逍遙散及其配伍組方對阿爾茨海默病小鼠學習記憶的影響

王虎平 吳紅彥

(甘肅中醫學院基礎課部 甘肅省中藥藥理與毒理學重點實驗室，甘肅 蘭州 730000)

阿爾茨海默病(AD)已成為嚴重威脅老年人生活質量甚至生命健康的疾病之一。現代醫學對其發病機制認識不清，對癥性的治療根本不能滿足臨床的需求，于是，研究的方向轉向了中醫藥。本研究基于從肝論治AD，以調肝名方逍遙散干預氫溴酸東莨菪堿所致AD模型小鼠，探討逍遙散防治AD的作用及其機制，闡釋其疏肝、養血、健脾相結合的配伍機制。

1 材料與方法

1.1 主要材料 Y型水迷宮由甘肅中醫學院基礎醫學實驗中心自制;逍遙散組成生藥購于甘肅中醫學院附屬醫院;氫溴酸東莨菪堿注射液由上海禾豐制藥有限公司提供，批號:100101;超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒、乙酰膽堿酯酶(AchE)試劑盒、膽堿乙酰轉移酶(ChAT)試劑盒、單胺氧化酶(MAO)試劑盒及考馬斯亮藍蛋白測試盒均為南京建成生物化學試劑有限公司提供，批號:20100522;SPF級KM小鼠60只，體重(20±2)g，雌雄各半，由甘肅中醫學院科研實驗動物中心提供，合格證號:SCXK(甘)2004-0006-0000994。

1.2 方法

1.2.1 動物分組及給藥 KM小鼠隨機分為空白組、模型組、逍遙散全方組、疏肝養血組、疏肝健脾組、健脾養血組，每組10只。空白組與模型組小鼠每天灌胃生理鹽水0.2 ml/10 g，逍遙散全方組、疏肝養血組、疏肝健脾組、健脾養血組小鼠每天灌胃各組對應藥物水煎液0.2 ml/10 g。逍遙散方中各藥的劑量均按照2005版《中華人民共和國藥典》中逍遙丸劑量換算得到〔1〕，逍遙散全方組(柴胡、當歸、白芍、茯苓、白術、煨姜、薄荷、甘草)、疏肝養血組(柴胡、當歸、白芍、薄荷)、疏肝健脾組(柴胡、茯苓、白術、煨姜、甘草、薄荷)、健脾養血組(當歸、白芍、茯苓、白術、煨姜、甘草)小鼠每天灌胃生藥量分別為 2.485、1.136、1.775、2.059 g/kg。連續灌胃給藥10 d。

1.2.2 模型復制 給藥第6、8、10天，除空白組小鼠于灌胃1 h后腹腔注射生理鹽水0.2 ml·10 g－1外，其余各組小鼠分別于灌胃1 h后腹腔注射氫溴酸東莨菪堿0.02 mg·10 g－1復制AD模型。

1.2.3 Y型水迷宮實驗 給藥第6、8天，各組小鼠分別于腹腔注射20 min后使用甘肅中醫學院基礎醫學實驗中心自制Y型水迷宮進行學習能力訓練。給藥第10天，各組小鼠分別于腹腔注射20 min后進行記憶能力測試。水迷宮實驗中，小鼠從入水臂直接游至安全臂停靠臺為正確，進入另一臂則為錯誤。學習能力以達到連續9次正確所需的次數為指標，超過30次則記為30，每次達到安全臺的時間為潛伏時間;記憶能力以15次中正確的次數為指標，并記錄每次的潛伏時間〔2〕。

1.2.4 腦組織勻漿SOD、MDA、AchE、ChAT及MAO活性的測定 行為學指標測試結束后，處死動物，迅速取出腦組織，以生理鹽水制成10%的腦組織勻漿，用低溫離心機3 000 r/min離心15 min，吸取上清液，按試劑盒要求測定小鼠腦組織勻漿SOD、MDA、AchE、ChAT 及 MAO 活性。

2 結果

2.1 逍遙散及其配伍組方對AD模型小鼠學習能力及學習潛伏時間的影響 與空白組相比，模型組小鼠學習能力低下、潛伏時間較長，有顯著性差異(P＜0.01)。與模型組相比，逍遙散全方組及各配伍組方組均能提高小鼠學習能力、降低其潛伏時間，有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05);但以全方組最為明顯，與各配伍組方組相比，有顯著性差異(P＜0.05)。見表1。

2.2 逍遙散及其配伍組方對AD模型小鼠記憶能力及記憶潛伏時間的影響 與空白組相比，模型組記憶能力低下、潛伏時間較長，有非常顯著性差異(P＜0.01)。與模型組相比，逍遙散全方組及各配伍組方組均能提高小鼠記憶能力、降低潛伏時間，有顯著性差異(P＜0.01或P＜0.05);但以全方組最為明顯，與各配伍組方組相比，有顯著性差異(P＜0.05)。見表2。

