替米考星納米乳對小白鼠急性毒性試驗的研究

李向輝　王巖　歐陽五慶

摘要：為了評價替米考星納米乳（Tilmicosin nanoemulsion）的安全性，進行了小白鼠口服急性毒性及半數致死量（LD50）的測定。結果表明，替米考星納米乳的LD50為2 260.4 mg/kg，LD50的95%可信限為2 094.5～2 456.5 mg/kg。因此具有較低的口服毒性，對內臟器官無病理損害作用，獸醫臨床使用比較安全，適合用于口服給藥。

關鍵詞：替米考星納米乳；小白鼠；急性毒性

中圖分類號：S859.83 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）06-1383-03

替米考星（Tilmicosin）是一種半合成的大環內酯類畜禽專用廣譜抗生素，它為泰樂菌素的衍生物，其抗菌譜與泰樂菌素相似，對革蘭氏陽性菌及部分革蘭氏陰性菌、霉形體、螺旋體等均有很強的抑制作用[1]，尤其對胸膜肺炎放線桿菌、畜禽巴氏桿菌及支原體作用最強[2]。然而替米考星在水中溶解度低，吸收不完全，生物利用度低，體內半衰期短。替米考星納米乳（Tilmicosin Nanoemulsion）是將傳統抗菌藥物替米考星以納米乳為藥物載體研制而成的一種新型納米制劑，在獸醫臨床上有望用于家畜肺炎、禽慢性呼吸道病及奶牛乳腺炎的防治。為了進一步探討替米考星納米乳的安全性，本研究采用小白鼠急性毒性試驗來考察替米考星納米乳的安全性，為該藥在獸醫臨床合理、有效的利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要藥品及試劑 吐溫-80（化學純），天津市致遠化學試劑有限公司生產；乙醇，中國醫藥集團上海化學試劑公司生產；肉豆蔻酸異丙酯（IPM），購自陜西省醫藥公司；替米考星原料藥，購自于山東齊魯制藥有限公司；蒸餾水，實驗室自制。

1.1.2 試驗動物 昆明系小白鼠（18～22 g，雌雄各半），由第四軍醫大學試驗動物中心提供，小白鼠常規飼養管理，溫度18～22 ℃，相對濕度50%～70%。

1.2 方法

1.2.1 替米考星納米乳的制備 按照文獻[3]的方法制備替米考星納米乳。以吐溫-80為表面活性劑、乙醇為助表面活性劑、IPM 為油相，按照替米考星 5.5%、無水乙醇 18.5%、吐溫-80 27.5%、IPM 5.0%、蒸餾水 43.5%（以上各組分含量均為質量分數）的比例。先稱取適量的替米考星溶解于助表面活性劑，充分溶解后加入表面活性劑，攪拌均勻，再緩慢加入油相，最后在磁力攪拌器的作用下逐滴地滴加蒸餾水，并觀察溶液狀態，溶液由澄清變渾濁，繼續滴至溶液至澄清透亮狀態，即制成了5.5%的替米考星納米乳。

1.2.2 急性毒性試驗

1）預試驗。預試驗按簡化寇氏法設計[4，5]。首先取32只小白鼠按體重隨機分4組，每組8只，雌雄各半進行編號。采用空腹按體重1次口服給藥，最大劑量不超過1 mL。將替米考星納米乳用蒸餾水稀釋后，按等差數列從小到大配成不同濃度的稀釋液，分4個劑量組，每組1個劑量分別灌胃給藥，給藥后觀察10 d，觀察中毒癥狀并記錄死亡數。找出替米考星納米乳能使小鼠全部死亡的最小劑量（Dm）和能使小鼠全部存活的最大劑量（Dn）。

2）正式試驗。根據預試驗結果設計正式試驗。取56只小白鼠按體重隨機分7組，每組8只，雌雄各半進行編號，注射劑量換算成替米考星原料藥依次為1 600、1 800、1 910、2 120、2 450、2 620、2 800 mg/（kg·bw）。計算替米考星納米乳相鄰兩組劑量比r=■，其中a為分組數，根據預試驗所得的最小劑量（Dm）和最大劑量（Dn）及以上公式，算出各組小鼠的用藥劑量，以此劑量組對小白鼠灌胃給藥[6，7]。給藥后觀察10 d，記錄各組的死亡數，剖檢全部供試小鼠，觀察并記錄內臟器官的病理變化情況。將試驗結果數據代入Bliss軟件或簡化寇氏法公式，求出替米考星納米乳的半數致死量（LD50）和95%可信限。

