高效液相色譜紫外檢測法同時測定小鼠紅細胞中S—苷甲硫氨酸和S—苷同型半胱氨酸

1 引 言

甲硫氨酸（Methionine，Met）在腺苷轉移酶催化下與ATP反應生成S腺苷甲硫氨酸（SAdenosylmethionine， SAM），SAM是體內最主要的甲基供體，在甲基轉移酶的催化下，參與乙酰膽堿、磷脂類、生物信息大分子DNA和RNA＼[1＼]的甲基代謝。SAM去甲基后形成S腺苷同型半胱氨酸（SAdenosylhomocysteine， SAH），SAH是所有轉甲基酶的強烈抑制劑，SAM與SAH濃度的比值（SAM/SAH）被認為是更能反映甲基化程度的指標＼[2＼]。SAH經水解釋放出腺苷轉變為同型半胱氨酸（Homocysteine， Hcy）。Hcy以N5甲基四氫葉酸為甲基供體，重新合成甲硫氨酸＼[3，4＼]。

葉酸參與獲取及轉運一碳單位的生物代謝，為Hcy合成Met提供甲基。在懷孕前3個月內缺乏葉酸，可引起胎兒神經管發育畸形＼[5＼]。葉酸對人類生殖，尤其是對胚胎著床的影響尚不明確。葉酸缺乏與子宮內膜受體相關基因的表達及甲基化作用機制尚不清楚。本研究構建了葉酸缺乏孕鼠模型，利用此模型研究葉酸缺乏對子宮內膜受體基因及胚胎著床的影響，并以此了解孕鼠體內甲基化水平。

目前，測定血漿中SAM和SAH的方法主要是高效液相色譜質譜法（HPLCMS）＼[6，7＼]和高效液相色譜熒光檢測法（HPLCFD）＼[8，9＼]。其中HPLCMS特異性好，靈敏度高，但價格昂貴，不適合常規分析。HPLCFD法測定血漿中的SAM和SAH，需衍生化，操作繁瑣。在血漿中，SAM和SAH濃度低，高效液相色譜紫外（HPLCUV）檢測法靈敏度達不到檢測要求；而在組織或紅細胞（RBCs）中，SAM和SAH濃度高，可用HPLCUV檢測法＼[10，11＼]進行測定。由于RBCs中SAH含量低，目前已建立的同時測定SAM和SAH的HPLCUV檢測法，樣本用量大，不適合小鼠RBCs樣本測定。本研究建立了HPLCUV檢測法同時測定小鼠RBCs中SAM和SAH，此方法樣本用量少，操作簡單，快速，靈敏，特異，并成功運用于葉酸缺乏和健康小鼠RBCs樣本測定。