復方鼻炎寧滴鼻劑的質量控制

盧金鳳，蒲旭峰

(1．成都中醫藥大學藥學院，四川 成都 610072;2．四川省成都市藥品檢驗所，四川 成都 610045)

復方鼻炎寧滴鼻劑由辛夷、甘草等組方，具有通鼻竅、清肝潤肺、解毒宣肺、發散風寒的功效，主要用于急性鼻炎和慢性鼻炎急性發作。辛夷為木蘭科植物望春花、玉蘭或武當玉蘭的干燥花蕾[1]，活性成分木蘭脂素[2]有抗炎[3]、鎮痛、抗過敏反應[4]及抗血小板活性因子的活性作用[5]。甘草為豆科植物甘草、脹果甘草或光果甘草的干燥根及根莖，三萜皂苷(甘草酸)和黃酮類是其主要活性成分[6]。甘草酸主要有抗菌、抗病毒[7]、抗炎[8]、抗變態反應作用，并能增強巨噬細胞吞噬功能和細胞免疫功能[9]，因此，采用高效液相色譜(HPLC)法測定制劑中甘草酸、木蘭脂素含量，可作為復方鼻炎寧滴鼻劑的質量控制方法。

1 儀器與試藥

島津LC-10AT型液相色譜儀;SPD-10A型UV檢測器;Shimadzu Lcsolution色譜工作站;超聲波處理器。甘草酸單銨鹽對照品(批號為110723-200609，供含量檢測用)，木蘭脂素對照品(批號為110801-200724，供含量檢測用)，由中國藥品生物制品檢定所提供;乙腈、四氫呋喃為色譜純，水為高純水，其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2．1 甘草酸

2．1．1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Inertsil ODS-3 柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流動相:乙腈 -0．01 mol/L 磷酸(36∶64);流速:1．0 mL/min;柱溫:35℃;檢測波長:252 nm;進樣量:10 μL。系統適用性試驗結果表明，對照品溶液和供試品溶液均有相應的峰出現，在甘草酸相應的保留時間處陰性對照品溶液無吸收峰，處方中的其他成分不影響甘草酸的含量測定(見圖1)。

圖1 高效液相色譜圖

2．1．2 溶液制備

取甘草酸單銨鹽對照品10 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液(每1 mL含甘草酸單銨鹽對照品0．2 mg，折合甘草酸為0．195 9 mg)。取本品2 mL，加甲醇約45 mL，超聲處理30 min，取出，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。按處方比例根據本品制備工藝，制備不含甘草的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備成陰性對照品溶液。

2．1．3 方法學考察

線性關系考察:精密稱取甘草酸單銨鹽對照品8．66 mg，置25 mL容量瓶中，加適量甲醇超聲使溶解，放冷后加甲醇至刻度，搖勻，即得對照品儲備液。用甲醇分別稀釋至質量濃度為83．136，166．272，249．408，332．544，415．68 μg/mL。精密吸取對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進行分析，以峰面積為縱坐標(Y)、進樣量(μg)為橫坐標(X)繪制標準曲線，回歸方程 Y=548 141 X ＋52 851，r=0．999 1(n=5)。結果表明，甘草酸單銨鹽質量濃度在83．136～415．68 μg/mL范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液10 μL，重復進樣6次，測定峰面積。結果甘草酸峰面積的 RSD為0．74%，表明方法精密度良好。

重現性試驗:取同批樣品，按供試品溶液制備方法制備6份溶液，按上述色譜條件進樣測定。結果甘草酸含量的 RSD為0．26%(n=6)，表明方法重現性良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8 h時進樣10 μL。結果甘草酸峰面積的 RSD為0．24%(n=5)，表明供試品溶液在8 h內穩定。

加樣回收試驗:精密量取2 mL已知含量的復方鼻炎寧滴鼻劑 9 份，分別加入甘草酸單銨鹽對照品 0．8，1．0，1．2 mL，按供試品溶液方法制備，在上述條件下進行含量測定，進樣量10 μL，計算回收率。結果平均回收率99．44%，RSD為0．61%(n=9)。

2．1．4 樣品含量測定

照擬訂的含量測定方法，對3批樣品進行含量測定，結果見表1。以3批樣品平均含量80%作為本品含量的下限，即每1 mL含甘草酸不得低于2．03 mg。

表1 樣品含量測定結果(g/L，n=2)

2．2 木蘭脂素

2．2．1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Diamonsil(鉆石)C18柱(200 mm ×4．6 mm，5 μm);流動相:乙腈-四氫呋喃-水(39∶1∶60);流速:1．0 mL/min;柱溫:35℃;檢測波長:278 nm;進樣量:10 μL。試驗結果表明，對照品溶液和供試品溶液均有相應的峰出現，在木蘭脂素相應的保留時間處陰性對照品溶液無吸收峰，處方中的其他成分不影響木蘭脂素的含量測定(見圖2)。

