國產與進口吲達帕胺片在健康人體的生物等效性分析

潘學智

吲達帕胺是一種具有利尿作用和鈣拮抗作用的藥物，是新型的抗高血壓藥物，對血管平滑肌的選擇性比較高[1]，可以降低血管外周阻力；還可以通過抑制腎皮質稀釋段對鈉的重吸收[2]，增加尿鈉和尿氯的排出量，因此，增加了尿量，發揮了抗高血壓作用。吲達帕胺是一種用量小、副作用少、療效顯著、價格經濟實惠的新型抗高血壓藥物[3]，屬于二氫吲哚類利尿藥，方便長效，對心血管系統有保護作用，不致引起體位性低血壓、心動過速和潮紅，尤其對輕度和中度高血壓療效比較好。對樣品中吲達帕胺的測定方法已有許多報道，由于吲達帕胺在紅細胞中的分布比較多，因此，測定全血中吲達帕胺的含量已成為研究藥代動力學的首選方法。本試驗以進口吲達帕胺作為參比試劑，國產片作為受試試劑，采用HPLC-MS/MS分析方法測定血漿中吲達帕胺濃度在健康人體中藥代動力學，為臨床用藥提供合理的依據。

1 資料與方法

1.1 受試者選擇 6 0 名健康男性受試者，平均年齡（2 5.5±5.8）歲，平均身高（1.7 3±0.0 6）m，平均體重（65.7±7.2）kg，民族均是漢族。所有受試者通過體格檢查和實驗室檢查（血常規、尿常規、心電圖、肝功能、腎功能），未發現肝、心、脾、肺、腎、消化道、神經系統和代謝異常以及精神異常等疾病，經詢問也沒有既往病史，身體狀況良好。在進行試驗前的一個月以及實驗期間沒有服用過其他任何藥物，也沒有吸煙、酗酒等不良嗜好[4]。此次指定的實驗方案經白求恩國際和平醫院醫學倫理委員會批準通過，且所有受試者均簽署了知情同意書。

1.2 藥品、試劑與儀器的選擇 受試制劑：吲達帕胺片，批號：081010，規格：2.5 mg/片，由北京國藥集團股份有限公司生產；參比制劑：吲達帕胺片，批號：687669，規格：2.5 mg/片，由法國施維雅藥廠生產；吲達帕胺標準品，批號：100257—200002，含量99%，由濟南市高華制藥廠提供；瑞格列奈鈣對照品(內標)，批號：100753—200501，由中國藥品生物制品檢定所提供。甲醇為色譜純，甲酸、乙酸乙酯為分析純，實驗用水為市場上銷售的純凈水；空白人血漿由白求恩國際和平醫院采供血中心提供。儀器 1100 型高效液相色譜儀,包括: 四元輸液泵、在線脫氣機、柱溫箱和自動進樣器,配備HP 1049 電化學檢測器，美國Agilent公司產品;API-4000 型三重四級桿串聯質譜儀和Analyst 1.4軟件, 美國ABI公司產品。BP 211 D型十萬分之一天平,德國Sartorius公司產品;XW-80 A旋渦混合器,上海精科實業有限公司產品; 80-2 型離心機,姜堰市新康醫療器械有限公司產品。

1.3 給藥方法以及樣品采集 采用自身對照隨機交叉試驗的方法，將60 名受試者隨機分為兩組，按照不同的順序先后給予國產和進口吲噠帕胺片，兩次用藥間隔一周進行清洗。受試者在試驗的前一天晚上進食清淡飲食以后，夜里禁食10 h，試驗的當天早晨空腹服藥，用溫開水500 mL送服2.5 mg的吲噠帕胺片，服藥2 h以后可以飲水，服藥4 h以后統一進食標準午餐，10 h以后統一進食標準晚餐。給藥前及給藥后0.5 h，1 h，1.5 h，2 h，2.5 h，3 h，4 h，6 h，8 h，12 h，

24 h，48 h，72 h時間點取肘靜脈血約5 mL，放于被肝素化的試管中，6000 r/min離心10 min，分離血漿，于-50℃進行保存直至測定用。停藥一周以后，進行交叉實驗。

1.4 血樣品的測定 血漿樣品的預處理：用精密儀器量取血漿樣品40 mL，放于1.5 mLEP的試管中，加入內標工作液(瑞格列奈鈣乙腈溶液)40 (μL，渦旋混合均勻，加入乙腈300 mL，渦旋混合均勻，1×104r/min，4℃低溫離心10 min，取上清液4μL樣，-50℃下氮氣吹干，最后進行HPLC—MS／MS分析。

