脫氫表雄酮誘導SD大鼠多囊卵巢綜合征模型的實驗研究

[摘要] 目的 運用脫氫表雄酮誘導SD幼年大鼠多囊卵巢綜合征（PCOS）模型，并在藥物注射劑量上對文獻報道方法進行改良，研究模型的卵巢形態學和性激素等改變。 方法 采用23日齡SD雌大鼠，造模組每日皮下注射濃度為30 mg/mL的脫氫表雄酮，注射量為0.2 mL/100 g體重，連續注射20 d后。禁食于第21天測空腹血糖，處死測激素FSH、LH、T。結果 造模組體重顯著高于對照組（P<0.05）。造模組卵巢呈多囊樣改變、閉鎖卵泡增多，閉鎖卵泡直徑明顯大于對照組。造模組血清T、FSH、空腹血糖水平明顯高于對照組（P<0.05）。 結論 脫氫表雄酮誘導的多囊卵巢綜合征模型的卵巢病理改變和激素改變與PCOS患者相似，是研究多囊卵巢綜合征比較理想的模型。

[關鍵詞] 脫氫表雄酮；多囊卵巢綜合征；造模

[中圖分類號] R332 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）07-35-03

多囊卵巢綜合征（polycystic ovarian syndrome，PCOS）是一種發病多因性、臨床表現呈多態性的內分泌綜合征，以雄激素過多和持續無排卵（chronic anovulation）為臨床主要特征，育齡婦女中PCOS的患病率為5%～10%，是導致生育期婦女月經紊亂最常見的原因之一[1]。PCOS發病機制非常復雜，至今尚無定論，涉及到多系統多因素，成為近年來的研究熱點。目前，PCOS的動物模型比較多，筆者經過大量文獻檢索對比，認為現階段以脫氫表雄酮（dehydroepiandrosterone，DHEA）為造模藥物誘導SD大鼠的PCOS模型較為成功，筆者在張曉薇等[2]造模試驗的基礎上加以改進，同樣達到造模效果，且更易于實際操作。

1 資料與方法

1.1 實驗動物

20日齡SD清潔級雌大鼠24只，由成都達碩生物科技有

限公司提供，合格證號：SYXK（川）2008-24，體重為52～84 g不等，按體重由小到大編號，用隨機數字表隨機分為造模組、對照組，每組12只。

1.2 實驗條件

實驗場所為成都中醫藥大學附屬醫院藥理實驗室，實驗動物使用許可證號為：SYXK（川）2008-028，溫度22～24℃，濕度65%～75%，清潔飼養，給水充分，環境安靜，實驗室環境符合清潔級動物飼養要求。

1.3 藥物和試劑

脫氫表雄酮（DHEA）購自武漢遠城科技發展有限公司，促卵泡生長激素（follicle stimulating hormone，FSH）酶聯免疫檢測試劑盒、促黃體生成激素（luteinizing hormone，LH）酶聯免疫檢測試劑盒、睪酮（testosterone，T）酶聯免疫檢測試劑盒、注射用茶油均購自成都亞芯科技有限公司。

1.4 實驗方法

所有大鼠在20日齡斷奶，喂以顆粒飼料，適應性喂養3 d，從23日齡開始造模。

參考張曉薇等[2]造模方法，該方法注射DHEA用量為6 mg/（100g體重·d）+0.2 mL注射用油劑，溶劑用量始終保持0.2 mL不變，但DHEA用量每天每只大鼠均不同，所以注射液濃度不斷變化。故在實際操作中，每天每只大鼠均需稱量不等的DHEA單獨配制不同濃度的注射液，且DHEA溶解度低，僅微溶于油劑，每配制一支注射液需花較長時間待其溶解，故該造模方法在較大樣本量的實驗中可操作性較差。

