BacT／ALERT 3D檢測系統(tǒng)在快速檢測結核分支桿菌中的應用

陳 昕，趙 雷，楊亞麗

（1.暨南大學醫(yī)學院附屬深圳人民醫(yī)院 檢驗科，廣東 深圳518020；2.河南省人民醫(yī)院 麻醉科）

結核病是嚴重危害人類健康的全球性傳染性疾病之一，近年來全世界發(fā)病率明顯上升，每年有800萬新發(fā)病例，另有300萬人死于結核病。快速、可靠、特異性及敏感性高的檢測方法是早期診斷、合理化療、阻斷結核傳播的主要措施。本文通過全自動微生物快速檢測系統(tǒng)（BacT／ALERT 3D）檢測并與傳統(tǒng)的結核診斷方法涂片法進行比較，為結核的快速診斷提供新的檢測手段。

1 材料與方法

1.1標本來源于2010年1月至2010年5月本院收治的結核患者336例，留取各類標本檢測。

1.2材料與儀器BacT／ALERT 3D 儀，MB／BacT培養(yǎng)瓶，含生長因子的抗生素添加劑（MAS）生產商：歐嘉隆公司（Organon Teknika）公司。

1.3方法

1.3.1 標本前處理 取5～10ml標本于50ml離心管內，加入新鮮配制的與標本等量的N－乙酰L關胱氨酸（NALC）－NaOH溶液，振蕩混合直到標本完全液化，室溫放置15min后加入磷酸鹽（PBS）緩沖液至50ml，3 000g離心15min，棄上清，加入1ml PBS緩沖液振蕩成懸浮液。

1.3.2 BacT／ALERT 3D儀檢測 （1）在 MAS中加入10ml reconstituein flud溶解 MAS。（2）加0.5ml溶解的 MAS到 MB／BacT培養(yǎng)瓶中，再加入0.5ml處理后的懸浮液，經對培養(yǎng)瓶條碼掃描后放入BacT／ALERT 3D儀內自動檢測。

1.3.3涂片鏡檢取處理后的標本制成涂片，恒溫電熱板充分干燥，行萋尼氏染色，OLYMPUS生物顯微鏡檢測。

1.4統(tǒng)計學分析采用SPSS 13.0軟件完成統(tǒng)計學處理，計量資料以s表示，比較采用t檢驗，計數資料比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1檢測敏感度比較336例患者在住院期間均提供多種類型的標本進行結核病細菌學檢測。不同方法對不同標本的檢測敏感度不同，BacT／ALERT 3D儀檢測的陽性檢出率明顯高于涂片鏡檢法（P＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義），見表1。

表1 兩種方法對結核病人不同標本的檢測敏感度

2.2不同標本檢出率和檢測時間比較涂片鏡檢法在標本接受當天發(fā)布結果報告，BacT／ALERT 3D儀陽性檢出時間平均為14.1天，見表2。

表2 BacT／ALERT 3D儀不同標本的陽性檢出率和檢測時間

3 討論

結核桿菌的快速、準確診斷一直是結核病基礎應用研究的熱點問題。結核病細菌學檢測是發(fā)現傳染源的主要途徑和手段，是診斷結核病和確定化療方案的的重要依據。目前，結核病細菌學診斷主要是涂片和結核菌培養(yǎng)。結核分支桿菌抗酸染色涂片法是最廣泛使用的方法之一，該方法檢測速度快，價格低廉，能檢測出含菌量較高的標本，但是無法檢測出含菌量較低的標本，因此其檢出率較低，無法早期診斷結核病。細菌培養(yǎng)法敏感性高并可鑒定死菌與活菌，被譽為結核病診斷的“黃金標準”［1］。但傳統(tǒng)培養(yǎng)方法培養(yǎng)時間較長，且每周觀察一次培養(yǎng)基表面菌落生長情況，就容易造成人為的報告延誤［2］。近年來，結核病新診斷技術進展顯著，其中BacT／ALERT 3D全自動微生物快速培養(yǎng)檢測系統(tǒng)的應用可以有效提高培養(yǎng)效率，縮短培養(yǎng)時間有助于及時報告陽性結果。

BacT／ALERT 3D是第六代嶄新的全自動微生物快速檢測系統(tǒng)，也是血液培養(yǎng)和分支桿菌檢測系統(tǒng)的新標準。BacT／ALERT 3D全自動微生物快速培養(yǎng)檢測系統(tǒng)依靠CO2比色檢測裝置顯示培養(yǎng)系統(tǒng)中分支桿菌的生長情況。其培養(yǎng)瓶底部有顏色感應器，當培養(yǎng)瓶內有分支桿菌生長時，產生的CO2滲透至感應器經水飽和后產生氫離子（H＋）改變感應器的酸堿值且顏色也跟著改變由深綠色變?yōu)辄S色，儀器自動連續(xù)檢測，并且自動顯示有無分支桿菌生長［3］。具有自動化程度高、污染率低、陽性率高等特點。

BacT／ALERT 3D檢測法對結核分支桿菌的初代分離陽性率比常規(guī)方法提高了7%－18%［4，5］。

本實驗結核分支桿菌的陽性檢出率平均為39.9%，明顯高于涂片法的14.7%。雖然培養(yǎng)時間仍需2－3周，但如使用分支桿菌快速培養(yǎng)管可使陽性培養(yǎng)時間縮短至4－11天。BacT／ALERT 3D快速培養(yǎng)檢測系統(tǒng)不僅能檢測結核分支桿菌，同時還能進行藥敏實驗和菌型鑒定，是一種準確、簡便、快速的檢測結核分枝桿菌的方法。

［1］Medeeins Sans Frontieres Tuberculosis and drug sensitivity testing：an overview of the current diagnostic pipeline［J］.Geneva，Switzerland：2006，10.

［2］吳龍章，蔡興珊，吳幸怡，等.四種檢測方法對結合病臨床診斷價值的探討［J］.中華檢驗醫(yī)學雜志，2007，25（7）：742.

［3］胡忠義，勒安佳.結核分枝桿菌耐藥性檢測進展［J］.臨床肺科雜志，2000，5（2）：116.

［4］張力興，李京生，劉曉雪，等.BACTEC－460－TB與常規(guī)方法分離分枝桿菌藥物敏感試驗和菌型的初步鑒定［J］.中國防癆雜志，1992，14（2）：135.

［5］馬曙光，王 輝，王會善，等.BACTEC－460臨床運用于結果分析［J］.中國防癆雜志，1995，17（2）：161.