氣相色譜-氮磷檢測器檢測食品中稻瘟凈研究

陳斌，俞凌云，徐亞歐，方智

（1.西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，四川成都 610041；2.四川出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心，四川成都 610041）

氣相色譜-氮磷檢測器檢測食品中稻瘟凈研究

陳斌1，俞凌云2，徐亞歐1，方智2

（1.西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，四川成都 610041；2.四川出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心，四川成都 610041）

為克服食品中復(fù)雜成分的干擾，提高稻瘟凈的提取、凈化效率及檢測靈敏度，對(duì)已有稻瘟凈的方法進(jìn)行改進(jìn)：用乙腈提取目標(biāo)物稻瘟凈，采用正己烷：丙酮（1∶1，V/V）替代傳統(tǒng)工藝中毒性較強(qiáng)的二氯甲烷提取液；植物源性食品采用石墨化碳黑小柱對(duì)提取液進(jìn)行凈化，動(dòng)物源性食品采用氧化鋁柱對(duì)提取液進(jìn)行凈化；采用氮磷檢測器（NPD）檢測，方法檢出限為0.001mg/kg。測定食品中稻瘟凈加標(biāo)回收率在91.3%～97.5%之間，適應(yīng)于成分復(fù)雜的食品中稻瘟凈的測定。

稻瘟凈；氣相色譜-氮磷檢測器；提取；凈化

0 引言

稻瘟凈是一種有機(jī)磷殺菌劑，常施用在水稻和玉米生長過程中，由于化學(xué)性質(zhì)較穩(wěn)定，施用后在地表水和土壤中均有一定殘留，在蔬菜和家畜中也可能檢測到一定水平的蓄積。目前，出口到日本與歐盟的蔬菜和動(dòng)物產(chǎn)品均提出稻瘟凈的檢測要求[1-2]，而針對(duì)稻瘟凈的檢測較少，僅報(bào)道了薄層色譜法[3]、氣相色譜法[4]、液相色譜法[5]；有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測方法主要有氣相色譜法[6]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[7]、高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[8]，樣品的提取凈化需要提高[9-10]。

本文改進(jìn)了已有方法中稻瘟凈的提取與凈化方法，前處理設(shè)備簡單，用無水硫酸鈉的鹽析作用提高待測組分的回收率。特別是動(dòng)物類食品用毒性較小、沸點(diǎn)較低便于濃縮的正己烷和丙酮混合提取，具有一定的環(huán)保意義。氣相色譜-氮磷檢測器（GC-NPD）對(duì)稻瘟凈檢測靈敏度高，可滿足食品中低限量的檢測要求。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料

試劑：稻瘟凈（Kitazin，O，O-二乙基-S-芐基硫趕磷酸酯，C11H17O3PS）標(biāo)準(zhǔn)品，純度≥99%，濃度為1.0mg/mL（水溶液）；乙腈、正己烷、丙酮等試劑均采用色譜純?cè)噭粺o水硫酸鈉為分析純；所用水均為蒸餾水。

材料：氧化鋁柱，石墨化碳黑小柱，北京迪馬科技有限公司。

1.2 儀器設(shè)備

氣相色譜-氮磷檢測器：Aglient 6820；電子分析天平：梅特勒托利多儀器（上海）有限公司。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

稱取100mg稻瘟凈，用丙酮溶解于100m L容量瓶中定容配成濃度為1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，根據(jù)需要再配成適當(dāng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.4 稻瘟凈的提取與凈化

對(duì)固體樣品進(jìn)行充分粉碎。

1.4.1 植物源性食品的提取與凈化

（1）提取。稱取2.00均勻試樣于10mL離心試管中，加入無水硫酸鈉使之飽和，用6mL乙腈振蕩提取一次，時(shí)間2min，然后以2 500 r/min離心3min，收集上層提取液于另一試管中。殘?jiān)儆?m L乙腈提取兩次，合并上層提取液，待凈化。

（2）凈化。在石墨化碳黑小柱上端裝入1 cm高的無水硫酸鈉，用8mL正己烷淋洗柱子，洗脫速率0.5mL/min，收集全部流出液于刻度離心管中，最后于40℃下用氮?dú)饬鞔抵两桑帽芙鉃?.0mL，過0.45μm濾膜，供GC-NPD進(jìn)樣分析。

1.4.2 動(dòng)物源性食品的提取與凈化

（1）提取。稱取2.00 g均勻試樣于10m L離心試管中，加入無水硫酸鈉使之飽和，用6m L乙腈振蕩提取一次，時(shí)間2min，然后以2 500 r/min離心3min，收集上層提取液于另一試管中。殘?jiān)儆?mL乙腈提取兩次，合并上層提取液，待凈化。

（2）凈化。在中性氧化鋁固相萃取柱上端裝入1 cm高的無水硫酸鈉，先用4mL丙酮與正己烷混合液（1∶1，V/V）預(yù)淋洗固相萃取柱，棄去全部預(yù)淋洗液，然后將上述提取液傾入固相萃取柱中，待提取液全部流出固相萃取柱后，再用8m L丙酮與正己烷混合液洗脫，收集全部流出液于刻度離心管中，最后于40℃下用氮?dú)饬鞔抵两桑帽芙庵?.0m L，過0.45μm濾膜，供GC-NPD進(jìn)樣分析。

1.5 色譜條件

色譜柱：HP-5（鍵合，5%二苯基，95%二甲基聚硅氧烷）彈性石英毛細(xì)柱，使用溫度：-60～320℃，30m×0.25mm（I.D）×0.25μm（膜厚）。程序升溫程序：初始溫度100℃，保持1min，然后以10℃/min升溫至220℃，保持8min。進(jìn)樣口溫度：245℃；檢測器溫度：245℃。