2 方法學考察與評價

2.1 專屬性 在設定好色譜的情況下進行測量，空白血漿中的內源性物質不影響吲噠帕胺的測定，吲噠帕胺的保留時間約為6 min。

2.2 標準曲線制備 將吲噠帕胺標準液用空白血漿稀釋成不同濃度的標準血樣，按照樣品的處理方法進行處理，以樣品的峰面積與內標峰面積之比對藥物濃度進行回歸處理。

2.3 回收率及精密度 配制濃度為1.73 ng/mL、16.2 ng/mL、86.4 ng/mL的吲達帕胺標準血漿各5 份，按上法平行操作進行測定，得到的日內相對標準差均＜15%，平均相對回收率分別為91.9%、98.8%和101.2%。經過處理以后，血樣在24 h內比較穩定。每天配置以上濃度的血漿，連續測量幾天，得到的日間相對標準差均＜15%。

3 統計學方法

應用SPSS 11.0 和DAS 10 軟件進行數據分析。AUC用梯形面積法計算;Tmax和Cmax為實測值。

4 結果

4.1 血藥濃度時間關系 經測量繪圖得出，60 名健康志愿者單劑量口服試驗制劑和參比制劑后的平均濃度時間曲線相似。

4.2 藥代動力學參數 60 名受試者單劑量服用兩種藥以后，其血藥濃度時間關系用相關軟件處理以后，得到的藥代動力學參數見表1。

表1 60 名受試者單劑量服用兩種藥物的藥代動力學比較

4.3 生物等效性評價 對AUC和Cmax進行方差分析和單側t檢驗。受試制劑AUCo∞m的90%可信區間為124.4%～110.4%，AUCo∞的90%可信區間是101.8%～111.2%，均在參比試劑的80%～120%以內；受試制劑的Cmax 90%可信區間為95.5%～110.3%，在參比制劑的75%～140%之間。實驗結果表明受試制劑與參比制劑在生物學上等效。

5 討論

經過參考有關的文獻報道，本研究采用HPL-MS/MS法，測定健康人血漿中吲噠帕胺的濃度，方法簡單易行，其中，精密度、準確度、特異度和靈敏度均符合藥代動力學研究的指導原則和分析生物藥品的要求[5]，所得的藥代動力學參數可以為吲噠帕胺的研究提供參考。在本次實驗建立色譜條件下，吲噠帕胺以及內標的測定，均不受血漿中內源性物質的干擾，其中精密度和回收率均能達到生物樣本測定的要求。

本研究采用的是HPL-MS/MS法，測定了60 例成年健康男性受試者自身交叉口服單位劑量口服參比制劑（進口的吲達帕胺片）和受試制劑（國產的吲達帕胺片）2.5 mg后的血漿藥物濃度。兩種制劑在成年男性健康者中的代謝過程基本相似，所得到的全血中吲達帕胺的血藥濃度及主要藥代動力學參數與國外報道的文獻基本相似。實驗所得到的藥代動力學參數經過方差分析，經過比較兩者差異沒有統計學意義（P>0.05）；經過生物等效性分析，表明進口吲達帕胺片與國產吲達帕胺片在體內吸收、分布與消除的過程基本相似，兩種制劑為生物等效制劑。而且在試驗過程中未發現不良反應。

[1]夏春華，王曉華，熊玉卿，等.高效液相一質譜法測定人體血漿中吲達帕胺的濃度及其生物等效性研究[J].中國現代應用藥學雜志，2007,24(2)：136-138.

[2]佟玲，齊丹丹，畢開順，等.高效液相色譜一串聯質譜法測定人血漿中吲達帕胺及其生物等效性研究[J].中國新藥與臨床雜志，2006,25（11）：851-855.

[3]金智敏.吲噠帕胺對高血壓高危患者血清肌酐、尿酸、血鉀及左室肥厚的長期影響[J].高血壓雜志,2002,13(3):235-239.

[4]陳端霞,游凱,傅如南,等.人血清中吲達帕胺的高效液相色譜法測定[J].中國醫學科學院學報,2005,12(4):286-289.

[5]鐘大放.以加權最小二乘法建立生物分析標準曲線的若干問題[J].藥物分析雜志，1996,16（5）：343-346.