不同產地苦茶槭嫩芽清除自由基活性比較研究

李繼武　鄭秀文

摘 要：苦茶槭嫩芽是安徽傳統皋茶生產的主要原料，含有很強的具清除自由基作用的活性物質。為了研究比較安徽省內不同產地的苦茶槭嫩芽清除自由基的活性，分別在黃山、萬佛山、瑯琊山、霍山和大蜀山各選擇5株具代表性的苦茶槭樹進行采樣分析，結果發現5個采樣點的苦茶槭嫩芽對DPPH自由基的清除作用活性差異不顯著，表明在安徽省內，原料產地不是影響皋茶清除自由基活性的主要因素。研究還發現不同供試單株的自由基清除率有較大差異，在25株采樣單株中，其活性最強的單株鮮樣清除自由基活性比最弱者強9.7%，表明高活性單株選擇具有較大潛力。

關鍵詞：苦茶槭；皋茶；清除自由基活性；產地；安徽省

中圖分類號 S571.1 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2013）08-08-03

苦茶槭（Acer ginnala Maxim. subsp. theiferum （Fang） Fang）是茶條槭（Acer ginnala Maxim）的亞種[1-2]，與原種的主要區別僅在于苦茶槭的葉較薄（為薄紙質）不分裂或不明顯3～5裂，而原種茶條槭葉片較厚（紙質）常較深的3～5裂。苦茶槭主要分布于黃河以南地區，茶條槭主要分布于黃河以北地區[1-2]。雖然早在2 000多年前，安徽皖南山區的百姓就將野生的苦茶槭嫩芽葉加工成茶飲用，并至今仍作為保健茶在市場少量銷售，被稱作“皋茶（高茶）”，有降壓和清肝明目等作用，同時具有消除夏天黃汗的作用，并曾長期在江浙一帶作為繅絲工人夏季的特殊飲料[2-5]，但一直沒有正式申報相關產品，而其原種茶條槭早在2 000年就申報批準為保健茶（衛食健字（2000）批號0589）。現代大量研究表明苦茶槭和茶條槭的嫩芽主要含有多酚類，包括沒食子槭糖酯和黃酮類等成分，藥理活性主要為清除自由基、抗氧化、抗腫瘤、降糖和抗菌等作用[6-14]。由于安徽是苦茶槭的主要分布區，又是皋茶的起源地，為了進一步摸清安徽皋茶優質種質資源，打造安徽苦茶品牌，筆者對安徽省不同產地的苦茶槭嫩芽的清除自由基活性進行比較研究，為皋茶生產及相關產品申報提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗樣品 苦茶槭樣品分別采自黃山湯口（林緣，海拔430～580m）、瑯琊山（林緣，海拔170～230m）、萬佛山（林緣，海拔400～510m）、霍山大花坪（林緣，海拔300～390m）和合肥大蜀山（林緣，海拔120～160m）。每個采樣點選擇5株生長良好的苦茶槭樹進行采樣，采樣日期為4月中旬。樣品為樹冠外層當年生嫩芽（包括一個芽尖和兩片稍張開的新葉）。采樣后立即放入自封袋中，并在3h內帶回，放入4℃冰箱內暫存。

1.1.2 儀器和藥品 主要儀器：感量為0.1mg的電子天平（上海分析儀器廠）；HIQ-F160恒溫震蕩培養箱（哈爾濱市東聯電子技術開發有限公司）；Spectra Max M2酶標儀（美國Molecular Device公司）；電熱鼓風干燥箱（南京實驗儀器廠）。主要化學藥品：二苯基苦基苯肼自由基（1，1-diphenyl-2- picryhydrazyl radical）從Sigma公司購得，甲醇等試劑都為國產分析純試劑。

1.2 方法

1.2.1 樣品制備 采集的樣品帶回實驗室后快速磨碎，迅速用電子天平稱取30mg～60mg于1.5mL Eppendorff管中，并立即按20μg/mL加入80%的甲醇，于25℃振蕩提取24h，取上清液用80%甲醇分別稀釋到1.00、0.80、0.60、0.40和0.2mg樣品/mL備用。同時精確稱取每種樣品3份于恒重的Eppendorff管中，于105℃烘至恒重進行含水率的測定。

