Folin-Ciocalteu比色法測定安化黑茶中茶多酚的含量

羅 堃，何 群，葛云鵬，譚 琥，鄒 龍，彭思源，劉朝勇

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南 長沙410208；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)科技處，湖南 長沙410208）

安化黑茶具有抗衰老、抗輻射、抗癌、降血壓、降低膽固醇、助醒酒、促消化、減肥、抑制動脈硬化等作用[1]。茶多酚是黑茶中的一類重要化學(xué)成分。現(xiàn)代研究表明，茶多酚具有抗氧化、抗腫瘤、抗動脈粥樣硬化、調(diào)血脂、降血糖、護(hù)齒和抑菌等多種作用，它在食品、醫(yī)藥、日化、保健等方面具有廣泛的應(yīng)用前景[2]。因此，茶多酚含量是評價黑茶品質(zhì)的重要指標(biāo)，建立黑茶中茶多酚含量的測定方法具有重要意義。

目前，用于測定茶多酚含量的方法主要有：滴定法、原子吸收分光光度法、可見分光光度法等[3]。本研究參考GB/T8313-2008，采用可見分光光度法測定黑茶中茶多酚的含量。Folin-Ciocalteu比色法測定其他種類茶葉中的茶多酚含量已有研究，但應(yīng)用于安化黑茶還未見報道。本研究建立了Folin-Ciocalteu比色法測定安化黑茶中茶多酚含量的方法，為黑茶及其加工品的質(zhì)量控制提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

HH-600型三用恒溫水浴箱（金壇市神科儀器廠）；DZF-6050型真空干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；SP-756型紫外可見分光光度計(jì)（上海光譜儀器有限公司）；AR124CN型電子天平（上海奧豪斯儀器有限公司）。

1.2 材料

沒食子酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號：110831-200302）；Folin-Ciocalteu（FC）試劑（合肥博美生物科技有限責(zé)任公司）；甲醇、無水Na2CO3（均為分析純）；水為蒸餾水；安化黑茶粗粉 (自制，含水量為1.5%，批號分別為20120107、20120110、20120113)。

2 方法與結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)原理[4-5]

堿性條件下，酚類物質(zhì)中的酚羥基能將Folin-Ciocalteu試劑中的鎢鉬酸還原，生成藍(lán)色配合物，顏色的深淺與多酚的含量正相關(guān)，以沒食子酸作對照品，用可見分光光度法測定，以控制茶葉中茶多酚的含量。

2.2 對照品溶液的制備

取沒食子酸對照品約0.05 g，精密稱定，加甲醇溶解，定容至50 mL，即得（濃度為0.098 6 mg/mL）。

2.3 供試品溶液的制備

取安化黑茶粗粉（過4號篩）約0.2 g，精密稱定，平行操作3份，置于離心試管中，加入預(yù)熱至90℃的水5 mL，90℃水浴保溫15 min，每隔3 min振搖1次，放冷，3 000 r/min離心10 min，取上清液，重復(fù)操作2次。合并3次上清液，濾過，精密量取濾液1 mL于100 mL量瓶中，加水定容至刻度，即得。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

分別精密量取0.5、1、2、3、4、5 mL對照品溶液置于6個100 mL量瓶中，加甲醇稀釋，即得4.93、9.86、19.72、29.58、39.44、49.30μg/mL的 沒 食 子 酸對照品溶液。再分別精密量取上述溶液和水各1 mL于10 mL具塞試管中，分別加入5 mL 0.2 mol/L FC試劑，振搖5 min，然后加入4 mL 7.5%Na2CO3溶液，振搖，25℃下分別反應(yīng)60 min后于765 nm處測定吸光度。以沒食子酸濃度（C）對吸光度（A）作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：

提示沒食子酸濃度在0.49～4.9μg/mL范圍內(nèi)與吸光度的線性關(guān)系良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批（批號為20120107）安化黑茶粗粉約0.2g，精密稱定（平行6份），按照“2.3項(xiàng)”方法制備供試品溶液后，精密量取3 mL置于100 mL量瓶中，加水定容至刻度，搖勻。再精密量取1 mL置于10 mL具塞試管中，按照“2.4項(xiàng)”下方法顯色后測定，按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算黑茶中茶多酚含量。計(jì)算，得該批黑茶（按干品計(jì)）中茶多酚含量按沒食子酸計(jì)[6]的平均含量為2.49%，RSD=2.6%。

2.6 加樣回收試驗(yàn)

取同一批（批號為20120107）安化黑茶粗粉約3 g，精密稱定（平行6份），置100 mL錐形瓶中，分別加入一定量的沒食子酸對照品，按“2.3項(xiàng)”下方法制備供試品溶液后，再按“2.5項(xiàng)”下方法進(jìn)行樣品處理、測定、計(jì)算結(jié)果（見表1）。茶多酚平均回收率為98.0%，RSD=1.4%，說明本方法結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.7 安化黑茶中茶多酚的含量測定

分別取3批安化黑茶粗粉約0.2 g，每批平行3份，依法測定，計(jì)算茶多酚含量。測得3批黑茶中茶多酚的平均含量（按沒食子酸計(jì)）為2.49%，RSD=1.3%，說明安化黑茶的質(zhì)量穩(wěn)定。

3 小結(jié)

3.1 測定條件和結(jié)果

本研究參考國家標(biāo)準(zhǔn)GB／T8313-2008中收載的茶葉中茶多酚的檢測方法，以沒食子酸為替代對照品，研究了FC試劑、7.5%Na2CO3溶液的用量和反應(yīng)時間對顯色反應(yīng)的影響以及吸收曲線，確定了安化黑茶中茶多酚含量測定的最佳條件為：0.2 mo1/L的FC試劑5 mL，7.5%Na2CO3溶液4 mL，25℃反應(yīng)1 h后于765 nm處測定吸光度。沒食子酸濃度在0.49～4.9μg/mL范圍內(nèi)與吸光度的線性關(guān)系良好，平均回收率為98.0%，RSD為1.4%。測得3批安化黑茶茶多酚的平均含量 （按沒食子酸計(jì)）為2.49%，RSD為1.3%。該方法準(zhǔn)確、可靠，可用于黑茶及其加工品中茶多酚的質(zhì)量控制。

3.2 對照品選擇的依據(jù)

茶多酚是一系列化合物的混合物，目前經(jīng)分離鑒定的化合物就達(dá)100多種，使得很難找到1種合適的對照品。因沒食子酸具有和茶多酚類似的多酚結(jié)構(gòu)，而且對照品價廉易得，顯色反應(yīng)穩(wěn)定可靠，方便采用。故本研究以沒食子酸作為替代對照品，采用操作簡便的比色法測定了黑茶中的茶多酚含量，同時也為其他含有多酚類成分的藥材的質(zhì)量控制提供了參考。

[1]何煜波，姜愛麗，胡文忠，等.黑茶加工工藝與保健功能研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（27）：13 595-13 597.

[2]何 健，印 偉.茶葉中茶多酚的提取工藝及其含量測定[J].中國藥業(yè)，2011，20（13）：31-32.

[3]黃 皓，毛志方，涂云飛，等.兩種方法測定茶葉中茶多酚含量的比較[J].中國茶葉加工，2009（2）：43-44.

[4]羅楊合.Folin-Ciocalteu法測定馬蹄皮中多酚的含量[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，48（9）：2 447-2 449.

[5]周順珍，周國蘭，何 萍，等.不同測定方法對綠茶中茶多酚含量測定結(jié)果的影響[J].化學(xué)分析計(jì)量，2011，20(1)：88-89.

[6]中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.GB/T8313-2008茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測方法[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008：3-5.