2 結(jié)果與討論

2.1 稻瘟凈的凈化

2.1.1 植物源性食品的凈化

石墨化碳黑小柱對(duì)植物源性食品中的色素等雜質(zhì)吸附強(qiáng)，對(duì)目標(biāo)物無吸附，回收率高，凈化洗脫液采用非極性正己烷，對(duì)稻瘟凈洗脫率高，樣品凈化效果好（見圖1和圖2），稻瘟凈的洗脫效率達(dá)98.8%。

圖1 茶葉中稻瘟凈提取液色譜圖（未過柱）

圖2 茶葉中稻瘟凈提取液色譜圖（過柱凈化）

2.1.2 動(dòng)物源性食品的凈化

針對(duì)動(dòng)物源性食品與植物源性食品中蛋白質(zhì)和油脂等含量存在明顯差異，根據(jù)成分不同選擇中性氧化鋁固相萃取柱對(duì)提取液進(jìn)行凈化。選擇1∶1的正己烷∶丙酮（體積比）混合組成弱極性提取液效果好（見圖3和圖4），提取液回收率如表1所示。

動(dòng)物類食品凈化洗脫液摒棄二氯甲烷[11]，而采用用毒性較小、沸點(diǎn)較低便于濃縮的正己烷和丙酮混合提取，洗脫速率快用量少，僅需8mL正己烷和丙酮混合液，稻瘟凈的洗脫效率在93.38%以上，對(duì)操作人員的安全和環(huán)境保護(hù)具有一定的意義。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線、精密度、檢測限實(shí)驗(yàn)

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖3 豬肉中稻瘟凈提取液色譜圖（未過柱）

圖4 豬肉中稻瘟凈提取液色譜圖（過柱凈化）

在所選定的色譜條件下，取不同質(zhì)量濃度稻瘟凈的標(biāo)準(zhǔn)溶液分別進(jìn)樣，進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量濃度在0.01～1.0μg/mL，即相當(dāng)于檢測樣品中0.002～0.2mg/kg，以峰面積（y）對(duì)進(jìn)樣標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量濃度（x）作線性回歸分析，其線性方程是y=0.010 5x-2.675，相關(guān)系數(shù)是r=0.99995。

表1 不同洗脫液的回收率實(shí)驗(yàn)（n=5）

表2 樣品的加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

2.2.2 檢出限

在不含有稻瘟凈的茶葉和豬肉樣品中分別添加稻瘟凈，經(jīng)反復(fù)驗(yàn)證得檢出限為0.001mg/kg。

2.2.3 精密度

在不含有稻瘟凈的茶葉樣品中添加稻瘟凈0.10mg/kg，對(duì)凈化后的提取液重復(fù)測定10次，計(jì)算的精密度RSD為1.18%，精密度高，可以滿足食品中稻瘟凈的檢測準(zhǔn)確度要求。

2.3 實(shí)際樣品檢測

在市場上購買新鮮的蜂蜜、腸衣、八角、大白菜，樣品粉碎后進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如表2所示，回收率為91.3%～97.5%，回收率好，說明本方法適應(yīng)于食品中稻瘟凈的測定。

3 結(jié)束語

本文對(duì)已有稻瘟凈的方法進(jìn)行了有效改進(jìn)：采用乙腈提取目標(biāo)物稻瘟凈、用正己烷和丙酮混合液對(duì)稻瘟凈洗脫，替代傳統(tǒng)工藝中的毒性較強(qiáng)的二氯甲烷提取液；植物源性食品采用石墨化碳黑小柱對(duì)提取液進(jìn)行凈化，動(dòng)物源性食品采用氧化鋁柱對(duì)提取液進(jìn)行凈化，提取和凈化效率明顯提高，抗干擾性能也有效改善，測定食品中稻瘟凈加標(biāo)回收率在91.3%～97.5%之間，回收率高，去除食品中雜質(zhì)凈化性能好，適應(yīng)于成分復(fù)雜的食品中稻瘟凈的測定。

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Determ ination kitazin in foodstuffs by gas chromatography-nitrogen phosphorus detector

CHEN Bin1，YU Ling-yun2，XU Ya-ou1，F(xiàn)ANG Zhi2
（1.Institute of Life Science and Technology，Southwest University for Nationalities，Chengdu 610041，China；
2.Technology Center of Sichuan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Chengdu 610041，China）

To overcome the interference of complex components of the foodstuffs，and improve the efficiency of extraction and purification of the kitazin，and detection sensitivity，the existing methods for determining kitazin in foodstuffs were effectively improved:acetonitrile was selected as extraction solution，and n-hexane:acetone（1∶1，V/V）was selected as the extraction solution，which were used to replace the toxic dichloromethane in traditional methods;graphitized carbon black small column were used to purify the extractant from plant foodstuffs，and alumina column were used for purifying extractant from animal foodstuffs.Nitrogen phosphorus detector（NPD）was chosen for detection with the detection limit of 0.001 mg/kg.The spiked recoveries of determination in foodstuffs were from 91.3%to 97.5%，and the method is suitable for determing kitazin in foodstuffs with complex matrix.

kitazin；GC-NPD；extraction；purification

TS201.2；O657.7+1；TQ253.2+2；TS255.5

A

1674-5124（2013）03-0045-03

2012-12-20；

：2013-02-17

國家質(zhì)檢總局科研項(xiàng)目（2008IK126）

陳斌（1983-），男，四川成都市人，工程師，碩士研究生，專業(yè)方向?yàn)閯?dòng)植物檢驗(yàn)。