2．2．2 溶液制備

取木蘭脂素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含木蘭脂素對照品16 μg的溶液，即得對照品溶液。精密吸取本品5 mL，置25 mL容量瓶中，加入乙酸乙酯約20 mL，超聲處理30 min，取出，放冷，再加入乙酸乙酯至刻度，搖勻，萃取，取上層5 mL加入中性氧化鋁柱(100～200目，2 g，內徑9 mm，濕法裝柱，用乙酸乙酯5 mL預洗)，用甲醇15 mL洗脫，收集洗脫液，置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液即得供試品溶液。按處方比例根據本品制備工藝，制備不含辛夷的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備成陰性對照品溶液。

圖2 高效液相色譜圖

2．2．3 方法學考察

線性關系考察:精密稱取木蘭脂素對照品8．40 mg，置l0 mL容量瓶中，加適量甲醇超聲使溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，即得對照品貯備液。用甲醇分別稀釋至質量濃度為:1．68，3．36，8．4，16．8，33．6 μg/mL。精密吸取對照品溶液 10 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進樣分析，測定峰面積，回歸方程為 Y=0．000 2 X-0．007 9，r=0．999 7(n=5)。結果表明，木蘭脂素質量濃度在1．68～33．6 μg/mL范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗:精密吸取同一對照品溶液10 μL，重復進樣6次，測定峰面積。結果木蘭脂素峰面積 RSD為0．49%(n=6)，表明方法精密度良好。

重現性試驗:取同批樣品，按上述供試品溶液的制備方法制備6份溶液，按上述色譜條件進樣測定。結果木蘭脂素含量的RSD為1．11%，表明方法重現性良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8 h 時進樣10 μL。結果木蘭脂素峰面積 RSD為0．35%(n=5)，表明供試品溶液在8 h內穩定。

加樣回收試驗:精密量取2 mL已知含量的復方鼻炎寧滴鼻劑 9 份，分別加入木蘭脂素對照品 0．8，1．0，1．2 mL，按供試品溶液方法制備，在上述條件下進行含量測定，進樣量10 μL，計算回收率。結果平均回收率100．95%，RSD為0．83%(n=9)。

2．2．4 樣品含量測定

按擬訂的含量測定方法，對3批樣品進行含量測定，結果見表1。以3批樣品平均含量的80%作為本品含量的下限，即每1 mL含木蘭脂素不得低于0．334 mg。

3 討論

在制備供試品溶液時，對甘草酸、木蘭脂素的提取溶劑、提取時間、提取方法均進行了考察，優選出最佳制備方法，根據二極管列陣檢測器檢測結果，并參照2010年版《中華人民共和國藥典(一部)》辛夷項下木蘭脂素的測定方法及相關文獻資料[1，10]，選擇278 nm作為檢測波長。并對流動相、色譜柱進行選擇，使保留時間、分離度和理論塔板數達到要求。方法學考察結果表明，方法簡便可行，專屬性好，檢測結果可靠。

[1]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京:中國醫藥科技出版社，2010:89，161．

[2]于宗淵．薄層色譜法鑒別辛夷藥材[J]．中藥材，2004，27(1):23-24．

[3]Li J，Tanaka M，Kurasawa K，et al．Lignan and neolignan derivatives from Magnolia denudate[J]．Chem Pharm Bull，2005，53(2):235-237．

[4]Kim GC，Lee SG，Park BS，et al．Magnoliae flos induces apoptosis of RBL-2H3 cell via mitochondria and caspase．Int Arch Allergy Immunol，2003，131(2):101-110．

[5]Kuroyanagi M，Yoshida K，Yamaoto A，et al．6-oxabicyclo[3．2．2]．nonane type neolignans from Magnolia denudata[J]．Chemical Pharmaceutical Bulletin(Tokyo)，2000，48(6):832-837．

[6]王巧娥，任 虹，曹學麗．甘草研究開發與利用[J]．中國農學通報，2011，27(4):290-295．

[7]Ito A，Hayashi N，Katayama K，et al．Effect of glycyrrhizin on viralreplication and quasispecies in patients with type chronichepatitis[J]．International Hepatology Commuications，1997，50(6):233-238．

[8]Saeedi M，Morteza-Semnani K，Ghoreishi MR．The treatment of topic dermatitiswithlicoricegel[J]．DermatologTreat，2003，14(3):153-157．

[9]蘇俊喜，周 穎，閆文軍，等．甘草有效成分應用研究進展[J]．畜牧與飼料科學，2010，31(8):111-113．

[10]孫文基，謝世昌．天然藥物成分定量分析[M]．北京:中醫藥科技出版社，2003:559．