接骨七厘膠囊質量標準研究＊

蔡步林，龍?zhí)鹛穑嵔瘌P，李文莉

(湖南省食品藥品檢驗研究院，湖南 長沙 410000)

接骨七厘膠囊由乳香、沒藥、當歸、土鱉蟲、骨碎補、硼砂、龍血竭、自然銅和大黃9味中藥組成，具活血化瘀、接骨止痛的作用。現行質量標準中已有硼砂、大黃、龍血竭的薄層色譜鑒別，而乳香等君藥沒有質控指標[1]。采用薄層色譜法對乳香進行了定性鑒別，并采用高效液相色譜法測定骨碎補中柚皮苷的含量，為該制劑的質量控制提供了快速、準確的測定方法，現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型series高效液相色譜儀;CG300型超聲儀。乳香對照藥材(供鑒別用，批號為0970-200202)，柚皮苷對照品(供含量測定用，批號為110722-200610)，均購自中國藥品生物制品檢定所;接骨七厘膠囊由企業(yè)提供(規(guī)格每粒0．26 g)，陰性樣品按處方自制;甲醇為色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2．1 乳香薄層色譜鑒別[2-3]

取本品內容物1 g，研細，加乙醇50 mL，回流提取1 h，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20 mL使溶解，用乙醚振搖提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，揮干，殘渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作為供試品溶液。按處方稱取缺乳香的其他藥材，制成缺乳香的陰性對照樣品，同供試品溶液制備方法制成缺乳香的陰性對照品溶液。另取乳香對照藥材0．2 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，使成條斑，以石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯(10∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，放置2 h后，日光下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同的斑點，缺乳香的陰性對照品溶液色譜中有部分斑點與對照藥材溶液色譜一致，但未見對照藥材溶液色譜中的黃綠色斑點(圖1)，故可作為質量控制指標，并規(guī)定“供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上，應顯相同的黃綠色斑點”。

2．2 柚皮苷含量測定[4-5]

2．2．1 色譜條件

色譜柱:Agilent TC C18柱(250 mm × 4．6 mm，5 μm);流動相:甲醇 -0．1%磷酸(30 ∶70);流速:0．8 mL/min;檢測波長:283 nm;柱溫:35 ℃;進樣量:10 μL。

2．2．2 溶液制備

取柚皮苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含20 μg的溶液，即得對照品溶液。取裝量差異項下的本品內容物(批號為110903)，研細，取約1 g，精密稱定，加水80 mL，置70℃熱水中保溫2 h，離心，取上清液減壓濃縮至約10 mL，轉移至50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得供試品溶液。按處方取除骨碎補外的其余藥材，制成缺骨碎補陰性樣品，照供試品溶液制備方法同法制成缺骨碎補陰性對照品溶液。

2．2．3 方法學考察

系統(tǒng)適用性試驗:分別吸取柚皮苷對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果見圖2。供試品溶液中柚皮苷能基線分離，分離度大于2．0，理論板數按柚皮苷峰計算不低于3 000，陰性對照品溶液在對照品色譜峰相應位置無色譜峰出現，表明樣品中其他成分對柚皮苷測定無干擾。

線性關系考察:精密吸取對照品溶液(21．92 μg/mL)1，2，5，10 μL 和對照品溶液(219．2 μg/mL)1，2，5，10 μL，注入液相色譜儀測定，以峰面積積分值為縱坐標、進樣量為(μg)為橫坐標繪制標準曲線，回歸方程為 Y=2．298 2X＋0．940 7，r=0．999 9(n=6)。結果表明，柚皮苷對照品進樣量在0．021 92～2．192 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:精密吸取同一供對照溶液，依法測定6次。結果峰面積的 RSD為0．8%(n=6)，表明儀器精密度良好。

圖1 乳香薄層色譜圖

圖2 高效液相色譜圖

重復性試驗:取同一批號樣品(批號為110903)，依法制備6份供試品溶液并測定含量。結果平均含量為0．226 mg/粒，RSD為0．9%，重復性好。

穩(wěn)定性試驗:精密吸取同一供試品溶液(批號為110903)，分別于配制后的 0，2，4，6，8，10，12，24 h 時，精密吸取 10 μL，注入液相色譜儀，測定。結果柚皮苷峰面積 RSD為0．5%(n=8)，表明供試品溶液在24 h內基本穩(wěn)定。

加樣回收試驗:取裝量差異項下已知含量的樣品(批號為110903)，研細，取約0．5 g(共6份)，精密稱定，精密加入柚皮苷對照品適量，依法制備供試品溶液，測定并計算。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果(n=6)

2．2．4 樣品含量測定

取3批樣品，分別制備供試品溶液，依法測定并計算含量。結果批號為110901，110902，110903的樣品中每粒含柚皮苷0．25，0．23，0．22 mg。

3 討論

經過不斷摸索試驗，制訂了乳香的鑒別方法。該方法特征斑點明顯，色譜分離清晰，可用作接骨七厘膠囊中乳香的專屬性鑒別。取對照品溶液，照紫外分光光度法在200～390 nm波長范圍內掃描，結果在283．1 nm波長處有最大吸收，并參考2010年版《中國藥典(一部)》骨碎補含量測定項，選擇283 nm作為檢測波長。分別采用甲醇-水(30∶70)、甲醇-0．1%磷酸(30∶70)、乙腈 -水(25∶75)作為流動相，結果表明，甲醇-0．1%磷酸(30∶70)流動相可用于接骨七厘膠囊中柚皮苷的含量測定。

[1]WS3-424(Z-72)-2010Z，國家食品藥品監(jiān)督管理局國家藥品標準[S]．

[2]范 彬．歸附調經顆粒的質量標準研究[J]．中國中醫(yī)藥信息雜志2011，18(11):55-58．

[3]孫 磊．乳香基原的本草學、植物學和成分分析研究[J]．中國中藥雜志，2011，2(36):112-116．

[4]程東巖．HPLC法測定結腸炎奇效顆粒中柚皮苷的含量[J]．中國藥師，2011，14(11):1 620-1 621．

[5]馬才敬．炮制骨碎補的提取及其柚皮苷的純化研究[J]．中國藥業(yè)，2012，2(21):43-44．