低分子肝素對兔動脈粥樣硬化易損斑塊模型血清CRP、IL-6的影響

胡大軍 劉劍萍 廖 昆 賀立新

(湘南學院心腦血管疾病研究所 郴州市人民醫院心內科，湖南 郴州 423000)

炎癥反應的激活可能是導致斑塊不穩定的主要因素〔1〕，炎癥因子可作為動脈粥樣硬化疾病的標志物〔2〕。研究顯示易損斑塊中的炎癥因子明顯增高〔3〕，同時降低炎癥因子可穩定動脈斑塊，改善預后。低分子肝素廣泛應用于急性冠脈綜合征患者，但低分子肝素對易損斑塊動物模型中的炎癥因子的影響未見報道，本研究探討低分子肝素在兔動脈粥樣硬化易損斑塊模型中對炎癥因子C反應蛋白(CRP)及白介素-6(IL-6)的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 購入34只雄性純種新西蘭大白兔(湘雅醫學院動物學部)，體重2.0～2.5 kg，月齡3～4個月。

1.2 動物模型制作及分組 34只雄性純種新西蘭大白兔飼養兩周高脂飼料后，行主動脈球囊內皮拉傷術，參考國內仲琳等〔4〕方法制作動脈粥樣硬化易損斑塊兔模型。戊巴比妥鈉經耳緣靜脈注射麻醉，在無菌條件下，于兔股動脈搏動最明顯處暴露股動脈，結扎遠心端，近心端備用。動脈夾夾住近心端股動脈，靠近遠心端結扎處作一動脈切口并導入4F無菌球囊導管，放開動脈夾并收緊下方細線，局部壓迫止血，將球囊導管插入15 cm左右，球囊用注射器推注10～15 ml空氣，往返回拉球囊3次損傷血管內皮，撤出導管和導絲，結扎股動脈并縫合傷口。陰性對照組麻醉固定，備皮，無菌條件下，暴露股動脈，但不作動脈切口，直接縫合皮膚。

觸發易損斑塊:動脈粥樣硬化模型制作成功后連續2 d分別給予2次藥物觸發，中國斑點蝰蛇毒(CRVV)0.15 mg/kg腹膜下注射，30 min后耳緣靜脈注射組胺0.02 mg/kg。對照組處理同上，動脈粥樣硬化組按上述給藥時間和部位給予同等劑量無菌生理鹽水注射。

34只易損斑塊模型兔為易損斑塊組(其中死亡3只)隨機分為易損斑塊模型對照組(n=7)、低分子肝素治療組(n=16)、辛伐他汀治療組(n=8)。低分子肝素治療組隨機分為B1組(8只)低分子肝素30 U/kg IH q12 h，B2組(8只)低分子肝素60 U/kg IH q12 h。辛伐他汀治療組灌胃給藥5 mg·kg－1·d－1。對照組同等劑量無菌生理鹽水皮下注射，q12 h，連續治療1 w。

1.3 標本收集與檢測 模型制作成功后2 d及治療后1 w空腹抽耳靜脈血5 ml，檢測血脂、血常規等指標，采用ELISA法檢測CRP、IL-6濃度(試劑購于晶美公司)。

1.4 統計學方法 采用SPSS11.0軟件。計量數據以表示，組間比較采用t檢驗，多組間均數比較采用方差分析。

2 結果

低分子肝素、辛伐他汀治療易損斑塊模型組CRP、IL-6的濃度同治療前比較明顯下降，同治療后易損斑塊模型對照組亦明顯下降(P＜0.05)。低分子肝素、辛伐他汀治療易損斑塊模型組CRP、IL-6的濃度差異無統計學意義(P＞0.05)，低分子肝素高劑量組CRP、IL-6的濃度較低劑量組下降明顯(P＞0.05)。見表1。

表1 藥物對兔易損斑塊模型中血清CRP、IL-6濃度的影響

表1 藥物對兔易損斑塊模型中血清CRP、IL-6濃度的影響

與同組治療前比較:1)P＜0.05;與模型對照組比較:2)P＜0.05，與B1組比較:3)P＜0.05

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3 討論

CRP是炎癥過程中最具有標志性的生化物質，被認為與動脈粥樣硬化的發生發展和預后有著密切的關系〔5〕。CRP多方面參與了動脈粥樣硬化機制，如能夠調節巨噬細胞攝入低密度脂蛋白，有助于泡沫細胞的形成;激活粥樣斑塊內的補體系統導致斑塊不穩定，增強不穩定性斑塊的血管活性等。CRP可以直接誘導動脈粥樣硬化的發展，因此CRP是心血管疾病的獨立危險因素〔6〕。

IL-6是炎癥反應中急性期細胞因子基因表達的主要調節因子，通過放大白細胞的集聚而起到對局部炎癥的刺激作用〔7〕。IL-6作為炎癥和巨噬細胞分化的主要調節因子在炎癥前發揮重要作用，促進激活巨噬細胞的分化和浸潤，促進泡沫細胞形成。IL-6還可上調黏附分子和其他細胞因子的表達，這些細胞因子可能具有潛在的促進炎癥反應的作用。

本研究顯示提示低分子肝素可能類似他汀類藥物，具有一定的抗炎作用，與國外研究顯示低分子肝素具有一定的抗炎特性一致〔8〕。有研究提示低分子肝素抗炎作用可能與以下幾個方面有關:①通過抗凝途徑介導的抗炎作用;②抗細胞黏附作用;③抗氧自由基作用;④抗脂質代謝紊亂作用;⑤抗細胞增殖作用〔9〕。本研究提示低分子肝素在治療急性冠狀動脈綜合征的病人中除了常規的抗凝作用外，同時具有降低炎癥因子CRP、IL-6濃度的作用，從而可起到穩定動脈粥樣硬化斑塊作用，有助于改善疾病預后。為低分子肝素治療急性冠狀動脈綜合征提供新的臨床用藥理論依據。

1 Hansson GK.Inflammation，atherosclerosis，and coronary artery disease〔J〕.N Engl J Med，2005;352(16):1685-95.

2 Kleemann R，Zadelaar S，Kooistra T.Cytokines and atherosclerosis:a comprehensive review o f studies in mice〔J〕.Cardiovasc Res，2008;79(3):360-76.

3 劉劍萍，胡大軍，劉慶武，等.炎癥因子在兔動脈粥樣硬化易損斑塊模型中表達研究〔J〕.湘南學院細胞(醫學版)，2011;13(4):1-3.

4 仲 琳，張 運，張 梅，等.兔動脈粥樣硬化易損斑塊模型的建立〔J〕.基礎醫學與臨床，2005;25(4):370-3.

5 Torzewski J.C-reactive protein and atherogenes is:new insights from established animal models〔J〕.Am J Pathol，2005;167(4):923-5.

6 Montecucco F，Mach F.New evidences for C reactive protein(CRP)deposits in the arterial intima as a cardiovascular risk factor〔J〕.Clin Interv Aging，2008;3(2):341-9.

7 Noto D，cottone S，Baldassare Cefalu A，et al.Int erleuk in-6 plasma levels predict with high sensitivity and specificity coronary stenosis detected by coronary angiography〔J〕.Thromb Haemost，2007;98:1362-7.

8 Maciejczyk PM，Polak G，Kotarski JSerum acute phase protein concentrations after hysterectomy with and without low-molecular-weight heparin thrombosis prophylaxis〔J〕.Acta Obstet Gynecol Scand，2005;84(8):752-5.

9 李丹丹，孟建中.低分子肝素的新作用-抗炎/抗細胞黏附機制的研究進展〔J〕.生物醫學工程研究，2008;27(2):133-6.