1.2.2 自由基清除劑的測定 加不同濃度的樣品溶液100mL和1mM DPPH試液100μL于96孔酶標板中（樣品實際反應質量濃度分別為0.500、0.400、0.300、0.200、0.100mg/mL）。樣品加入后震蕩10s，在37℃保溫10min后于517nm波長下測定其吸光值（Ap），同時測定不加DPPH的樣品空白吸收值（Ac）和加DPPH但不加樣品（以100μL80%甲醇代替樣品）的吸收值（Amax）。最后按下列公式計算自由基清除率，并計算回歸方程和半數清除濃度（EC50）。

自由基清除率（%）=[1-（Ap-Ac）/Amax]×100

2 結果與分析

按照自由基清除率的測試方法，對5個產地25株苦茶槭嫩芽的80%甲醇提取物的自由基清除率進行測定，結果見表1。

從表1可看出不同產地的苦茶槭嫩芽都具有較強的清除自由基活性。絕大部分供試樣品鮮葉對DPPH自由基的半數清除濃度都在0.3mg/mL以下，換算成干樣的半數清除濃度都在0.1以下。但是不同苦茶槭的清除自由基活性并不完全相同，如Dku-3的鮮樣在濃度為0.278mg/mL時，其80%甲醇提取物就可清除50%DPPH自由基，而HKu-2需要0.305mg/mL鮮葉才能清除同樣量的自由基，前者的清除自由基活性比后者強9.7%。從不同產地苦茶槭清除自由基活性的平均值來看，不同產地苦茶槭清除自由基活性有一定差異，其中鮮樣清除自由基活性最弱的是瑯琊山苦茶槭（0.294mg/mL），最強的是霍山苦茶槭（0.289mg/mL）。換算成單位干重樣品的半數清除濃度后，霍山苦茶槭對DPPH自由基的清除濃度仍最低（0.084mg/mL），瑯琊山和大蜀山的苦茶槭對DPPH自由基的清除濃度都較高（0.088mg/mL）。

為檢驗不同產地苦茶槭樣品清除自由基活性差異是否達到顯著差異水平，本研究首先對表1測定結果進行了方差齊性檢驗，結果顯示鮮樣清除自由基活性測定結果的方差齊性檢驗的P值為0.848 2大于0.05；干樣測定結果的方差齊性檢驗的P值為0.833 6，也大于0.05，表明表1的測定結果隨機誤差較小，可以進行進一步的方差分析。方差分析結果見表2。

從表2的方差分析結果可看出，不同產地苦茶槭樣品的清除自由基活性差異沒有達到顯著性水平，表明安徽省不同產地苦茶槭的清除自由基活性差異不顯著。

結合表1和表2可看出，雖然不同產地苦茶槭樹芽清除自由基活性差異不顯著，但大部分產地都有一些優良單株，如黃山地區的HKu-4植株，其鮮芽對DPPH自由基的半數清除濃度為0.279mg/mL，換算成單位干重樣品的半數清除濃度為0.080mg/mL，其清除自由基活性比5個采樣點的平均值分別高出4.66%和7.50%。在萬佛山和霍山也有一些優良單株，其中霍山大花坪的一株苦茶槭樹（Dku-3）的鮮芽對DPPH自由基的半數清除濃度為0.278mg/mL時，換算成單位干重樣品的半數清除濃度為0.080mg/mL，其清除自由基活性比5個采樣點的平均值分別高出5.04%和7.50%。可見，雖然不同產地苦茶槭樹芽清除自由基活性總體上差異不顯著，人們難以通過產地來源選擇高生物活性皋茶加工原料，但人們仍可以通過優良單株選擇和良種造林培育優質皋茶原料基地，提供優質皋茶加工原料。

3 結論

通過對5個產地25株苦茶槭芽的80%甲醇提取物的自由基清除率比較，發現安徽不同產地苦茶槭的清除自由基活性總體上差異不顯著，可見，在安徽省范圍內，皋茶生產的原料產地不是影響皋茶清除自由基和抗氧化活性的主要因素。但試驗中還發現不同供試單株的自由基清除率有較大差異，在25株采樣單株中，其活性最強單株鮮樣清除自由基活性比最弱者強9.7%，表明高活性單株選擇具有較大潛力，值得擴大范圍進行高活性單株優選研究，提高皋茶原料質量。

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