筆者遂嘗試對DHEA注射液的配制進行調整。按原方法DHEA 6 mg/（100g體重·d）+0.2 mL注射用油劑來換算，100 g體重大鼠應配制注射液濃度為6 mg/0.2 mL，即30 mg/mL，將此作為DHEA注射液的標準濃度，注射量按0.2 mL/100 g體重來計算。這樣，注射液濃度保持恒定，可提前配制待DHEA溶解均勻，按不同大鼠重量抽吸不同體積的注射液即可。與原造模方法相比，DHEA用量一致，注射液濃度恒定便于配制和操作，注射液用量根據體重來變化。

從大鼠23日齡開始，造模組每日上午于頸背部皮下注射DHEA溶液（溶于注射用茶油，濃度為30 mg/mL，注射量為0.2 mL/100 g體重），對照組皮下注射油劑，注射量為0.2 mL/100 g。連續注射20 d。經測量，從23～43日齡，SD雌大鼠體重約為50～150 g，故注射液用量約在0.1～0.3 mL間浮動。

1.5 標本獲取及指標檢測

注射第20天，于當晚8時禁食不禁水，第21日早8時測空腹血糖，處死測FSH、LH、T。取雙側卵巢稱重，雙側卵巢做病理切片，HE染色，觀察卵巢大體解剖及光鏡改變，測量卵巢發育卵泡、閉鎖卵泡及囊狀卵泡直徑。

1.6 統計學處理

數據采用SPSS16.0統計軟件包處理，兩組間對比用的是t檢驗，計量資料數據以（）表示。

2 結果

2.1 一般情況

實驗前，兩組大鼠均發育正常，皮毛潤澤，行為、體征無明顯差異，反應靈敏。實驗后，造模組與對照組相比皮毛顯凌亂骯臟，造模組有幾只尾部受傷，推測為打斗所致。兩組大鼠實驗過程中均有死亡，造模組死3只，對照組死2只，剔出實驗。實驗結果顯示，兩組大鼠實驗前體重無統計學差異，實驗后，造模組大鼠的最后體重和增長體重明顯高出對照組，差異具有統計學意義（P<0.05）。見表1。

3 討論

多囊卵巢綜合征是育齡期女性月經紊亂、不孕的常見原因，其病因病理非常復雜，發病機制至今未研究清楚。建立良好的動物模型對研究PCOS的發病機制和治療方法至關重要。目前，國內外對PCOS已建立了多種造模方法，有雄激素造模法[2-4]、雌激素造模法[5-6]、孕激素聯合HCG造模法[7]、胰島素聯合HCG造模法[8]、芳香化酶抑制劑造模法[9]等，但這些造模方法都還不成熟完善，無法完全模擬臨床上PCOS患者發病。這是由于對PCOS的發病機制不明確，又要將其引入到動物模型的困難性所致。本-研究選取了目前比較認可的DHEA造模法來進行驗證。該模型最大的優點在于下丘腦-垂體-卵巢軸保持完整，且對人絨毛膜促性腺激素（HCG）、妊馬雌酮（PMSG）和黃體生成激素釋放激素（LHRH）具有反應性。該模型的缺陷是，由于持續給予DHEA而導致大鼠體內DHEA和雄稀二酮的水平升高，從而難以區分內源性和外源性的雄激素，使一些研究體內雄激素變化的實驗受到干擾[10]。

通過DHEA造模實驗發現，造模組的最后體重和增長體重比對照組明顯增高，符合人類PCOS特征，即50%的患者出現肥胖（體重指數≥25）。造模組的卵巢重量增加但不具有統計學差異，推測與大鼠卵巢太小，難以精確剝離有關。造模組的T和空腹血糖較對照組明顯增高，符合PCOS臨床特征，但造模組FSH升高、LH降低與PCOS不符。從卵巢病理來看，造模組的卵巢出現大量閉鎖卵泡，且閉鎖卵泡直徑較大，卵巢呈多囊樣改變，與PCOS的卵巢病理改變特征相類似。

綜上所述，故認為DHEA造模法符合PCOS的卵巢特征性改變和主要內分泌變化，是研究PCOS較為理想的模型。本文的造模方式參考以往的報道，在藥物注射用量上做了一些改進，使操作更加便捷，同時不影響造模效果，可加以推廣。

[參考文獻]

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（收稿日期：2013-03-18）