免疫親和柱凈化—液相色譜—串聯質譜法同時測定豬肉中6種玉米赤霉醇類化合物殘留量

摘 要：建立了豬肉中6種玉米赤霉醇類化合物殘留量的免疫親和柱凈化液相色譜串聯質譜（IACLCM/M）分析方法酶解后的樣品用乙醚提取提取液濃縮后用三氯甲烷溶解NaO溶液反萃取經免疫親和柱富集和凈化后采用LCM/M進行測定外標法定量在himadzuhimpackVPOC18反相柱上分離梯度洗脫流動相為乙腈和mmol/L乙酸銨溶液；質譜采集為電噴霧負離子多反應監測模式6種目標物的線性范圍為0～00μg/L相關系數（R）大于0999定量限（LOQ）在00～063μg/kg之間；添加濃度在10～0μg/kg范圍內方法回收率為713%～937%相對標準偏差在37%～97%之間該方法靈敏度高、重現性好適用于豬肉樣品中痕量玉米赤霉醇類藥物殘留的測定

關鍵詞：玉米赤霉醇類化合物；液相色譜串聯質譜；免疫親和柱；豬肉

1 引 言

玉米赤霉醇類化合物屬于非甾體同化激素主要包括α玉米赤霉醇、β玉米赤霉醇、α玉米赤霉烯醇、β玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮和玉米赤霉烯酮等是由鐮刀霉菌產生的一類弱雌激素真菌毒素能促進蛋白質的合成提高家禽飼料轉化率和胴體瘦肉率但玉米赤霉醇對促進性激素結合受體等有抑制作用會引起人體性機能紊亂及影響第二性征的正常發育在外部條件誘導下還可能致癌＼1＼因此各國陸續公布法令禁止在畜牧業飼養過程中使用這類激素1996年歐盟禁止將玉米赤霉醇激素類藥物應用于畜禽養殖＼＼我國農業部第3號公告明確規定禁止將玉米赤霉醇用于所有食品動物＼3＼所有可食動物食品中不得檢出

目前玉米赤霉醇類化合物的檢測方法主要有薄層色譜法（LC）＼＼、酶聯免疫法（ELIA）＼＼、氣相色譜質譜法（CM）＼6＼、液相色譜法（PLC）＼7＼及液相色譜串聯質譜法（LCM/M）＼8～10＼等樣品前處理凈化技術主要有液液萃取和固相萃取＼7～10＼其中液液萃取操作繁瑣且需要使用大量有機溶劑；固相萃取凈化常用C18柱和L柱具有使用有機溶劑少、選擇性較強、分離時間短等優點但專屬性差免疫親和柱（ImmunoaffinitycolumnIAC）具有獨特的專屬性、高富集率和良好的凈化效能能顯著提高食品中農獸藥殘留檢測靈敏度＼11～1＼基于LCM/M技術和免疫親和柱的優點本研究建立了采用免疫親和柱凈化LCM/M同時檢測豬肉中6種玉米赤霉醇類化合物殘留量的方法

實驗部分

1 儀器與試劑

LC0A液相色譜（日本himadzu公司）API000串聯質譜儀（美國A公司）；011igital旋轉蒸發儀（德國eidolph公司）；A1000超聲波清洗器（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）；X型振蕩器（江蘇康健醫療用品有限公司）；330臺式高速冷凍離心機（德國igma公司）；ZY11恒溫培養振蕩器（上海智誠分析儀器制造有限公司）；NEVAP116氮氣吹干儀（美國OrganomationAssociates公司）；MilliQ超純水系統（美國Millipore公司）

免疫親和柱（IACEP柱容量10μg1mL北京中檢維康技術有限公司℃冰箱保存）；L固相萃取柱（60mg3mL美國upelco公司）C18固相萃取柱（00mg3mL美國upelco公司）；β葡萄糖苷酸/硫酯酸復合酶（19311units/mL美國igma公司）；乙腈、甲醇（色譜純美國EIA公司）；乙醚、乙酸乙酯、三氯甲烷、氫氧化鈉、乙酸鈉等試劑為分析純；實驗用水均為超純水

α玉米赤霉醇、β玉米赤霉醇、α玉米赤霉烯醇、β玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮和玉米赤霉烯酮標準品純度≥980%均購自美國igma公司

溶液的配制

（1）標準品溶液 分別準確稱取各玉米赤霉醇類標準品適量用甲醇溶解配制成100mg/L的標準儲備液分別吸取各標準儲備液10mL于100mL容量瓶中甲醇定容配制成10mg/L的混合標準溶液（）乙酸鈉緩沖液 稱取680g乙酸鈉用900mL超純水溶解用冰乙酸調至p80并定容至1L（3）磷酸鹽溶液（P） 分別稱取800gNaCl90gNaPO·1O0gPO和00gCl用900mL超純水溶解再用10mol/LNaO溶液調至p7并定容至1L

3 色譜及質譜條件

色譜柱：himadzuhimpackVPOC18（10mm×0mmμm）流動相：A相為乙腈相為mmol/L乙酸銨溶液；梯度洗脫程序：0～0min%A；0～70min%～70%A；70～7min70%～%A；7～80min%A；流速：030mL/min；柱溫：0℃；進樣量：10μL

質譜條件：電噴霧負離子多反應監測檢測（EI-MRM）；電噴霧電壓：