靜態頂空－氣相色譜法測定太蒼止瀉顆粒中揮發性組分

李雪巖

（河南省宜陽縣中醫院，洛陽471600）

傳統中藥的質量控制一直是一個難點，因為植物藥中組分復雜，當組成成方后組分更為復雜，如何去評價復方中藥的質量尤為困難，而目前對于中成藥的質量評價主要是測定其中一種或者幾種指標性成分，以液相色譜為主要方法，而中藥指紋圖譜的建立可以更加全面的控制藥材以及成藥的質量[1－2]，目前關于中成藥指紋圖譜大多以液相色譜作為其分析手段[3－4]，但是對于成藥處方藥材質量中代表性藥材及飲片的質量控制，尤其是成藥處方中存在含揮發性組分的藥材及飲片，質量控制成為突出的問題，揮發性成分與藥品包裝以及放置有直接的關系，隨著時間的推移，中成藥的揮發性組分會發生變化，成藥的有效性會降低，而在單一藥材中則可以對揮發油進行總量檢查，而成方中揮發性組分如何評價，如何快速對中成藥中揮發性組分評價尚未報道。

頂空氣相色譜，尤其靜態頂空氣相色譜[5]，樣品不需處理，可以直接測定固體樣品[5]，而頂空氣相技術大部分在環保以及食品工業揮發性成分測定中廣泛應用，制藥行業只在原料藥溶劑殘留中應用，在中成藥質量控制中尚未見報道，與傳統的揮發油提取模式比，頂空氣相色譜更能通過指紋峰的變化來判斷成分的遷移與降解，對于判定含有揮發性藥材的成藥質量及有效期有很好的作用。

太蒼止瀉顆粒（豫藥制字Z04030114）是宜陽縣中醫院的經驗方，長期使用，療效顯著。其方由蒼術，茯苓，車前子，烏梅肉，藿香等藥味組成，主要用于治療脾胃虛弱所致的大便清泄，飲食減少，食后腹脹，倦怠懶言，以及慢性腸炎，方中蒼術，藿香揮發性組分含量是其主要起效成分，據文獻報道蒼術中主要組分為蒼術素，蒼術酮以及β－桉葉醇等[6]，而藿香中主要成分為百秋里醇與藿香醇等[7]，作者采用靜態頂空氣相對其進行指紋判別。

1 儀器與試藥

安捷倫7890A氣相色譜儀，7694E靜態頂空進樣器，FID檢測器，DB－5石英毛細管色譜柱（30×0.25mm，025μm），Chemstation化學工作站藿香酮（批號：111822－201001）購自中國藥品生物制品檢定所，太蒼止瀉顆粒由洛陽市宜陽縣中醫院提供，批號（20110721，20111014，20111218）。

2 方法與結果

2.1 對照品配置 取藿香酮加同樣體積水作為頂空溶劑，配置成10μg·mL－1對照品溶液置頂空瓶中密封。

2.2 樣品前處理 直接稱取6g樣品置頂空瓶中，用壓蓋器密封，放置于頂空裝置中。

2.3 氣相色譜條件 進樣口溫度200℃，檢測器溫度為250℃，載氣為N2，柱流量為1.5ml·min－1，分流模式：不分流，總流量為25ml·min－1，尾吹為22ml·min－1，程序升溫，初始柱溫為40℃，保持3min，以5℃·min－1升溫至150℃，保持5min，以10℃·min－1升溫至220℃，保持10min。

2.4 頂空條件 爐溫120℃，定量管溫度150℃，氣體傳輸線溫度170℃，樣品在頂空倉內平衡15分鐘，樣品內加壓時間0.3min，定量環充氣時間0.2min，定量環平衡時間0.02min，進樣時間0.3min。

圖1 頂空氣相色譜典型指紋圖譜

圖2 藿香酮對照品色譜圖

圖3 樣品放置時間與峰總面積關系

2.5 指紋圖譜的建立 按照2.3與2.4項下的色譜與頂空條件進樣，通過優化色譜及頂空條件，得到11個特征峰，見圖1.藿香酮對照品峰見圖2.以不同批次重復出現并且面積大于總面積1%的峰作為色譜指標峰。

2.6 精密度實驗 取同一批次（20110721）太蒼止瀉顆粒樣品進行分析，連續進樣5次，11個特征峰的保留時間RSD小于0.3%，相對峰面積RSD小于1.2%，表明方法精密度良好。

