老年性白內障患者術前C反應蛋白血漿水平與其單核苷酸多態性的相關性

陳建歡* 鄭玉倩 許慈燕

汕頭大學·香港中文大學聯合汕頭國際眼科中心，廣東 汕頭515000

老年性白內障患者術前C反應蛋白血漿水平與其單核苷酸多態性的相關性

陳建歡* 鄭玉倩 許慈燕

汕頭大學·香港中文大學聯合汕頭國際眼科中心，廣東 汕頭515000

目的 C反應蛋白（CRP），作為一種急性期蛋白，參與多種重要的炎癥反應。CRP血漿水平在年齡相關性黃斑變性患者中升高，并可能受遺傳因素調控，但目前在中國人群中尚未有相關研究發表。本實驗希望通過研究CRP血漿水平與其單核苷酸多態性（SNP）的相關性，分析遺傳因素對蛋白表達的影響。方法 我們收集了71例白內障患者術前血樣，對所有樣本取血漿，并提取基因組DNA。采用Taqman Assay方法對CRP基因的3個標簽SNP rs1800947、rs1417938和rs1205進行基因型測定。基因型數據用Haploview 4.2版本分析Hardy-Weinberg平衡，并對得到的蛋白及基因型數據按加性模型進行線性回歸分析，同時對性別和年齡進行校正。結果 本實驗分析的3個標簽SNP均沒有偏離Hardy-Weinberg平衡。加性模型分析的結果顯示，rs1800947的C等位基因與較低的血漿CRP水平顯著相關。在其他2個標簽SNP中未發現與血漿CRP水平存在顯著相關性（P＞0.05）。結論 本研究首次在中國人群中證明了CRP血漿水平與其遺傳多態性存在顯著相關性，提示CRP的表達受遺傳調控，為進一步研究其參與炎癥反應的分子機制提供了參考。

C反應蛋白；數量性狀；關聯分析；單核苷酸多態性

C反應蛋白（C-reactive protein， CRP），一種急性期蛋白，是先天性免疫的重要組成部分，可能參與多種免疫相關疾病的分子發病機制[1]。在眼科疾病研究中，越來越多的證據證明炎癥及免疫相關過程在年齡相關性黃斑變性（AMD）中起重要的作用。CRP能與CFH結合，是其重要的調控因子，對白人和日本人群的研究報告表明，CRP血漿水平在息肉樣脈絡膜血管病變（PCV）和AMD患者中升高，提示CRP可能參與PCV和AMD的發病過程[2-6]。這些都提示，CRP的表達調控可能參與AMD的發病過程。近期有研究報導，CRP血漿水平與其基因的多態性存在顯著關聯，提示其并可能受遺傳因素的調控[7]。但到目前為止，上述這些研究都是在國外人群中進行的，而AMD在不同人群中已知存在較大的遺傳差異[8]，對于中國人群CRP血漿水平與其基因的多態性是否也存在關聯，尚未有相關研究報導，有待闡明。

本研究希望通過研究CRP蛋白血漿水平與其單核苷酸多態性（SNP）的相關性，分析遺傳因素對蛋白表達的影響。

1 方法與材料

1.1 樣本及信息采集

本研究經過汕頭大學 香港中文大學聯合汕頭國際眼科中心倫理委員會，并遵循赫爾辛基宣言進行。對每個參加者都詳細解釋研究的性質并取得其書面知情同意書。

本研究入組對象為71例住院擬進行老年性白內障手術的患者，經詳細的眼科檢查，并排除外傷等情況，術前采集外周血，分離血漿。對所有樣本取血漿，并提取基因組DNA。基因組DNA和血漿分離提取后隨即存儲于-80C超低溫冰箱，至定量實驗前才取出，以保證質量的穩定性。

1.2 測定血漿中的CRP水平

血漿中的CRP水平在Biotek Powerwave XS分光光度計上用酶聯免疫吸附試驗（人CRP ELISA試劑盒，西唐生物科技，上海）按生產商說明書進行測定，并用標準曲線法進行絕對定量。

