖Fig.1 Electrophoresis of APOE gene amplification product

2.1.2 酶切產物電泳鑒定結果 經限制性核酸內切酶HhaⅠ酶切后，用10%聚乙烯丙酰胺凝膠電泳，電壓為100 V 1.5 h。根據堿基數判讀基因型：E2/2：91 bp、83 bp、60 bp；E3/3：91 bp、60 bp、48 bp、35 bp；E3/4：91 bp、72 bp、60 bp、48 bp、35 bp；E4/4：72 bp、60 bp、48 bp 35 bp 的產物片段，見圖2。

圖2 APOE 酶切產物電泳圖Fig.2 Electrophoresis of 10% polyvinyl acrylamide gel from APOE enzyme digestion product

2.2 臨床數據統計學分析

2.2.1 基因型和等位基因頻率的比較 ApoE 基因有四個多態性：E3/4，E2/2，E3/3 和E4/4。在傣族人群中，2 型糖尿病和非糖尿病人群在基因表型分布上有明顯統計學差異（P＜0.001）；在2 型糖尿病人群中，漢族和傣族有明顯統計學差異（P＜0.001）。由于E4/4 人數較少，將基因型E3/4 及E4/4 作為E4，E2/2 作為E2，E3/3 作為E3，比較三組人群的等位基因頻率，顯示有統計學差異（P＜0.001），見表1。

2.2.2 傣族2 型糖尿病和漢族2 型糖尿病臨床和生化資料比較 傣族T2DM 組與漢族T2DM 組之間年齡、BMI 無統計學差異（P＞0.05），WHR 具有統計學差異（P＜0.05）；腰圍、SBP、DBP、FGP、UA、TC、TG 具有顯著統計學差異（P＜0.01）。傣族T2DM 組空腹血糖、血壓、尿酸及血脂水平明顯高于漢族T2DM 組，漢族糖尿病組腰圍和腰臀比高于傣族糖尿病（表2）。

2.2.3 傣族2 型糖尿病不同基因型的臨床資料比較 傣族T2DM 組E2/2 基因組與E3/3 基因組、E3/4+E4/4 比較，各組的年齡、BMI、腰圍、WHR、FPG、DBP、TC、TG 無統計學差異（P＞0.05）。收縮壓（SBP） 和血尿酸（UA） 有顯著統計學差異（P＜0.01），E3/3 基因組和E3/4+E4/4 組收縮壓水平明顯高于E2/2 基因組；E3/3 基因組和E3/4+E4/4 組血尿酸水平明顯低于E2/2 基因組，見表3。

2.2.4 漢族2 型糖尿病不同基因型的臨床資料比較 漢族T2DM 組E2/2 基因組與E3/3 基因組、E3/4+E4/4 比較，各組的年齡、BMI、腰圍、WHR、FPG、UA、TC、TG 無統計學差異（P＞0.05）；SBP（P＜0.01） 和DBP（P＜0.05） 有統計學差異，E3/3 基因組和E3/4+E4/4 組的SBP 和DBP 均高于E2/2 基因組，與傣族相比較有不同，見表4。

表1 傣族和漢族APOE 多態性基因型及等位基因頻率比較［n（%）］Tab.1 Comparison of APOE polymorphism genotypes and allele frequencies between Dai and Han nationalities［n（%）］

表2 傣族T2DM 組與漢族T2DM 組臨床和生化資料比較（） （1）Tab.2 Comparison of clinical and biochemical data between T2DM in Dai and Han （） （1）

表2 傣族T2DM 組與漢族T2DM 組臨床和生化資料比較（） （1）Tab.2 Comparison of clinical and biochemical data between T2DM in Dai and Han （） （1）

與傣族T2DM組比較，*P ＜0.05，#P＜0.01。

表2 傣族T2DM 組與漢族T2DM 組臨床和生化資料比較（） （2）Tab.2 Comparison of clinical and biochemical data between T2DM in Dai and Han （） （2）

表2 傣族T2DM 組與漢族T2DM 組臨床和生化資料比較（） （2）Tab.2 Comparison of clinical and biochemical data between T2DM in Dai and Han （） （2）

與傣族T2DM組比較，#P ＜0.01。

表3 傣族2 型糖尿病不同基因組臨床和生化資料比較（） （1）Tab.3 Comparison of clinical and biochemical data of different genomes of Dai T2DM （） （1）