2.7 穩定性試驗 取壓蓋器密封好的樣品室溫放置1h，5h，12h，18h，24h，48h置頂空進樣器中按照頂空條件進樣，其中11個峰相對保留時間RSD小于0.3%，相對峰面積RSD小于1.0%，表明樣品在頂空瓶中室溫條件下穩定。

2.8 重復性實驗 取同一批號的（20110721）太蒼止瀉顆粒樣品，按照2.2項下的制備方法，制備樣品5份，分別進樣，記錄色譜圖，結果11個特征峰峰面積RSD小于2.5%，相對保留時間RSD小于1.8%，結果表明重復性良好。

3 討論

3.1 色譜條件的優化 因為常規頂空氣相色譜分析固體中痕量組分，作者采用分流以及不分流模式分別測定，不分流模式要比分流模式靈敏度顯著增加，故選用不分流模式作為色譜條件。

3.2 頂空條件優化 由于未采用固相微萃取技術[8]，常規頂空氣相普通實驗室十分普及，但是中成藥中揮發性組分屬于微量甚至為痕量組分，如何能保證靈敏度，作者一方面采用不分流進樣模式，另外增加頂空進樣時間來增加進樣量，這樣才能保證揮發性組分在氣相色譜上都有響應，而FID檢測器在pg級別碳氫化合物都有響應，故不需固相微萃取則對樣品進行分析。

3.3 樣品處理 作者比較了樣品加水作為溶劑，與加水與NaCl作為頂空溶劑以及固體樣品直接進樣，結果以固體顆粒直接放置于頂空瓶進樣響應最好，故以此為進樣方式。

3.4 樣品放置時間與含量關系 藿香以及蒼術的貯藏時間都對其揮發油的含量有影響[9]，作者考察了樣品打開包裝在培養皿中放置時間對其峰總面積的影響，結果表明隨著時間的增加，其峰面積總量逐漸的降低，也與文獻報道藥材的特征相似，而封裝在塑料袋之內，但是其揮發性組分已經揮發于空氣，加上原藥材以及制劑制粒過程成損失，則成藥的質量有效期為2年，作者認為極為不合理，應該縮短其有效期。

傳統中成藥制劑復方成分復雜，而作為藥檢部門若只依據單一組分來對藥品整體質量進行控制并不能保證藥品質量，而按照目前中成藥質量標準，大部分依靠測定其中一種或多種組分來判定成藥的質量，而實際中中藥組分復雜，往往一個處方有十種或以上藥材組成，每種藥材中指標成分分別控制或者同時控制并不現實，也增加藥品檢驗成本，而最近關于中藥指紋圖譜方面的研究日益增加[1，2]，而液相色譜作為現在樣品含量測定方面主流方法，被廣泛應用，但是如何在不同流動相，不同色譜柱上保證保留時間以及方法的可復制性，加上樣品處理繁瑣，成為困擾指紋圖譜發展的首要因素，而氣相色譜 “流動相”為單一的氣體，在保留時間重現性上比液相色譜有更佳的表現，利用保留時間鎖定與頂空進樣的簡便性，通過測定揮發性組分的指紋峰來判定成藥質量標準，成為傳統中藥質量控制中有益的嘗試。

[1]屠鵬飛.高效液相色譜法制定中藥材和中藥注射劑特征指紋圖譜的探討[J].中成藥，2000，22（7）：516－516.

[2]謝培山.色譜指紋圖譜分析是中草藥質量控制的可行策略[J].中藥新藥與臨床藥理，2001，12（3）：141－151.

[3]鄧文紅，黃書銘，鄒祥旺，等.靈芝及其制劑的 HPLC指紋圖譜的研究[J].藥物分析雜志，2005，25（3）：352－355.

[4]魏清芳，王嘉林.木香順氣丸甲醇提取物的HPLC指紋圖譜[J].中國實驗方劑學雜志，2011，17（8）：110－115.

[5]王永華.頂空氣相色譜分析原理與技術[J].中國環境監測，2006，22（2）：7－13.

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[8]曾棟，陳波，姚守拙.頂空固相微萃取－氣相色譜－質譜聯用分析干柴胡藥材中有機揮發物[J].分析化學，2005，4.

[9]羅集鵬，劉玉萍，馮毅凡，等.廣藿香的兩個化學型及產地與采收期對其揮發油成分的影響[J].藥學學報，2003，38（4）：307－310.