2 結果與分析

替米考星納米乳對小白鼠的急性毒性試驗結果見表1。

經預試驗測得替米考星納米乳的毒性劑量范圍約為1 750～3 020 mg/（kg·bw），相鄰兩組較合適的劑量比為r≈1.067。

采用簡化寇氏法對替米考星納米乳在小白鼠上進行了口服急性毒性試驗，根據Bliss軟件計算出替米考星納米乳的LD50為2 260.4 mg/（kg·bw），95%可信限為2 094.5～2 456.5 mg/（kg·bw）。

小鼠死亡多發生于給藥后1.5～2.0 h。主要癥狀為四肢無力、運動失調、嗜睡等。對死亡小鼠進行剖檢，除可見急性死亡大劑量組小鼠胃稍膨脹外，其他臟器未見有明顯異常。對存活小鼠10 d后稱重，體重增長正常，剖檢各內臟器官均未發現異常病理變化。

3 小結與討論

藥物的安全性評價是研究、開發新藥的一個重要環節，為新藥的上市提供全面客觀的依據。安全性評價的目的在于了解藥物單次或短時間多次給藥后，動物所產生的毒性反應及其嚴重程度，為臨床安全用藥及監測提供一定的參考[5]。試驗結果表明，替米考星納米乳口服的LD50為2 260.4 mg/（kg·bw），根據WHO頒布的化學物質的急性毒性分級標準劇毒（LD50﹤1 mg/（kg·bw））、高毒（1～50 mg/（kg·bw））、中毒（51～500 mg/（kg·bw））、低毒（501～5 000 mg/（kg·bw））和微毒（5 001～15 000 mg/（kg·bw））[8，9]可知，替米考星納米乳屬于低毒級藥物。目前已報道的國產替米考星的口服半數致死量（LD50）為2 071 mg/（kg·bw），95%可信限為1 932～2 219 mg/（kg·bw）[3]。雖然也屬于低毒級藥物，但替米考星納米乳與其相比進一步降低了替米考星的毒性。

試驗發現5%～8%的小白鼠在口服替米考星納米乳后5 min內死亡。剖檢可見除胃有些膨大外，其他臟器均未見異常。分析原因可能與過敏反應或心動過速有關[1]，對這一部分小鼠隨即進行了補做，未計算入試驗結果內。對死亡小鼠統計結果表明，大劑量組小鼠多在口服替米考星納米乳后30～40 min左右死亡，剖檢發現小鼠胃有些膨大，其他臟器未發現異常。對存活10 d的小鼠稱重，體重增長正常，剖檢均未發現任何臟器有異常變化。表明口服替米考星納米乳對小鼠內臟器官無病理損害作用。

試驗結果表明，替米考星納米乳的口服急性毒性非常低，LD50為2 260.4 mg/kg，95%可信限為2 094.5～2 456.5 mg/kg。本研究制備的替米考星納米乳具有較低的口服毒性，對內臟器官無病理損害作用，獸醫臨床使用比較安全，適合用于口服給藥。

參考文獻：

[1] 孫永學，陳杖榴. 替米考星在獸醫臨床上應用的研究概況[J].獸藥與飼料添加劑，2002，7（6）：22-25.

[2] FODOR L，REEVE J L，HODGE A，et al. Efficacy evaluations of the use of oral tilmicosin in pneumonic calves[J]. Veterinary Journal，2000，159（2）：194-200.

[3] 李向輝，歐陽五慶，楊雪峰，等. 替米考星納米乳的制備及其質量評價[J].西北農林科技大學學報（自然科學版），2009，37（4）：42-46.

[4] 孫紅武，歐陽五慶.黃連素口服納米乳的研制、質量及安全性評價[J].上海交通大學學報（農業科學版）， 2007，25（1）：60-65.

[5] 何 慶，夏忠玉. 冰片口服制劑安全性的試驗研究[J].中國藥師，2006，9（5）：419-421.

[6] 朱蓓蕾. 動物毒理學[M]. 上海：上海科學技術出版社，1983.

[7] 張桂枝，羅永煌，李 競，等. 復方磺胺間甲氧嘧啶緩釋型注射液的毒性研究[J]. 中國獸醫醫藥雜志，2005（3）：36-37.

[8] GOHEL M C，AMIN A F. Formulation optimization of controlled release diclofenac sodium microspheres using factorial design[J]. Controlled Release，1998，51（2-3）：115-122.

[9] 王壯成，王世祥，蔡東興. 應用乳酸環丙沙星配合催產素治療奶牛慢性子宮內膜炎的臨床觀察[J].寧夏農林科技，2004（6）：61-62.