表3 傣族2 型糖尿病不同基因組臨床和生化資料比較（） （1）Tab.3 Comparison of clinical and biochemical data of different genomes of Dai T2DM （） （1）

表3 傣族2 型糖尿病不同基因組臨床和生化資料比較（） （2）Tab.3 Comparison of clinical and biochemical data of different genomes of Dai T2DM （） （2）

表3 傣族2 型糖尿病不同基因組臨床和生化資料比較（） （2）Tab.3 Comparison of clinical and biochemical data of different genomes of Dai T2DM （） （2）

與E2/2 組比較，#P ＜0.01。

表4 漢族糖尿病APOE 不同基因型臨床和生化資料比較（） （1）Tab.4 Comparison of clinical and biochemical data of different genomes of Han T2DM （） （1）

表4 漢族糖尿病APOE 不同基因型臨床和生化資料比較（） （1）Tab.4 Comparison of clinical and biochemical data of different genomes of Han T2DM （） （1）

表4 漢族糖尿病APOE 不同基因型臨床和生化資料比較（） （2）Tab.4 Comparison of clinical and biochemical data of different genomes of Han T2DM （） （2）

表4 漢族糖尿病APOE 不同基因型臨床和生化資料比較（） （2）Tab.4 Comparison of clinical and biochemical data of different genomes of Han T2DM （） （2）

與E2/2 組比較，*P ＜0.05，#P ＜0.01。

3 討論

APOE 基因多態性與一些代謝性疾病的發生有相關性，這些疾病包括糖尿病、血脂異常和高血壓等。APOE 基因最多見的是外顯子4 多態性，而其等位基因頻率在不同人種間存在差異，可能導致相應疾病存在遺傳傾向性。本研究檢測了傣族和漢族2 型糖尿病中ApoE 的基因型，共有4 種：E2/2、E3/3、E3/4、E4/4。國內研究顯示E3/3 是最常見的基因型，等位基因頻率最常見的也是E3[6]。傣族2 型糖尿病患者APOE 基因多態性以E3/3 最常見，為88.0%；E3/4 最少，為1.4%。漢族糖尿病也以E3/3 常見，為78.4%，而最少的是E4/4，為1.2%。在基因型分布方面，傣族和漢族2 型糖尿病是存在差異的。與瑞典人群研究[7]結果相比，我國人群E3 頻率較高，而E4 頻率低。說明在不同人種、民族間APOE 基因多態性是有差異的。

有研究顯示APOE 基因多態性與血脂有相關性。Eto 等[8]報道TG 升高與APOE 的E2 等位基因相關。郭茜等[9]研究顯示漢族糖尿病E2/E2 基因型者的TG 和TC 明顯高于其它基因型，回族人群則未見此相關性。本研究中，傣族、漢族2 型糖尿病各APOE 基因型血脂，包括膽固醇、甘油三酯均無差異（P＞0.05）。說明不同民族間APOE 基因表型對脂代謝的影響不同。云南地區處于高原，飲食、生活習慣與其它地區不同，基因表型也可能與地區及生活環境有關。

本研究結果提示在傣族和漢族糖尿病中，血壓在不同基因型中存在差異。在漢族糖尿病中，E2/2組的SBP 和DBP 均明顯低于E3/3、E3/4 和E4/4組，其中SBP 有明顯統計學差異，P＜0.01；DBP有統計學差異，P＜0.05。在傣族糖尿病中，也顯示E2/2 組血壓明顯低于E3/3、E3/4 和E4/4 組，P＜0.01。筆者的研究結果提示APOE 基因多態性與血壓有相關性，這與我國學者研究結果一致[10]。在傣族糖尿病中，E2/2 組的血尿酸水平明顯低于E3/3、E3/4 和E4/4 組，P＜0.01。綜上，APOE 基因多態性在云南地區傣族、漢族2 型糖尿病人群中是存在種族差異的。在傣族和漢族糖尿病人群中，血壓、血尿酸與APOE 不同基因型有關系。目前尚需進一步相關研究，探討APOE 基因多態性影響血尿酸、血壓水平的機制，為闡明APOE 基因在糖尿病、代謝方面的作用提供證據。