酶免疫分析處理系統對110例乙肝免疫五項復檢樣本分析

張國良

荊州市中心醫院 檢驗醫學部，湖北 荊州 434020

0 前言

中國是乙肝病毒感染的高危區，盡管乙肝疫苗的廣泛接種已經有效地控制了乙肝病毒的傳播，但是仍有非常龐大的感染群體，據估計全國有1.2億人長期攜帶乙肝病毒，其中慢性乙肝病人2000萬。乙肝病毒感染嚴重危害了人類的健康，同時也引發了一系列社會和經濟問題，是中國現階段最為突出的公共衛生問題之一[1]。乙肝的預防、診斷與療效等主要依賴患者血清學指標的檢測,其中包含乙肝免疫五項檢測。本文擬對本實驗室近期出現的110例乙肝免疫五項復檢樣本進行分析，旨在剖析本實驗室乙肝免疫五項復檢的意義及乙肝檢測的注意事項。

1 材料和方法

1.1 儀器

中文LIS處理系統；瑞士生產的GENESES RSP 100（RSP 100）樣品分配系統，其工作原理是通過LOGIC軟件控制分配質控物和待測樣品至測定微孔板,再轉至BEP III全自動酶免疫分析系統完成檢測。在檢測過程中需及時處理報警提示信息；德國生產的DADE BEHRING（BEPⅢ）酶免疫分析處理系統，其工作原理是通過軟件控制流程自動完成加酶、孵育、清洗、顯色、測量過程，并自動計算判斷樣本結果。在檢測過程中需及時處理“錯誤報告（Logbook）”提示信息；德國生產的Roche e 601電化學發光儀，其工作原理是樣本中的抗原或抗體與生物素化微粒、釕（Ru）標記的抗體或抗原結合形成抗原抗體復合物，加入鏈霉親和素包被的微粒，使形成的復合物通過生物素與鏈霉親和素間的反應結合到微粒上。反應混和液吸到測量池中，微粒通過磁鐵吸附到電極上，未結合的物質被清洗液洗去，電極加電壓后產生化學發光，檢測物濃度與光量子數成正比（夾心法）或反比（競爭法）。在檢測過程中需及時處理“報警（ALARM）”提示信息。根據ISO15189：2007的要求，在本室定期實施以上3種儀器的校準計劃并進行性能驗證，確保檢驗結果滿足免疫學檢驗室內質量控制要求。

1.2 試劑及質控物

乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎表面抗體（HBsAb）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）、乙型肝炎e抗體（HBeAb）、乙型肝炎核心抗體（HBcAb）5項試劑均來自北京萬泰生物藥業股份有限公司的試劑盒，5項質控物均為北京康徹思坦生物技術有限公司提供的弱陽性質控物。

1.3 樣本

均為本室日常門診、住院病人及體檢人員的樣本。

1.4 方法

樣本離心后，先在RSP 100上進行微板加樣，然后轉至BEP Ⅲ上進行全自動加酶、孵育、洗板、顯色及數據處理。待數據傳輸至中文LIS處理系統后，按照本室的作業指導書，進行結果審核，并篩選出應復查樣本。次日將樣本再行離心后進行復查，若兩次結果一致，則可發出報告；若兩次結果不一致，則將不一致的項目在Roche e 601電化學發光儀上進行檢測，取結果一致者發出報告。幾次檢查結果均在本室的“乙肝樣本復查記錄表”上進行登記，以最終發送報告為基準，計算結果復檢符合率。本室針對“ELISA法定性試驗結果分析與控制”規定如下：① 出現“灰區”值須對檢測結果進行綜合評估，包括乙肝全套單項“灰區”結果及復合陽性標本的“灰區”結果；② 乙肝全套的單項陽性結果（HBsAb除外）；③ 抗原抗體同時陽性結果時，復檢。

2 結果

（1）為方便描述，本文將HBsAg設為1，HBsAb設為2，HBeAg設為3，HBeAb設為4，HBcAb設為5，5項全陰設為0。

（2）本次研究的110例乙肝免疫五項復檢樣本中需復檢的HBV結果模式，見圖1。

圖1 需復檢的HBV結果模式

（3）復檢后兩次結果的比較及符合率，見表1。

表1 復檢后兩次結果的比較及符合率

3 討論

目前我國臨床實驗室最常用的檢測方法是酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。本次研究的110例復查標本來自于申請乙肝三系檢測的6679例受檢對象中，需要復檢的比例近2%。據ISO15189:2007的要求，我室為評估同一檢測項目在不同檢測系統間檢驗結果的一致性，特規范了免疫室不同儀器系統間的比對過程，即在BEP III和Roche e 601兩個檢測系統間每年進行1次常規比對，儀器大修或臨床服務對象對同一儀器所檢測同一項目檢驗結果質疑3次等情況時，隨時進行臨時比對，以確保檢驗質量。

我科早在2002年就已引進了全自動的樣品分配系統和酶免疫分析處理系統，這2套系統的引進大大避免了我們在做ELISA分析時人為因素引起的誤差。2005年，我科完成了關于ELISA檢測影響因素的研究，并制定了乙肝檢測的復查標準。本次實驗中，HBsAg介于灰區但模式常見的復檢標本中，復查后符合率較高（85%）。HBsAg的灰區問題一直是大家關注的焦點[2-4]。不難看出，HBsAg在乙肝免疫五項的復檢中占很大比例，而HBsAg在乙肝的判斷和治療方面扮演著一個重要角色[1]。在臨床檢驗中，ELISA試驗由于本身的一些特點，會不可避免地出現一些誤差。一般情況下，可以說對臨床標本的檢測結果，首次測定陰性的基本可以確定為真陰性，而陽性反應者不一定為真陽性[5]。本次實驗中，兩次檢查結果不符的5例HBsAg介于灰區的樣本，一方面可能由于每次檢測的客觀環境無法達到完全一致，如每塊微板的靈敏度可能不同、RSP 100每次加樣的灌注量可能不同、加好樣后的微板在BEP Ⅲ上的布板時間無法完全相同等，這些都會導致HBsAg的S/CO值出現差異；另一方面，即使嚴格按照SOP文件來執行，也仍然無法解決乙肝窗口期的問題。

單項陽性（HBsAb除外）的復檢標本中，復查后符合率僅為20%，其中以HBsAg及HBeAg單項陽性常見，且復檢后符合率低。筆者認為造成假陽性的主要原因為樣本離心不完全。樣本離心不完全，血液未完全凝固或血清未完全析出就進行樣本檢測，致使檢測反應孔出現凝血現象或殘留細胞成分干擾，出現假陽性。HOOK效應（鉤狀效應）是進行ELISA檢測必須注意的問題。在本次實驗中，出現了1例由模式3變成了模式1，3，即出現了常見的后帶現象[6]，此例標本通過原樣及梯度稀釋后得到確定。

抗原抗體同時存在的復檢標本中，多以HBsAg和HBsAb同時存在為多見，復查后符合率為41%。若標本中存在高濃度的類風濕因子[7]，或標本是經過藥物治療后已產生基因突變，或變異株刺激機體產生了不同亞型的病毒株，從而出現抗原抗體同時存在[8]等因素，都可引起乙肝免疫五項檢測結果出現不同形式的少見模式。

針對上述情況，每個實驗室都需建立一套適合本實驗室的完整的質量控制體系及復檢標準[9]，實驗室工作者應遵循本室的SOP文件，嚴格的進行復檢并做好記錄，必要時給臨床及患者適當的建議信息，為臨床及病人負責，同時也保護了自己。

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