表1 逍遙散及其配伍組方對AD模型小鼠學習能力及學習潛伏時間的影響，n=10)

表1 逍遙散及其配伍組方對AD模型小鼠學習能力及學習潛伏時間的影響，n=10)

與模型組相比:1)P＜0.05，2)P＜0.01;與逍遙散全方組相比:3)P＜0.05，表2～4同

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表2 逍遙散及各配伍組方對AD模型小鼠記憶能力及記憶潛伏時間的影響n=10)

表2 逍遙散及各配伍組方對AD模型小鼠記憶能力及記憶潛伏時間的影響n=10)

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2.3 逍遙散及其配伍組方對AD模型小鼠腦組織勻漿SOD、MDA活性的影響 與空白組相比，模型組小鼠腦組織SOD活性增高、MDA活性降低(P＜0.01)。與模型組相比，逍遙散全方組及各配伍組方組均能提高小鼠腦組織SOD活性、降低MDA活性(P＜0.01或P＜0.05);但以全方組最為明顯，與各配伍組方組相比，有顯著性差異(P＜0.05)。見表3。

2.4 逍遙散及其配伍組方對AD模型小鼠腦組織 AchE、ChAT、MAO活性的影響 與空白組相比，模型組小鼠腦組織AchE活性增高、ChAT活性降低(P＜0.01)。與模型組相比，逍遙散全方組及各配伍組均能提高小鼠腦組織SOD活性、降低MDA活性(P＜0.01或P＜0.05);但以全方組最明顯，與各配伍組相比差異顯著(P＜0.05)。見表4。

表3 逍遙散及各配伍組方對AD模型小鼠腦組織勻漿SOD、MDA活性的影響s，n=10)

表3 逍遙散及各配伍組方對AD模型小鼠腦組織勻漿SOD、MDA活性的影響s，n=10)

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表4 逍遙散及各配伍組方對AD模型小鼠腦組織勻漿AchE、ChAT、MAO活性的影響，n=10)

表4 逍遙散及各配伍組方對AD模型小鼠腦組織勻漿AchE、ChAT、MAO活性的影響，n=10)

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3 討論

現代醫學認為，AD的發病可能與基因突變、免疫功能紊亂、神經遞質改變、神經生長營養因子缺失等諸多因素有關，相應的治療多為膽堿酯酶抑制劑、抗氧化劑、神經營養因子、興奮性氨基酸等對癥給藥，根本不能滿足患者的臨床需求。中醫藥在AD的防治中取得了一定的成效。中醫學認為，AD主要在于腎、心、脾三臟功能的失調，總屬本虛標實，虛責之于年老體弱、五臟虛損、腦失所養;實責之于氣滯血瘀、痰濁內阻、蒙蔽腦竅，多以補益心腎，填精益髓，散血化痰，開竅醒神為治。

本課題組基于中醫基本理論和現代藥理研究，認為AD與肝功能的失調密切相關。經云:“肝者，將軍之官，謀慮出焉”，“肝者，罷極之本，魂之居也”。肝主疏泄，暢情志，藏陰血，司筋脈，為神魂之居，行為之主，與AD精神與行為兩方面的失常關系甚密。據此，我們提出了從肝論治AD的假說，并用調肝名方逍遙散系列開展了相關實驗研究，取得了良好效果〔3～5〕，為AD的從肝論治及其逍遙散的防治研究奠定了基礎。

本研究亦表明，逍遙散及其配伍組方皆能較好的改善AD模型小鼠學習記憶、抗氧化及中樞神經遞質活性，對AD有較好的防治作用，更加確立了AD從肝論治的正確性及“調肝”治法的有效性;各組指標皆顯示逍遙散全方組明顯優于其他配伍組方組，充分體現了逍遙散中疏肝、養血、健脾三者結合的配伍結構與氣血同調，體用并治，補瀉兼施的協同功用對防治AD的有效性及科學性，為AD提供了新的論治方法和組方思路。至于逍遙散防治AD的深層機理有待進一步探討。

1 中華人民共和國藥典2005年版〔M〕.北京:化學工業出版社，2005:564.

2 陳 勤.抗衰老研究實驗方法學〔M〕.北京:中國醫藥科技出版社，1996:94.

3 吳紅彥，王虎平.逍遙散及其拆方對癡呆模型小鼠學習記憶能力及抗氧化能力的影響〔J〕.中國實驗方劑學雜志，2009;15(10):102-4.

4 吳紅彥，王虎平.以肝脾論治老年性癡呆及逍遙散對老年癡呆模型小鼠學習記憶能力、中樞膽堿能神經元活性的影響〔J〕.中國實驗方劑學雜志，2010;16(5):168-70.

5 吳紅彥，王虎平，王彩霞.黑逍遙散對老年性癡呆的防治作用及其機制研究〔J〕.時珍國醫國藥，2011;22(4):912-3.