1.3 基因分型

根據HapMap數據庫中中國人的單核苷酸多態性（SNP）數據，在Haploview中按r2＞0.8，次要等位基因頻率≥5%的參數計算選取得到CRP的標簽SNP，用于代表該基因組區域內的SNP。在LightCycler 480I（Roche， 美國）型實時定量PCR儀上，采用Taqman 探針法對CRP基因的3個標簽SNP rs1800947、rs1417938和rs1205進行基因型測定。

1.4 數據統計

基因型數據用Haploview 4.2版本分析Hardy-Weinberg平衡，并對得到的蛋白及基因型數據進行數量性狀關聯分析，分析按加性模型進行線性回歸，同時對性別和年齡進行校正。

2 結 果

2.1 Hardy-Weinberg平衡

本實驗分析的3個標簽SNP均沒有偏離Hardy-Weinberg平衡（HWE P＞0.05）。

2.2 血漿CRP水平

測得的老年白內障患者術前的CRP血漿水平范圍為153～8392 ng/ mL，平均值±標準差為3187± 2119 ng/mL，并且線性回歸顯示與年齡呈顯著正相關（效應值β ± 標準誤差SE = 34 ± 14 ng/mL年，P = 0.016）。

2.3 SNP與血漿CRP水平的關聯分析

加性模型分析的結果顯示，rs1800947的C等位基因與較低的血漿CRP水平顯著相關。在其他2個標簽SNP中未發現與血漿CRP水平存在顯著相關性（P ＞ 0.05）。對rs1800947不同基因型的血漿CRP水平進行比較發現，帶有GG基因型人的血漿CRP水平為3414 ng/mL，帶CG基因型的為2420 ng/mL，帶CC基因型的為1756.4 ng/mL，隨C等位基因的數量增加顯現遞減趨勢（圖1）。

圖1 不同rs1800947基因型中的血漿CRP水平

3 討 論

本研究首次在中國人群中證明了CRP血漿水平與其遺傳多態性存在顯著相關性，提示CRP的表達受明顯的遺傳調控，并且加性模型能較好地解釋rs1800947不同等位基因對CRP血漿水平的影響。

CRP的血漿水平與年齡密切相關。Hutchinson等對德國和蘇格蘭的白人成年人群的研究表明，55～74歲人群的CRP血漿水平平均為1.50-2.40mg/L，老齡人群中的CRP水平約為年青人群的2倍[9]。我們的研究對象均為老齡人，結果與Hutchinson的老齡人群的結果相比，CRP血漿水平較高，但是一樣檢測到了CRP與年齡的顯著正相關關系。

SNP rs1800947的C等位基因在白人中有報導與與較低的血漿CRP水平相關。在我們的中國人樣本中，rs1800947的C等位基因與較低的血漿CRP水平相關，這與已有的在國外人群中的報導是相一致的，提示CRP表達水平的遺傳關聯具有跨人群的特點。rs1800947位于CRP基因的啟動子區，C等位基因可能通過改變轉錄因子與啟動子區的結合能力從而影響CRP mRNA的轉錄起始效率，進而影響CRP的表達。

CRP是炎癥反應的一個重要指標，與多種炎癥及免疫過程和疾病相關，在心血管疾病起重要的作用[7]，在眼科疾病中特別與AMD和PCV的發生有密切關系[10]。因此，rs1800947可能通過調控CRP表達從而參與AMD和/或PCV的發生，這將有待進一步的研究。

我們的實驗首次在中國人群中對CRP的血漿水平與其遺傳多態性之間的關系進行了研究。結果證明CRP的血漿水平與其遺傳多態性之間存在顯著關聯。上述發現需要進一步在更多的地區和人群中對上述結果進行驗證。

[1] Schaumberg DA,Ridker PM.High levels of plasma C-reactive protein and future risk of age-related cataract[J].Ann Epidemiol, 1999,9(3):166-171.

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R776.1

B

1671-8194（2013）19-0094-02

國家自然科學基金資助項目（81000397），廣東省科技計劃資助項目（2010B031600130）

*通訊作者：